干扰素中和性抗体研究进展

<正>干扰素(interferon,IFN)是机体免疫细胞分泌的一种细胞因子,是一种广谱抗病毒剂,它并不直接杀伤或抑制病毒,而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白,从而抑制乙肝病毒的复制。     

TAT-BPI融合蛋白原核表达载体的构建

目的 探讨使BPI能高效率穿透细胞膜或多种屏障,中和不同解剖部位的LPS,构建TAT-BPI原核表达载体并鉴定的方法,为研制多肽抗生素打下基础.方法 人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pUC57后得到pUC57-TAT重组质粒;提取正常人外周血多形核粒细胞总RNA, 采用RT-PCR技术扩增BPI N端cDNA片段,构建pUC57-TAT-BPI克隆载体;用酶切和双脱氧测序法进行鉴定.结果 获得含有约630 bp的TAT-BPI融合蛋白基因片段序列,测序分析与Genebank中该序列相符,同源性分析TAT序列中第10、30位核苷酸有突变,氨基酸同源性为93%,蛋白质同源性为90%,在BPI序列中234、454、495、556位核苷酸有突变,氨基酸同源性为98%,蛋白质同源性为95%.结论 成功构建了TAT-BPI融合蛋白的原核表达载体,为进一步研究BPI的抗菌作用奠定了基础. Abstract： Objective To enable BPI efficiently penetrate the cell membrane or a variety of barriers, and neutralize endotoxin in different anatomical parts, construct and identify a prokaryotic expression vector of TAT-BPI, in order to lay the foundation for new bio-antibiotic development. Methods A synthesized DNA fragment encoding TAT protein transduction domain was inserted into pUC57 vector. Then Total RNA was extracted from human polymorphonuclear neutrophils(PMN) and then the human BPI cDNA gene was amplified by RT-PCR. The PCR product was cloned into pUC57 plasmid and the sequence was confirmed by restriction enzyme digestion and dideoxy-mediated-chain termination. Results Restriction enzyme digestion and DNA sequence analysis revealed that bioactive N-terminal fragment of BPI were not only identical to those of the published human BPI sequence but also were contained in the recombinant vector. Conclusions pUC57-TAT-BPI is successfully constructed, which lays the foundation for studying the protein of BPI.     

阻断病毒抗原提呈途径在免疫逃逸机制中的研究

抗原的加工和提呈在适应免疫应答过程中发挥着中枢作用,是淋巴细胞活化、增生、发挥效应的始动环节,也是启动特异性免疫的关键步骤。病毒抗原肽提呈的过程包括病毒蛋白经胞质中的蛋白酶体降解成抗原多肽,由抗原加工相关转运子( transporter associated with antigen presentation, TAP)转运至内质网( endoplasmic reticulum,ER)腔内,与糖基修饰的主要组织相容性复合体( major histocompatibility complex,MHC)分子共同组成MHC-抗原肽分子复合体,经高尔基复合体（Golgi complex,GC）提呈至细胞表面,被T细胞受体(T cell receptor,TCR)识别,激活特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes,CTL)等一系列反应。     

农村外出务工人员乙型肝炎发病规律及诱发因素的分析

目的探索农村务工中人员乙型肝炎感染率,为进一步控制乙型肝炎的发病与传播打下基础。方法采取试点普查方法,收集986例人群,分别用ELISA法检测患者血清HBsAg和HBsAb,根据年龄不同进行分层分析,最后统计学判断有无显著性差异。结果 986例农村工地人人员普查后发现共调查其中HBsAg阳性者为112人,阳性率为11.36%。子女阳性率:共调查249人,其中阳性感染者23人,阳性率为9.23%。25岁左右达到携带高峰,儿童在8岁左右达到携带的高峰,分别达到13.09%和11.360,出现两个高峰,HBV感染率与文化程度负相关。结论乙型肝炎在农村务工人群有较高感染率,加强乙型肝炎卫生知识的教育,提高经济水平对阻断乙型肝炎的传播和发病有着重要的意义。     

PreS-Tat真核表达载体的构建及表达

目的:构建pEGFP-PreS-Tat嵌合载体并在真核细胞中表达.方法:提取人乙型肝炎病毒并用PCR法扩增出PreS片段,定向克隆入pEGFP-C3载体,在PreS下游连接合成的Tat序列,构建成功的pEGFP-PreS-Tat质粒经脂质体转染Hela细胞,Western blot鉴定目的蛋白的表达.结果:酶切和测序结...     

