应用Triton-x100加丹参酚酸B制备脱细胞血管支架及其血液相容性研究

应用传统的Triton-x100法与应用Triton-x100和丹参酚酸B法制备脱细胞血管支架,比较这两种支架的理化性质及其血液相容性,展望应用丹参酚酸B后处理脱细胞血管支架在临床上治疗心脑血管疾病方面的应用前景,以及在组织工程血管材料方面的开发空间。选择SD大鼠16只,雄性,鼠龄7周,体质量250 g左右。解剖大鼠,取腹主动脉;随机分为2组,每组8个。用Triton-x100法(Tx组)、Triton-x100加入丹参酚酸B法(Tx-sal 组),加工制成两种脱细胞血管支架。观察脱细胞血管支架的宏观形貌;亲水性实验测定亲水性;体外溶血实验计算体外溶血率;复钙化凝血时间实验测定复钙化凝血时间;血小板黏附实验测定动态凝血时间,以及体外血小板的黏附;补体激活实验测定补体激活程度情况;比较两组脱细胞血管支架的血液相容性。Tx组接触角为76.36°±4.65°,Tx-sal组接触角为71.26°±3.55°,Tx组接触角度数略高于Tx-sal 组,差异无显著统计学意义。Tx-sal 组溶血率为1.5%,Tx组溶血率为2.1%。Tx组复钙化凝血时间为(212±11.32)s,Tx-sal 组复钙化凝血时间为(231±13.53)s,Tx组与Tx-sal 组的复钙化凝血时间差异有显著统计学意义。Tx-sal组相比Tx组延缓了凝血时间,抗凝血性更加优良。Tx-sal 组黏附的血小板数目低于Tx组的相应数目。Tx-sal 组补体激活水平低。与传统的Triton-x100法制备的脱细胞血管支架相比,加入丹参酚酸B后处理的脱细胞血管支架具有更加优良的血液相容性,更适合作为组织工程材料应用于心脑血管疾病的治疗,在临床医学上的应用前景更加广阔。     

离子诱导结合化学交联法制备壳聚糖纳米粒及其作为药物靶向缓释载体的初步研究

 目的 制备粒径相对可控的壳聚糖纳米粒,探索其在药物缓释体系中的应用。方法 以多聚磷酸钠为离子诱导剂、戊二醛为化学交联剂,通过离子诱导结合化学交联法,制备壳聚糖纳米粒;在1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)作用下,分别进行丝裂霉素载药以及聚乙二醇（PEG）,叶酸修饰;另外,对载药纳米粒子进行不同pH条件下的体外释药实验;对PEG,叶酸修饰的壳聚糖纳米粒罗丹明B荧光标记后,进行激光共聚焦以及活体成像实验。结果 离子诱导交联法可以获得粒径范围在200~500 nm的壳聚糖纳米粒;丝裂霉素载药量可以达到25%,包封率为50%,体外释药呈现突释和缓释双相特征,并且随着pH的升高释药明显加快;未经修饰的、叶酸修饰的以及PEG和叶酸修饰的纳米粒都能有效的进入Hela细胞,而单独PEG修饰的却很少进入细胞内;叶酸修饰的纳米粒有明显的靶向作用,PEG修饰的纳米粒可以明显延长实验裸鼠血液中循环时间。结论 采用离子诱导结合化学交联法可以获得粒径可控、稳定、适合于主动靶向给药的壳聚糖纳米粒。     

Densiron 68填充治疗高度近视眼黄斑白色裂孔性视网膜脱离

目的 探讨和评价重硅油（Densiron-68）填充治疗黄斑白色裂孔性视网膜脱离的效果和安全性.方法 对8例伴后巩膜葡萄肿的高度近视眼黄斑白色裂孔性视网膜脱离进行玻璃体手术,剥除前膜,亮蓝染色后行内界膜剥离,注入重硅油,术后6～10周取出重硅油.结果 8只眼中7只眼视网膜复位,黄斑裂孔闭合,6只眼视力提高两行以上,手术后眼压升高3只眼,硅油乳化1只眼,并发白内障2只眼.结论 重硅油填充治疗黄斑白色裂孔性视网膜脱离有较好的效果,也是安全的.     

