自制单克隆抗体检测糖尿病大鼠肾脏和心脏糖基化终产物

目的为探讨糖基化终产物在糖尿病慢性并发症发生发展过程中的作用,采用本实验室所制备的7F、5F、8A三株单抗,检测高血压糖尿病大鼠肾脏和心脏糖基化终产物。方法Western blotting分析所制备单抗与对照物(人血清白蛋白、孵育人血清白蛋白和牛血清白蛋白)的交叉反应性及其针对的抗原表位。用所得单抗对糖尿病大鼠肾脏和心脏进行糖基化终产物的免疫组织化学分析。结果所得抗体与糖基化终产物结合能力和特异性较强,初步鉴别其抗原表位非羧甲基赖氨酸。在糖尿病大鼠肾脏和心脏探查到葡萄糖源性糖基化终产物,而正常对照组不明显。结论3株抗糖基化终产物单克隆抗体细胞株具较高抗原特异性,可定性显示组织中的糖基化终产物。     

应用肌钙蛋白评价老年冠心病患者冠状动脉介入治疗时心肌损伤

目的应用血清cTnⅠ和CK-MB对接受PTCA和支架置入治疗的老年冠心病患者进行监测,以评价老年冠心病患者接受介入治疗的安全性。方法比较PTCA和支架置入治疗的32例老年患者和37例非老年患者术前、术后6,12,24,48,72h的血清cTnⅠ和CK-MB水平,进行分组比较。结果PTCA和支架置入后部分cTnⅠ升高(29％,20/69),但老年组和非老年组之间升高的例数和动态变化无区别。和cTnⅠ正常组相比,cTnⅠ升高与球囊扩张总时间及扩张次数有关(P<0.05)。结论PTCA术可对心肌造成一定的损伤,但很微小;cTnⅠ较CK-MB对心肌的微小损伤更敏感,就心肌损伤的发生而言,老年组和非老年组没有区别。     

血清心肌肌钙蛋白I对急性病毒性心肌炎心肌损伤诊断的价值

目的:探讨病毒性心肌炎(VMC)小鼠血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量与心肌组织病理改变的关系,为临床诊断VMC心肌损伤提供依据.方法:用柯萨奇B3亲心肌病毒株(CVB3m)制备小鼠VMC模型;分别于感染病毒后第8、15天及第3个月,观测VMC小鼠血清cTnI含量、心肌坏死病理组织学积分(HSN)和心肌炎症组织学积分(HSI),并探讨其相互关系.结果: VMC小鼠心肌损伤以感染后第8天最为显著(P<0.05),此时血清cTnI含量与HSN(r=0.696,P<0.05)及HSI(r=0.760, P<0.05)之间呈正相关.结论:血清cTnI能确切地反映急性期VMC小鼠心肌损伤的程度,是VMC心肌损伤的可靠而敏感的检测指标.     

扩张型心肌病患者血清自身抗体、心钠素、一氧化氮含量的变化及意义

目的　探讨扩张型心肌病 (DCM)患者血清抗 β1 肾上腺能受体与 M2 胆碱能受体自身抗体水平、心钠素(ANP)和一氧化氮 (NO)含量的变化及意义。方法　用 EL ISA法检测 62例 DCM患者和 76例健康人血清抗β1 肾上腺能受体与 M2 胆碱能受体自身抗体 ;用放射免疫法和硝酸还原酶法测定 40例 DCM患者和 19例健康人血清ANP、NO水平。结果　 (1) DCM患者血清自身抗体的 P/ N值和阳性率明显高于正常对照组 (P<0 .0 5或 0 .0 1) ;(2 ) DCM患者血清 ANP、NO水平亦高于正常对照组 (P<0 .0 5 ) ;(3 )抗β1 抗体阳性组血清 ANP、NO水平高于阴性组 (P<0 .0 5或 0 .0 1) ;(4)抗 M2 抗体阳性组血清 ANP水平高于阴性组 (P<0 .0 1) ,而 NO水平无显著差异 (P>0 .0 5 )。结论　 (1) DCM患者血清中存在高水平的抗β1 和 M2 受体自身抗体、ANP和 NO;(2 )自身抗体有致心肌细胞肥大的作用 ,可能参与 DCM心室重构 ;(3 )抗 β1 和 M2 受体的自身抗体在心室重构中存在不同的信号通路     

