CFA／Ⅰ重组克隆定居因子菌毛抗原的纯化及形态学观察

用基因重组技术获得的高效表达肠毒素大肠杆菌定居日子抗原Ⅰ（ＣＦＡ／Ⅰ）的重组克隆，通过匀浆破碎、硫酸铵分级盐析部分纯化，再经超速离心及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０柱层析，得到了ＣＰＡ／Ⅰ的纯化样品，得率约为０．９ｍｇ／ｇ湿菌。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示一条蛋白质带，其分子量为１５ｋＤａ，与天然ＣＦＡ／Ⅰ相同。免疫扩散和蛋白质印迹试验证明，纯化的重组克隆ＣＦＡ／Ⅰ与天然ＣＦＡ／Ⅰ具有相同的抗原性及免疫原性。并在电镜下观察了ＣＦＡ／Ⅰ的菌毛形态。     

共表达ETEC CFA/Ⅰ、CS6福氏痢疾减毒株与单独表达CFA/Ⅰ及CS6混合疫苗株的免疫原性比较

目的　以减毒志贺菌为载体 ,研制肠毒素大肠杆菌 (enterotoxigenicEscherichiacoli,ETEC)多价疫苗可以有效防治细菌性腹泻。方法　以共表达肠毒素大肠杆菌定居因子CFA/Ⅰ和CS6的重组减毒福氏痢疾疫苗株FWL0 1(pZCF16 )和两种混合的表达CFA/Ⅰ的FWL0 1(pZHY2 1)和表达CS6的FWL0 1(pZLG6 )减毒福氏痢疾疫苗株 ,分别以同等剂量口服免疫BALB/c小鼠 ,比较二者肠毒素大肠杆菌定居因子的免疫效果。结果　免疫BALB/c小鼠全部产生了抗CFA/Ⅰ和CS6的特异性血清抗体IgG和分泌型抗体sIgA ,共表达CFA/Ⅰ、CS6的减毒福氏痢疾菌FWL0 1(pZCF16 )的免疫原性与混合的FWL0 1(pZHY2 1)和FWL0 1(pZLG6 )相似或稍高。结论　在同一菌株可以表达多种菌毛 ,构建ETEC多价疫苗有效可行     

肠毒素性大肠杆菌的粘附素

<正> 肠毒素性大肠杆菌(ETEC)引起腹泻的直接致病机制归因于两种不同的肠毒素:不耐热毒素(LT)和耐热毒素(ST)。近十年来人们对这类细菌在宿主小肠上的定居能力日益重视。细菌的定居能力是由细菌表面上的菌毛为媒介的,人们称它为定居因子(Colonization factor antige CFA)或粘附素(Adhesins)。本文主要就ETEC粘附素的物理生化特性、遗传学及免疫前景作简要综述。 一、粘附素的宿主特异性及与O血清群关系 在引起不同宿主动物腹泻的ETEC中,已经发现了几种重要的粘附素,每种粘附素都有宿主特异性(表1)。发现较早的粘附素是猪源ETEC中的K88和987P,以及牛、羊源ETEC的K99和F41。后来,在引起人腹泻的ETEC中失后发现了CFAⅠ、CFAⅡCFAⅢ和E8775等不同类型的定居因子。近来又在幼     

CS3菌毛在不同载体系统中表达水平的比较

目的：选择合适的载体系统用于CS3菌毛的高水平表达和装配,方法：将CS3操纵子基因分别克隆入pUC19,pTrc99A等载体中,采用全细胞ELISA方法检测CS3菌毛的表达水平,并用SDS－PAGE和电子显微镜技术证实菌毛的表达和组装。结果：CS3菌毛在质粒pUC19中的表达水平明显高于在pTrc99A和pBR322中的表达水平,基因的插入方向对表达影响甚微;SDS－PAGE可看到表达条带,电镜下可观罕到菌毛形成。结论：CS3自身的启动子在表达中起决定作用,质粒拷贝数是影响表达水平的关键因素。     

大肠杆菌表面CS3菌毛展示随机肽库的构建

目的:在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面构建 10肽随机肽库．方法:首先将原有的单酶切CS3菌毛呈现载体改造为双酶切载体,并证实改造后的载体能正确形成CS3菌毛．同时设计合成2条寡核苷酸序列,链1含有1个10肽随机编码序列(NNS)10, 链2可与链1的3′端互补．两条链经过退火、延伸、酶切和回收与经过同样酶切的呈现载体连接,连接产物纯化后分多次电击转化,获得随机肽库．随机挑选10个克隆进行测序并对测序结果进行分析．结果:获得1个库容量为1．8×106大小的随机肽库．测序结果显示,所构建肽库的基本框架与预期设计相符,4个寡核苷酸出现的频率也与理论值相接近．结论:在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面成功构建库容量为1．8×106大小的10肽随机肽库．为下一步利用肽库进行筛选奠定了基础．     