低强度脉冲超声对浅层关节软骨损伤的作用

目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对浅层关节软骨(p-AC)损伤的作用。方法选择健康日本大耳白兔16只,雌雄不限,体质量2.5～3.3 kg。手术创建兔膝关节p-AC损伤,使用功率30 m W/cm2、脉冲通断比20%、脉冲频率1 kHz、超声固有频率1.5 MHz的LIPUS进行术后处理,每天20 min。于LIPUS处理1周和3周,用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)检测损伤周围软骨组织mRNA的表达;处理6周和12周后,对损伤处进行组织学评估。分离、培养关节软骨细胞并进行LIPUS处理,分别在干预后第1、3、5天,检测软骨细胞的增殖及基因表达情况。结果在该实验参数下,6周和12周实验组和对照组均没有透明样软骨再生,但是对照组的白色纤维组织较多;与对照组相比, LIPUS下调了软骨组织中Ⅰ型胶原的基因表达,但是差异无统计学意义(P 0.05);在第1周时下调Ⅱ型胶原的表达(P=0.046);在第3周时下调蛋白多糖(ACAN)(P=0.017)、SOX9(P=0.001)的表达。组织学病理切片分析发现LIPUS没有促进p-AC修复;但是,与对照组相比,LIPUS对钙化软骨(CC)层与软骨下骨(SB)层有一定的保护作用。最后LIPUS在体外第5天时显著抑制软骨细胞增殖(P=0.002 3),不能促进Ⅱ型胶原和ACAN的表达,但可以下调MMP-13的表达并在第5天时差异有显著统计学意义(P=0.000 036)。结论在该实验条件下,LIPUS对p-AC损伤无明显的修复作用,但具有一定的组织保护和减弱组织退化的作用。     

软骨组织工程进展

本文就软骨组织工程的三维生物材料载体、细胞培养体系及工程化软骨的生物学和临床应用评价的最新进展及该领域研究取得的最新成果，进行较系统的综述，并指出当前组织工程研究面临解决的问题和对未来组织工程研究的展望，为国内组织工程研究提供可利用或借鉴的参考资料     

胆甾醇琥珀酰基壳聚糖锚定脂质体用作表阿霉素载体的体外实验

背景:多糖"锚定"脂质体在抗肿瘤药物、蛋白以及基因的传输领域有着极其重要的理论及应用价值,国外已有较多机构在进行相关的研究.目的:通过"锚定"的方式制备胆甾醇琥珀酰基壳聚糖锚定脂质体,并以表阿霉素作为模型药物,考察其对包载药物体外释放性质的影响.设计、时间及地点:体外实验,于2006-09/2008-05在天津市生物医学材料重点实验室完成.材料:以壳聚糖为原料,合成胆甾醇琥珀酰基壳聚糖,并采用胶体滴定法测定其胆甾醇基取代度.方法:采用pH梯度法制备表阿霉素脂质体,然后通过共孵育的方法合成了取代度为2.80%,5.58%和8.00%的载药胆甾醇琥珀酰基壳聚糖锚定脂质体.主要观察指标:荧光分光光度计检测药物浓度;透射电镜观察脂质体形态;亚微米粒度及电位分析仪检测脂质体的粒径大小、分布和电位;动态透析法考察包载药物表阿霉素在胆甾醇琥珀酰基壳聚糖锚定脂质体中的体外释放特征.结果:胆甾醇琥珀酰基壳聚糖锚定脂质体为规则球状形态,呈现典型的核壳结构,粒径为245.4～279.7nm,zeta电位为 21.09～ 25.48mV;和载药脂质体及壳聚糖包衣脂质体相比,CHCS锚定脂质体能明显延缓表阿霉素的体外释放,在胆甾醇基取代度2.80%～5.85%范围内,表阿霉素的释放速度随着取代度的增加呈降低的趋势.结论:胆甾醇琥珀酰基壳聚糖锚定脂质体有着比普通脂质体及壳聚糖包衣脂质体更高的稳定性,能显著延缓包载药物的释放速度.     