自体组织工程化角膜上皮修复角膜缘缺陷症

目的:用组织工程方法构建角膜上皮组织,观察自体工程化角膜上皮修复角膜缘缺陷症的可行性。方法:①实验于2000-01/2003-12在南京医科大学第一临床医学院中心实验室和内分泌科实验室完成。选用新西兰白兔15只,雌雄不拘。用手术方法做成单眼角膜缘缺陷动物模型,为移植实验的受体眼。另一只眼为供体眼。15只兔被随机分为3组:自体角膜上皮移植,羊膜移植组,对照组。②自体角膜上皮移植组:取供体眼角膜缘上皮组织约3mm3,体外培养。对原代培养和传代培养的角膜干细胞进行形态学观察,采用糖原PAS反应鉴定细胞糖原染色;采用免疫组化法鉴定细胞角蛋白AE1表达;对培养细胞进行透射电镜和扫描电镜观察。在去除上皮的保存人羊膜组织上,接种培养细胞,气液界面培养2周构建复层上皮组织。倒置显微镜观察细胞形态和生长特征;组织固定,包埋,切片,染色,观察细胞生长状态和蛋白表达。透射电镜观察超微结构。5只眼成模后4周,受体眼去除角膜浅层新生血管膜,行自体培养角膜上皮移植术。羊膜移植组:5只眼成模后4周,行羊膜移植修复角膜表面;对照组:5只眼成模后不做处理,为模型对照组。③移植实验后7,10,20,30d,分别行裂隙灯显微镜检查,角膜荧光素染色,眼前部照相。并分别处死各组动物,取手术区域角膜组织,甲醛固定,石蜡包埋,病理切片,染色,镜检观察。结果:①培养细胞的生长状态:原代培养48h细胞贴壁,15d左右形成单层。传代培养次日细胞贴壁,10d形成良好的单层。细胞胞体饱满,呈多角形,大小基本一致。②培养细胞的形态学特征:苏木精-伊红染色,细胞呈多角形,核呈长圆形,细胞大小一致,排列整齐。AE1单克隆抗体染色阳性,PAS染色阴性。③培养细胞的超微结构:透射电镜可见培养细胞之间有桥粒连接,缝隙连接。扫描电镜可见细胞表面有微绒毛结构。④羊膜上接种细胞的生长特征:24h细胞贴壁生长,1周左右融合成单层。气液界面培养,细胞透明饱满,均匀成片生长,持续培养2周,细胞呈复层生长。⑤组织工程化角膜上皮形态特征:苏木精-伊红染色,细胞呈多角形,在羊膜上融合成片。组织切片,细胞在羊膜上可达到四五层。透射电镜可见桥粒样结构。⑥自体组织工程化角膜上皮修复实验:自体角膜上皮移植组:移植区角膜上皮细胞覆盖,呈复层排列,基底细胞呈柱状,基底膜完整。基质内有炎性细胞和红细胞浸润。供体角膜未出现临床病理性损伤。羊膜移植组:移植区域表层有上皮细胞覆盖,层次紊乱,极性消失。基质内有炎性细胞和红细胞浸润。对照组:角膜上皮排列紊乱,基底膜不完整,基质内有中性白细胞和红细胞浸润。结论:①角膜干细胞在体外能够培养传代。②培养角膜干细胞在保存人羊膜上能够生长,经气液界面培养,构建出复层上皮组织,与正常角膜上皮组织近似。③自体工程化角膜上皮可用于修复角膜缘缺陷症。     

