宠物重要疫病免疫与监测

宠物疫病特别是人兽共患病严重危害着宠物健康和公共卫生安全.通过对我国宠物疫苗研发和应用现状进行分析,提出关于开展疫苗质量监控技术和免疫抗体检测技术研究,以建立宠物疫苗质量监控体系和免疫抗体监测体系的建议.免疫试纸快速检测技术是一种敏感、快捷的一步法检测技术,适用于多种分析物的快速、低成本即时检测.本实验室建立了抗原、抗体和半抗原3类靶标物的免疫试纸快速检测技术体系,研制成功动物疫病抗原、抗体快速检测试纸系列产品,真正实现了长期以来人们在检测技术领域所追求的"特异、敏感、快速、简便"的目标,为实现动物疫病快速诊断和实时监测提供技术支撑.     

食品中重金属检测方法研究进展

随着经济的快速发展及生活水平的提高,人们对食品质量及卫生安全和自身健康问题越来越重视^[1]。中国每年因重金属污染的粮食达千万吨,美国每年因重金属污染损失在百亿美元以上^[2]。重金属污染问题已对中国的生态环境、食品安全、百姓身体健康和农业可持续发展构成了严重威胁^[3-4]。     

人FcγRⅠ受体胞外区基因的克隆、原核表达及纯化

目的:探讨人FcγRⅠ(huFcγRⅠ)胞外区蛋白的原核表达纯化及其在体外与IgG的结合活性。方法:PCR方法从人的外周血白细胞中扩增出huFcγRⅠORF区全长基因并与T载体链接,从克隆载体huFcγRⅠ-T中扩增huFcγRⅠ胞外区基因,并将其装入原核表达载体pGEX-6p-1。构建好的载体转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导重组蛋白表达,并利用SDS-PAGE和Western blot对表达的蛋白进行鉴定。结果:扩增到了huFcγRⅠ的胞外区基因,所构建的pGEXhuFcγRⅠ重组质粒经PCR和酶切鉴定与预期一致。IPTG诱导下目的蛋白的表达率约为30%。SDS-PAGE结果显示表达的目的相对分子质量(Mr)56 700与理论预期值一致。West-ern blot结果显示原核表达的huFcγRⅠ胞外区蛋白与人IgG特异亲和。结论:FcγRⅠ(huFcγRⅠ)胞外区蛋白在原核表达系统中得到有效的表达,复性蛋白在体外与人的IgG特异结合。     

鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建与鉴定

目的:构建鸡B淋巴细胞cDNAT7噬菌体表达文库并对文库质量进行鉴定。方法:利用oligo(dT)-纤维素亲和层析从SPF雏鸡法氏囊细胞制备mRNA,合成的双链cDNA定向克隆到T7EcoR I/HindIII载体臂,包装并构建cDNA表达文库。对文库进行滴度测定和重组子测定。扩增文库并进行PCR鉴定插入序列的长度及分布。结果:文库初始滴度为5×107pfu/mL,扩增后滴度达到1.88×1010pfu/mL。插入片段平均长度1440bp,主要分布在750～2000bp之间。结论:构建的鸡B淋巴细胞cDNAT7噬菌体表达文库具有很高的质量,为进一步研究鸡B细胞发育以及传染性法氏囊病毒(IBDV)的分子致病机制奠定了实验基础。     

苏丹红Ⅳ和柠檬黄人工抗原的制备与鉴定

目的:制备并鉴定苏丹红Ⅳ和柠檬黄人工抗原.方法:琥珀酸酐法构建苏丹红Ⅳ半抗原;以牛血清蛋白(BSA)为载体,用活性脂法分别与苏丹红Ⅳ半抗原和柠檬黄进行偶联.并用紫外吸收色谱法和电泳凝胶色谱鉴定制备是否成功.结果:经紫外吸收和摩尔吸收系数法估算得到苏丹红Ⅳ与BSA的偶联比31∶1,柠檬黄与BSA的偶联比17∶1.结论:成功制备出苏丹红Ⅳ和柠檬黄的人工抗原.     

蝎毒素对小鼠多种免疫细胞活化的影响

目的:探讨东亚钳蝎毒素(BMK IA)对小鼠体内多种免疫细胞活化的影响.方法:C57BL/6小鼠48只,随机数字表法分为空白对照组和实验组,每组分为4批,每批6只,各检测一种免疫细胞.实验组小鼠一次性静脉注射0.004 mg/kg的BMK IA,对照组给予等体积的生理盐水.流式细胞术分别检测2组小鼠给药0、2、8、12...     

加强我国狂犬病防控

1我国狂犬病形势依然严峻狂犬病俗称疯狗病,是由狂犬病病毒引起的一种重要人兽共患病,病死率高达100%。自1950年以来,我国人狂犬病死亡人数累计已经超过12万例。进入21世纪之     

苯巴比妥单克隆抗体的研制及竞争ELISA血药浓度监测方法的建立

 目的研制苯巴比妥单克隆抗体(PBmAb),建立PB血药浓度竞争ELISA监测方法。方法将PB改造成对氨基苯巴比妥(pAPB),用重氮化法合成免疫原BSA-pAPB并免疫Balb/c小鼠;细胞融合技术筛选PB mAb杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备PB mAb;应用PB mAb研制PB血药浓度监测竞争ELISA试剂盒(PB-Kit),并测定其性能。结果BSA-pAPB偶联成功;筛选出4株杂交瘤细胞,应用其中最好的4E6株制备的PB mAb间接ELISA效价为1∶6.4×10⁵,亲和常数(K_a)为2.08×10¹⁰L·moL^-1,50%抑制浓度(IC₅₀)为9.84μg·L^-1,与巴比妥的交叉反应率(CR)为7.9%,与其他化合物无CR;PB-Kit的检测范围为1.0～128μg·L^-1,灵敏度为0.89μg·L^-1,检测限为1μg·L^-1,血清样添加回收率为94.7%,批内和批间变异系数均<10%;PB-Kit与差示分光光度法(DS)的符合率为100%。结论成功研制出高价、敏感、特异的PB mAb,建立了PB血药浓度竞争ELISA监测方法。     

人心肌肌钙蛋白纯化方法的对比研究

目的比较两种心肌肌钙蛋白纯化方法。方法取意外死亡者心脏,分别采用醇、醚处理和加热处理两种不同方法进行人心肌肌钙蛋白（ＣＴｎＴ）的提取纯化。结果醇醚处理法提取周期较长、步骤繁琐,但经初步纯化后,杂蛋白含量较低,１００ｇ人心室肌组织可提取３５．３ｍｇＣＴｎＴ;加热法步骤简单,提取时间较短,但得率较低,１００ｇ人心室肌组织可提取１１．７９ｍｇＣＴｎＴ,而且粗品内含较多杂蛋白成分。结论两种方法各有优缺点,均能用于人心肌肌钙蛋白的提取和纯化