胆固醇改性普鲁兰纳米粒子的制备及其载药性质

背景：多糖引入疏水基团后,在水中能自组装成胶束,可作为疏水小分子药物及生物活性大分子(多肽、蛋白和基因)的载体,在医药和生物技术领域有着潜在的应用价值。 目的：系统考察胆固醇基取代度和普鲁兰多糖相对分子质量对改性普鲁兰纳米粒子性状的影响。 方法：将胆固醇修饰到不同相对分子质量的普鲁兰多糖长链上,合成了一系列取代度不同的胆固醇基-普鲁兰改性多糖,使其在水中自组装成纳米粒子,考察胆固醇取代度及多糖相对分子质量对纳米粒子形态的影响,以阿霉素为模型药物,研究了其在胆固醇基-普鲁兰改性多糖纳米粒子中的包封及体外释放行为。 结果与结论：随着相对分子质量和取代度的增加,粒子稳定性增强,临界胶束质量浓度降低。胆固醇基取代度越低、多糖相对分子质量越大,载药量和包封率越高;当取代度和相对分子质量相同时,随着投料比的增加,载药量增加而包封率降低。体外释放结果表明,相对分子质量越大,粒子越稳定,载药量越高,药物释放越慢。     

膜乳化法制备单分散性载羟基喜树碱缓释微球

目的 研究利用微孔膜乳化法制备载抗癌药10-羟基喜树碱（IqCPT）缓释微球的可行性。方法 以HCPT为模型药物,聚乳酸（PEA）为载体,以膜乳化法制备载药微球,并研究制剂的表面形态、载药率、包封率和缓释效果等性质。结果 膜乳化法制备的载HCPT聚乳酸微球,粒径可控制在1-10μm之间。表面圆整,稳定性、单分散性良好,载药率和包封率最高分别可达32．7％和81．7％,24h体外累积释放量为17．3％。结论 膜乳化法制备的载HCPT微球制剂均匀分散,具有明显缓释效果,是制备缓释微球制剂的较好方法。     

新型两亲性小分子——N-胆固醇基琥珀酰基氨基葡萄糖的合成及其自组装行为的初步研究

目的合成新型的两亲性小分子,并通过新的自组装方法制备其纳米材料。方法用胆固醇对氨基葡萄糖进行疏水改性,使其具有两亲性;用核磁和红外表征目标产物N-胆固醇基琥珀酰基氨基葡萄糖（CSG）的化学结构,结合纳米共沉淀法和超声分散法制备其自组装体,并用扫描电镜、圆二色谱考察其自组装体的性质。结果CSG通过这种新的方法形成具有高轴向比的纳米纤维状自组装体,分子在自组装过程中采取手性排列的方式。结论通过设计分子的化学结构、控制自组装的方法和条件,可以得到先进的纳米材料。     

胶原-壳聚糖复合材料作为组织工程支架的研究

目的 本研究考察壳聚糖对于胶原膜理化性质的影响,选择合适比例的胶原-壳聚糖复合膜作为骨髓间充质干细胞（BMSCs）载体.方法 胶原溶涨液中添加一定比例的壳聚糖,交联并冷冻干燥制备多孔组织工程支架,研究壳聚糖对胶原膜形态学、孔隙率、机械强度、降解特性等理化性质的影响,并初步探讨了胶原-壳聚糖材料作为组织工程三维支架材料与BMSCs的相容性.结果 制备的胶原-壳聚糖支架孔径分布均匀;相对于单纯胶原海绵支架,胶原-壳聚糖复合材料支架降低体外降解速度,提高支架材料的力学性能,稳定支架的结构.BMSCs种植于胶原-壳聚糖（mCol∶mCS=9∶1）支架14 d时,SEM观察到细胞通过微绒毛与支架纤维复合,细胞相容性好.结论 胶原-壳聚糖复合支架有良好的细胞相容性,作为BMSCs诱导体外支架材料具有好的研究前景.