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肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化定量检测研究 总被引:3,自引:0,他引:3
背景与目的:APC基因编码的蛋白参与信号转导途径,大量研究证实APC启动子区的高甲基化在肿瘤的发生发展中起重要作用。本研究建立血浆APC基因实时荧光定量甲基化特异性基因扩增(methylation—specific PCR,MSP)检测方法,并对临床肺癌患者血浆进行检测,以确定该方法在肺癌诊断中的应用价值。方法:将APC基因启动子甲基化阳性肺癌细胞株NCI—H460细胞用有限稀释法获取单个集落形成的细胞,以经典的酚一氯仿法提取细胞DNA,并用MSP对APC基因甲基化进行验证,紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200μL健康人血浆中.得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟肺癌及肺癌患者、肺部良性疾病患者和健康对照者血浆中提取DNA,对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰;以模拟血浆样品作为标准品,采用外标准曲线法对各种血浆样品中APC甲基化进行定量分析。结果:所建立的实时荧光定量MSP检测方法的线性范围为1.5×10^2-1.5×10^5拷贝/mL。用该方法检测甲基化肿瘤细胞的DNA其最低检测限为1.5×10^2拷贝/mL。78例肺癌患者有40例组织中检测出APC基因甲基化阳性.其中的19例(47.5%)肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化阳性,APC甲基化浓度为1.67×10^2-6.78×10^3拷贝/mL,中位浓度为1.60×10^3拷贝/mL。38例组织阴性的肺癌患者、31例肺部良性疾病患者和23例健康者的血浆APC基因启动子甲基化均为阴性。结论:实时荧光定量MSP检测血浆APC基因甲基化在肺癌诊断方面具有潜在应用价值。 相似文献
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45.
正常人及大鼠心脏内皮素转换酶的分布 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:了解正常人和大鼠心脏各部分内皮素转换酶(Endothelin-conveerting en-zyme,ECE)的分布。方法:采用半定量RT-PCR法检测ECE mRNA表达,同时根据外源性的巨内皮素-1转变为内皮素-1的量判定ECE活性。结果:正常人心脏各部位心肌均存在ECE,ECEmRNA表达和活性的分布特点一致:心房显著高于心室,左、右心房间及左、右心室和室间隔间无显著性差异。大鼠的ECE mRNA表达和活性分布规律与人相似。结论:正常人和大鼠心脏各组分均存在ECE,且两者的分布规律相似。 相似文献
46.
肥厚型心肌病基因突变与预后的相关性 总被引:1,自引:0,他引:1
【编者按】肥厚型心肌病(HCM)在临床并不少见,其是青少年和运动员心源性猝死的主要原因,应引起广大全科医生的关注。了解基因筛查与HCM预后的关系、超声心动图对HCM早期诊断的作用及HCM的治疗进展对全科医生诊治该病有重要的意义。肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HC 相似文献
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通过正交试验改良放射配基(~(125)I-心得静)结合抑制分析(RBIA),所得的最佳实验条件为孵育温度30℃,缓冲液pH7.4,加血清预孵育40min,加~(125)I-PIN孵育20min;用于监测猪心肌细胞膜免疫BALB/c小鼠的抗β受体抗体应答,其血清中抗体对~(125)I-PIN结合β受体的抑制呈浓度依赖性,且为非竞争性抑制。同时还讨论了RBIA对于测定病人体内循环抗β受体自身抗体的临床应用价值。 相似文献
48.
以[_3H]DHA为放射配基,比较了人、家兔和大鼠血淋巴细胞β-受体与配基结合的若干参数。结果表明,不同种属间淋巴细胞β-受体密度存在差异,依次为家兔(n=9)104.5±19.8 fmol/10~6细胞>大鼠(n=5)68.8±12.3 fmol/10~6细胞>人(n=13)56±8.65 fmol/10~6细胞,(X±SD)。但是三者平衡解离常数Kd值相近,分别为8.39±2.76nM,6.34±2.99nM,6.96±1.62nM(X±SD)。Hill系数均极接近于1。提示,家兔、大鼠和人血淋巴细胞与β受体配基的结合过程属同一类型。兔和大鼠疾病模型中淋巴细胞β受体变化的资料对人类疾病时β受体作用的研究有一定的参考价值。 相似文献
49.
目的:探讨KLOTHO基因第4外显子C-1818T多态性与中国苏皖地区汉族人群急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)的可能关系?方法:应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)及基因芯片(gene microarray)技术对375例ACS患者(ACS组)和235例经相关检查排除冠心病(CAD)者(对照组)进行KLOTHO基因C-1818T多态性的检测?结果:与对照组相比:①ACS患者CC?CT和TT基因型以及T等位基因型频率分布无显著差异;②老年人(≥60岁)?男性和老年男性ACS患者的CT基因型频率均明显升高(P值分别为0.031?0.035和0.041)?在调整相关危险因素并经多元Logistic回归分析后,CT基因型与老年人和老年男性ACS均存在相关关系(P值分别为0.010和0.047),与男性ACS无明显相关关系(P=0.103)?结论:在中国苏皖地区汉族人群中,KLOTHO基因C-1818T多态性CT基因型与老年和老年男性ACS的发病均存在相关性? 相似文献
50.
Theinositol 1,4,5 trisphosphate (IP3)isconsideredasakeysecondmessengeroroneoftheelementsofsignaltransduction .Therapidre leaseofCa2 + fromintracellularCa2 + storingpoolliketheendoplasmicreticulumandthesarcoplas micreticulumthroughtwotypesofintracellularcalciumr… 相似文献