人端粒酶逆转录酶RNA干扰对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的研究端粒酶逆转录酶（hTERT）RNA干扰对结肠癌HCT116细胞生物学行为的影响。方法将HCT116细胞分为转染组（转染重组质粒真核表达载体）、对照组（转染空载体质粒）和未转染组。PCR方法检测hTERT干扰序列,RT—PCR方法检测hTERT表达,HE染色、生长曲线和流式细胞术方法分别检测细胞形态、细胞增殖和细胞周期,β-半乳糖苷酶染色方法检测细胞衰老,Annexin V／PI染色流式细胞光度术检测细胞凋亡。结果转染细胞内均存在hTERT干扰序列,hTERT干扰率为21．5％;与未转染细胞相比,转染细胞核质比明显缩小,增殖率显著下降（P〈0．05）,衰老细胞和G2-M期细胞明显增加（P〈0．05）。hTERT干扰显著增加结肠癌细胞凋亡（P〈0．05）,而对照细胞各指标均无显著变化。结论hTERT干扰显著影响结肠癌细胞的生物学行为。     

糖代谢紊乱引起的神经系统特殊症状

糖代谢紊乱分为高血糖和低血糖.临床上指糖尿病和低血糖症.糖尿病神经病变可累及神经系统的任何部分,以周围神经病变最常见.可引起单一神经病变,还可引起多神经受累,以及引起自主神经的病变.低血糖症引起的脑功能障碍,可出现精神不集中、嗜睡、神志不清、运动障碍,最后陷入昏迷,以至死亡.本文就2005年5月～2006年5月我科收治的43例糖代谢紊乱中以神经系统特殊症状表现形式的3例患者报告如下,旨在提高临床工作者对血糖异常引起的神经系统特殊症状的认识,减少误诊.     

胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响

目的 探讨胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响。方法 应用细胞培养、P1染色、流式细胞仪检测的方法，观察胃癌细胞SGC-7901、MKN28、AGS、MKN45经TRAIL作用后细胞周期及细胞凋亡率，western blot方法分析4种胃癌细胞中bel-2和Caspase3的表达。结果 TRAIL300ng／ml作用于胃癌细胞24h后，胃癌细胞MKN28、MKN45、AGS和SGC-790I的凋亡率分别为36．05％、20．27％、16．50％和11．80％。Western blot结果显示MKN28细胞Caspase3的表达高于其它细胞，而bel-2的表达在各细胞间并无明显差别。结论 胃癌细胞对TRAIL的敏感性与Caspase3的高表达有关，而与bel-2的表达无关。     

普通胃镜急诊钳取婴幼儿食管硬币6例分析

婴幼儿食管硬币嵌顿是常见急诊，传统处理方法是紧急外科手术取出，但并发症多，风险大。随着内窥镜的开展和普及，内镜下消化道异物取出技术日臻完善。我院自2008-01／2008—06共收治婴幼儿食管硬币6例，均利用普通胃镜在清醒状态下成功取出，过程顺利。现将操作体会报道如下。     

5-Aza-CdR增强TRAIL对胃癌细胞的抗瘤活性与caspase-8表达的关系

目的探讨5-Aza-CdR对凋亡诱导分子TRAIL抗胃癌细胞活性的影响.方法采用MTT方法检测TRAIL蛋白的抗癌活性;采用RT-PCR方法检测caspase-8 mRNA的表达.结果 TRAIL 200 ng/ml作用72 h对SGc 7901、Kato 3和AGS胃癌细胞的生长抑制率分别为9.83%、11.94%和4.04%;经5-Aza-CdR处理后,对3株胃癌细胞的抑制率分别提高到38.98%、52.42%和30.72%;用5-Aza-CdR处理后3株胃癌细胞caspase-8 mRNA表达明显增加.结论 5-Aza-CdR能增强胃癌细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与caspase-8的表达上调有关.     