中国HIV-1 B/C重组毒株不同阶段感染者多聚酶蛋白特异性T淋巴细胞反应的研究

目的 研究中国主要流行的HIV-1 B/C重组毒株不同时期感染者多聚酶蛋白(Pol)特异性T淋巴细胞反应特征并确定主要识别的免疫优势区域.方法 本研究以11例感染时间<18个月和25例感染时间>3年的HIV-1 B/C重组毒株感染者为研究对象,以10例HIV-1阴性健康人作为对照,应用酶联免疫斑点检测技术综合测定了针对覆盖HIV-1 pol基因的249条重叠多肽产生IFN-γ的特异性T淋巴细胞免疫反应.结果 感染时间<18个月感染者中有8(72.73%)名检测到了分泌IUN-γ的HIV-1特异性T淋巴细胞免疫反应,主要识别位于逆转录酶区、氨基酸位置为Pol 481～631内的Pol5581、Pol5582、Pol5587、Pol5609、Pol5610和Pol5615六条多肽,分泌IFN-γ的特异性T淋巴细胞反应广度与外周血CD4+T细胞数呈现明显负相关(P=0.0212,r=-0.762);感染时间>3年感染者中有15(60%)名检测到了分泌IFN-γ的HIV-1特异性T淋巴细胞免疫反应,主要识别位于逆转录酶区、氨基酸位置为Pol241～295内的Pol5521、Pol5525、Pol5526、Pol5531四条多肽和Pol 708～722内的Pol5638多肽,分泌IFN-γ的特异性T淋巴细胞反应强度与病毒载量呈现明显正相关(P=0.006 95,r=0.660);健康人对照组无阳性反应.结论 中国HIV-1 B/C重组毒株不同阶段感染者主要识别多聚酶蛋白的不同区域.     

重型乙型肝炎病毒基因型及HBVDNA CP区基因变异分析

目的探讨重型乙型肝炎患者感染的HBV基因型分布及各型HBVDNACP区变异情况。方法应用乙肝病毒型特异性引物采用巢式PCR方法,对42例重型乙型肝炎患者进行乙型肝炎病毒基因型分析;用PCR方法和DNA测序方法检测CP区突变。结果42例重型乙型肝炎患者中,B基因型12例（28．57％）,c基因型29例（69．05％）,B＋c型1例（2．38％）,未发现其他基因型别;42例患者所感染HBV基因组发生前c区1896点突变有32例（76．19％）,其中,c基因型有28例（87．5％）,B基因型有4例（12．5％）。B型BCP区ntA1762T／ntG1764A双突变3例（25％）,c型BCP区双突变26例（89．66％）,B＋C型（1例）未发生突变结论重型乙型肝炎患者以感染B、c基因型为主,c基因型较B基因型更易发生基因变异。     

中国株乙型肝炎病毒全基因组克隆的制备与鉴定

目的：扩增全长HBV DNA基因组，建立中国株HBV感染性克隆，阐述HBV基因组变异对其不同基因生物学特性影响。方法：TD－PCR和XL－PCR技术一次扩增HBV全长基因组，克隆，PCR、酶切和测序鉴定，结果：通过PCR、酶切，测序鉴定和真核细胞转染分析，获得全长HBV基因组克隆。结论：获得了HBV全基因组克隆，在真核细胞中可以表达HBsAg，为建立HBV感染性克隆奠定物质基础。