共表达肠毒素大肠杆菌定居因子CFA/Ⅰ、CS6与单独表达CFA/Ⅰ、CS6痢疾载体候选疫苗株的免疫原性比较

目的：评价同一菌株表达多种肠毒素大肠杆菌(ETEC)定居因子时的免疫效果，为构建多价疫苗提供依据。方法：以同等剂量分别口服免疫BALB／c小鼠，比较并评价共表达肠毒素大肠杆菌定居因子CFMI、CS6的减毒弗氏痢疾菌苗株FWL01(pZCF16)与单独表达CFA/Ⅰ的FWL/01(pZHY21)和表达CS6的FWL01(pZLG6)免疫效果。结果：免疫BALB／c小鼠全部产生了抗CFA/Ⅰ和(或)CS6的特异性血清抗体IgG和分泌性抗体sIgA。共表达CFMI、CS6的减毒弗氏痢疾菌苗株FWL01(pZCF16)免疫动物后，血清和黏膜抗体滴度与单独表达CFA/Ⅰ 的FWL01(pZHY21)和表达CS6的FWL01(pZLG6)的免疫效果相似。结论：共表达ETEC CFA／Ⅰ和CS6的减毒弗氏痢疾菌苗株FWL01(pZCF16)能够像单独表达相应抗原的菌苗株一样有效激发机体抗CFA/Ⅰ和CS6的体液及肠道黏膜免疫应答，为构建ETEC多价疫苗奠定了基础。     

肠毒素大肠杆菌定居因子CS6抗原基因在大肠杆菌中的高效表达

目的：构建表达肠毒素大肠杆菌(ETEC)定居因子CS6的重组质粒，并在大肠杆菌DH5d中高效表达。方法：利用基因工程的方法，将含有cS6基因的质粒pMG233用限制性内切酶Cla Ⅰ酶切，得到长约3．1kb的CS6片段(含有cS6结构基因及调控基因的DNA片段)；并与用限制性内切酶Cla Ⅰ酶切的表达载体质粒pBV321连接．得到含有CS6片段的重组质粒pMG235，转化至大肠杆菌DH5a。结果：SDS-PAGE、Western印迹及免疫荧光观察的结果表明，重组菌DH5a／pMG235可高效表达相对分子质量为14600的CS6抗原蛋白，并在重组菌表面表达，表达产物可被抗CS6多克隆抗体识别。结论：重组菌可稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CS6。     

科泰新(R)悬浊液稳定性试验

疟疾在全球尤其是热带亚热带地区广泛流行，是严重威胁人们健康的传染病。疟疾治疗药物在各种不同环境条件下的稳定性将直接影响其治疗效果。为此我们设计了该试验，通过对COTECXIN（Dihydroartemisinin）科泰新（双氢青蒿素）悬浊液在水中28天的稳定性研究分析，我们认为其性状是稳定的。     

幽门螺杆菌治疗性疫苗研究进展

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）被世界卫生组织定为一类致癌因子，由于化学疗法和预防性疫苗的局限性使得幽门螺杆菌的治疗性疫苗研究日益受到重视。目前幽门螺杆菌治疗性疫苗在小鼠动物模型实验中取得了一定疗效，但对灵长类和人类的治疗效果却令人失望。在治疗性疫苗研究中，保护性免疫机制的阐明、保护性抗原筛选和免疫佐剂研究备受关注。由于幽门螺杆菌在长期的进化过程中形成一套独特的机制来抵抗甚至抑制免疫系统，能否高效安全地从寄主体内清除幽门螺杆菌成为该研究的难点和重点，治疗性疫苗和抗生素的联合应用或许是解决这一问题的一个途径。     

内皮素A型受体胞内区cDNA的克隆及序列分析

内皮素Ａ型受体胞内区ｃＤＮＡ的克隆及序列分析研究简报文立民张兆山李淑琴黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京１０００７１内皮素（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ）是一种血管活性多肽，它是迄今所知体内最强烈、最持久的血管收缩因子，它不仅可促进血管收缩，而且可刺激心...