人端粒酶逆转录酶干扰对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)干扰对肝癌．HepG2、SMMC-7221细胞生物学形为的影响和对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡的影响。方法将HepG2细胞和SMMC-7721细胞分为转染组 (转染重组质粒真核表达载体)、对照组(转染空载体质粒)和未转染组。采用聚合酶链反应方法检测hTERT干扰序列, 逆转录聚合酶链反应方法检测hTERT表达,HE染色、生长曲线和流式细胞术方法分别检测细胞形态、增殖情况和细胞周期,β-半乳糖苷酶染色方法检测细胞状态,Armexin V／PI染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果转染组细胞内均存在hTERT干扰序列,HepG2和SMMC 7221细胞hTERT干扰率分别为100％和43．3％;与未转染组细胞相比, 转染细胞核质比明显缩小,增殖率下降差异有统计学意义(P<0．05),老化细胞和G2-M期细胞明显增加(P<0．05)。细胞老化率分别由未转染组的0增加到转染组的20．4％,由3．60%,增加到10．O％;G2-M期分别由未转染组的7．1％、6．9％增加到转染组的10．6％、7．9％。hTERT干扰显著增加肝癌细胞凋亡和TRAIL诱导凋亡敏感性(P<0．05)。两株肝癌细胞凋亡率分别由未转染组的3．5％、4．8％增至转染组的5．2%、7．9％;100 ng／ml TRAIL作用24 h后两株肝癌细胞凋亡率分别由未转染组的5．3％、13．9％增加到转染组的10．4％、77．2％,而对照组细胞各指标均无显著变化。结论 hTERT干扰明显影响肝癌细胞的生物学行为,显著增加细胞凋亡和TRAIL诱导凋亡的敏感性。     

对TRAIL耐药的肝癌细胞caspase-8基因甲基化状态及其mRNA表达

目的研究肝癌细胞株HepG2和SMMC 7721对肿瘤坏死因子相关与凋亡诱配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)的敏感性与caspase-8基因启动子区5′CpG岛的甲基化状态和mRNA表达的关系及5′-氮-2′-杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对TRAIL抗癌活性的影响.方法采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR method, MSP)方法检测caspase-8基因5′CpG岛甲基化状态;采用RT-PCR方法检测caspase-8 mRNA表达;采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色方法检测细胞凋亡.结果 2株肝癌细胞均属TRAIL耐药细胞,caspase-8基因5′CpG岛均为非甲基化状态; 5-Aza-CdR即不能增加caspase-8 mRNA表达,亦不能提高肝癌细胞对TRAIL的敏感性.结论肝癌细胞对TRAIL的敏感性与caspase-8基因的甲基化状态及mRNA表达无关,5-Aza-CdR不能提高肝癌细胞对TRAIL的敏感性.     

金葡菌的生长速度和凝固酶活性对巴马小型猪化脓性肝脓肿形成的影响

目的探讨金葡菌的生长速度和外毒素活性对巴马小型猪化脓性肝脓肿形成的影响。方法采用培养时间和菌液OD450吸光度值法描记细菌生长曲线;采用RT-PCR法检测凝固酶(coa)、溶血酶α(hla)和耐热核酸酶A(nuc A)的mRNA表达;采用试管法检测游离凝固酶、溶血法检测游离溶血酶和甲苯胺蓝DNA酶琼脂法检测游离耐热核酸酶的活性。结果金葡菌ATCC29213的生长速度显著快于ATCC 25923。ATCC 29213的凝固酶和耐热核酸酶A mRNA表达量显著高于ATCC 25923,但溶血酶α表达两者无显著性差异。ATCC 29213的游离凝固酶活性显著高于ATCC 25923,但其游离耐热核酸酶和游离溶血酶的活性显著低于ATCC 25923。结论金葡菌ATCC 29213引起巴马小型猪化脓性肝脓肿的机制可能与其生长速度快和游离凝固酶活性高相关。     

hTERT干扰真核表达载体的构建及鉴定

目的构建和鉴定人端粒酶逆转录酶(hTERT)干扰真核表达载体.方法人工合成hTERT干扰序列并定向克隆到siRNA(small interfereace RNA)真核表达载体pSilencer 3.1-H1 neo;采用PCR、酶切和测序鉴定.结果成功构建了hTERT干扰真核表达载体.结论hTERT干扰真核表达载体的构建为进一步研究端粒、端粒酶在肿瘤细胞中的生物学作用奠定了基础.     

反复过度注液扩张技术在面颈部整形中的临床应用

皮肤软组织扩张技术的应用，解决了烧伤、创伤、肿瘤和畸形等手术后的组织缺损。随着扩张器应用范围的扩大和扩张器种类的增加，特别在面颈部的手术治疗中常出现扩张器外露、位置欠佳、剥离腔隙内出血和感染等并发症。如何在提高疗效的同时减少并发症的发生，是临床工作者迫切需要解决的问题。为此，2005年12月-2008年10月，我科应用术中反复过度注液过度扩张技术扩张面颈部软组织28例，并与传统的术中一次性扩张器置入方法比较，治疗效果满意。