抗人脑钠肽单克隆抗体的制备及其鉴定

目的：制备抗人脑钠肽单克隆抗体并对其进行初步鉴定。 方法：实验于2004-12／2006-02在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所进行。利用碳化二亚胺法将合成的人脑钠肽与牛血清白蛋白偶联制备完全抗原，反复免疫Balb／c小鼠，应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与Balb／c小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0）在PEG下融合，HAT选择性培养，间接酶联免疫吸附方法对细胞培养上清检测、筛选，选择筛选结果脑钠肽抗体阳性的细胞株连续进行3次亚克隆，建立稳定分泌脑钠肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株。扩大培养阳性单克隆细胞株后，腹腔注射小鼠，制备腹水。对腹水亲和层析纯化，所得的单克隆抗体行初步鉴定。 结果：免疫小鼠血清呈脑钠肽抗体阳性，经筛选得到3株稳定分泌脑钠肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株，纯化的单克隆抗体经鉴定为IgG型，蛋白质印迹分析证实单克隆抗体可特异识别脑钠肽，具备较高的特异性及敏感性。 结论：成功制备了3株抗脑钠肽特异性的单克隆抗体，可用于脑钠肽免疫检测方法的建立。     

心肌肌钙蛋白Ⅰ与心力衰竭

心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌兴奋收缩耦联的主要调节蛋白 ,是肌肉舒缩的分子开关。因其具有高度的组织特异性及检测的敏感性 ,自二十世纪九十年代以来 ,已被作为诊断心肌损伤首选的血清标志物 ,并且在疾病的预后评估中具有重要价值。研究显示收缩蛋白的降解及磷酸化修饰可能在心肌细胞的损伤及功能下降中起重要作用 ,而到目前为止 ,对无症状性心功能不全 ,临床上还没有敏感的诊断方法 ,即使对于明显的心力衰竭患者 ,也缺乏一个判断其心肌损伤程度的指标 ,血清心肌肌钙蛋白I可能会成为一个比较理想的评价心力衰竭患者的指标。同时对肌纤维蛋白结构和功能的研究也为心脏疾病的诊治提供了新的信息 ,其中针对肌纤维设计新药就是一个值得开拓和有应用前景的领域。     

ACE_1对高血压大鼠心肌β受体的影响及保护心肌机制探讨

本实验以血管紧张素转换酶抑制剂(ACE-I)依那普利治疗高血压动物,发现有明显降压效应。在此基础上进行离体工作心脏滋注加去甲肾上腺索损伤,结果表明用依那普利组心输出量升高,CPK 释放减少,心肌B 受体数恢复正常。提示ACE-I 有心肌保护作用,也反映RAA 及交感-儿茶酚胺系统共同参与在高血压发病机制中起重要作用。     

曲美他嗪对慢性心力衰竭大鼠心肌能量代谢及超微结构的影响

目的研究曲美他嗪对异丙肾上腺素诱导的慢性心力衰竭大鼠心肌能量代谢和超微结构的影响。方法72只雄性SD大鼠随机分为对照组(14只)和模型组(58只),模型制备采用皮下多点注射异丙肾上腺素法,4周后模型组大鼠死亡12只,再将存活的46只模型组大鼠随机分为未治疗组(M组,16只)、曲美他嗪治疗组(T组,15只)和培哚普利治疗组(P组,15只)。治疗5周后行二维心脏超声检查和病理形态学观察,并测定心肌组织能量代谢相关指标。结果与M组比较,T组大鼠LVEF、左心室短轴缩短率均提高;光镜和电镜下观察T组和P组心肌损伤程度较M组明显减轻。T组与P组大鼠心肌二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷、ATP/ADP和总腺苷含量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。T组大鼠心肌肌浆网Ca2+-ATPase活性与对照组和P组比较差异无统计学意义。结论曲美他嗪能够改善心力衰竭大鼠心肌能量代谢、病理和超微结构,并且有改善大鼠心功能的趋势。     

急性心肌梗塞后血清、心肌肌酸激酶(CK)及其同功酶(CKMB)动态变化研究

分析临床和实验性心肌梗塞后血清CK 及其同功酶CKMB 和梗塞区与非梗塞区心肌内CKMM、CKMB 含量变化表明;梗塞后48小时或72小时内血清CK、CKMB 呈升高、高峰、下降的动态规律,它们敏感地反映了损伤心肌内酶释放过程。血清CKMB 不受横纹肌损伤因素影响,胸痛发作后72小时内可诊断AMI;对诊断AMI 入院后再次心梗具有很高的特异性(98%)。