幽门螺杆菌感染动物模型的选择应用

人类疾病动物模型是研究疾病发生、发展、转归及防治的重要工具 ,好的动物模型是筛选药物 ,研制疫苗所不可缺少的关键环节。动物模型的缺乏一度成为该疾病研究的限制因素。近 10年来 ,幽门螺杆菌 (H .pylori)动物模型的建立及应用研究获得了突破性进展 ,先后在悉生小猪、普通小猪、小鼠、大鼠、豚鼠、沙鼠、恒河猴、日本猴、多乳房大鼠、裸鼠、无毛鼠及基因敲除小鼠中成功建立人工感染H .py lori动物模型 ,另外还发现了雪貂、猫等感染各种螺杆菌的自发性动物模型。广泛应用于观察H .pylori感染的致病过程 ;探讨致病机理 ;验证致病因子 ;研…     

豫医无毛小鼠正常肝脏功能指标的测定

对河南医科大学实验动物中心培育的豫医无毛小鼠(YYHL)肝脏功能正常指标进行测定,结果表明所测8项指标中雌雄小鼠间无显著性差异。ALT,AL值高于文献报导的正常昆明鼠。G值偏低,AKP,TBIL,TP与文献报导基本一致,提示豫医无毛小鼠部分肝脏功能指标正常值已发生改变。     

突变系无毛小鼠近交系的繁殖性能观察

目的：观察突变系无毛小鼠近交系的繁殖性能，找出最佳保种方式。方法：从21代到29代分别采用无毛纯合子雄性与有毛杂合子雌性、无毛纯合子雌雄、无毛纯合子雌雄、有毛杂合子雄性与无毛纯合子雌性4种酱方式，对其生产胎数、胎平均产仔数、离乳数、无毛小鼠的生产机率等进行观察统计。结果：前2种交配方式，生育小鼠中均有无毛小鼠，生产胎数以2或3胎为主，平均产仔数和平均离乳率无明显差异，但无毛纯合子雄性与有毛杂合子雌性交配，无毛小鼠的生产机率明显高于有迁杂合子雌雄交配（P＜0.01）。后2种酱方式，无毛纯合子雌性受孕较难，即使受孕，所产仔鼠于生后不久全部死亡，无一存活至离乳日龄。结论：无毛突变系的繁殖保种最好采取无毛基因纯合的雄性（具有繁殖力）和有毛杂合的雌性交配。     

大肠杆菌不耐热肠毒素基因克隆和无毒突变体mLT63的构建及序列分析

目的:大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)是很强的免疫原,也具有很强的粘膜免疫佐剂作用,但LT的毒性限制了它在人类疫苗中使用。本研究希望通过定点诱变构建无毒或减毒并保持LT免疫学特性的突变体。方法:以人源肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌株E.coli44815为研究对象,应用本研究室改进的SDS裂解法小量制备含LT基因的野生大质粒,PCR扩增LT基因,构建重组质粒pNEB193_elt;采用重叠延伸法PCR对LT第63位氨基酸进行体外定点诱变,构建LT突变基因的重组克隆载体,测序并进行序列分析鉴定。结果:采用本研究室改进的SDS裂解法,可成功地小量提取满足扩增模板要求的大质粒;所克隆的LT基因与GenBank公布的一致;定点诱变正确,无非特异性突变。结论:克隆的LT野生基因和定点诱变基因可用于构建重组表达载体,表达重组蛋白,对其粘膜免疫佐剂性或其他相关特性进一步研究。     

分离近交系YYHL小鼠的皮肤移植

利用小鼠皮肤异体移植法研究分离近交系YYHL小鼠F20 的基因纯合性,经100d 观察,受试小鼠均无急、慢性排斥反应发生,全部为永久性接受。结果表明,该突变种群经过20 代的近交培育,组织相容性抗原一致,基因具有高度纯合性,已达到近交系要求     

C_(57)BL/6无毛小鼠皮肤组织学研究

目的：观察Ｃ５７ＢＬ／６无毛小鼠皮肤组织学结构。方法：１０％甲醛固定,行石蜡切片,ＨＥ染色。结果：动物表皮有一层角化过度的角质层,毛干消失,毛球结构不正常,毛囊内为一些角化物质,有的变为空囊腔。真皮深层及皮下组织内含有大量黑色素细胞,并有树突状突起。结论：Ｃ５７ＢＬ／６无毛小鼠真皮深层及皮下组织内含有大量黑色素细胞,可用于黑色素沉着疾病及黑色素瘤的研究。     

无毛小鼠分离近交系的培育

为开发实验小鼠新品系,对河南医科大学发现的突变体无毛小鼠进行近交培育。采用强迫杂合性兄妹交配法繁殖,现已完成23代近交培育。子代突变性状遗传分析和皮肤移植试验结果显示：突变体无毛小鼠已达到近交系标准,突变位点保持了基因杂合状态,建立了携带正常基因和隐性突变基因的无毛小鼠分离近交系。     

亲和层析纯化重组中性粒细胞激活蛋白

目的:直链淀粉树脂亲和层析法分离纯化重组麦芽糖结合蛋白-中性粒细胞激活蛋白(recombinantmaltose-binding protein-neutrophil-activating protein,rMBP-NAP)。用于支气管哮喘模型小鼠进行免疫调节实验。方法:IPTG诱导基因工程菌E.coli TB1(pMAL-c2X-nap)表达rMBP-NAP,离心收获细胞,过柱缓冲液重悬菌体并超声破碎,再次离心取上清和沉淀,SDS-PAGE分析rMBP-NAP可溶性;直链淀粉树脂亲和层析法分离纯化rMBP-NAP;SDS-PAGE凝胶扫描分析纯化后rMBP-NAP纯度;蛋白定量试剂盒测定rMBP-NAP浓度。结果:IPTG诱导工程菌表达的rMBP-NAP主要以可溶性形式存在于超声上清中,相对分子质量约为57 kD,与预期结果一致;亲和层析法纯化rMBP-NAP纯度可达96.5%,浓度可达0.625 g/L。结论:用直链淀粉树脂亲和层析法,可纯化得到高纯度、高浓度的融合蛋白rMBP-NAP。     

白细胞内HBV DNA与HBV血清标志物的关系

对２５０例一般人群血清中ＨＢＶ标志物类型与白细胞内ＨＢＶ ＤＮＡ存在的关系进行了对比观察。结果显示：在ＨＢｓＡｇ及ＨＢｅＡｇ阳性９例中，４例白人ＨＢＶ ＤＮＡ阳性，抗－ＨＢｅ阳性的９例中仅１例白细胞内ＨＢＶ ＤＮＡ阳性。在ＨＢｓＡｇ消失 后产生抗－ＨＢｓ的９６例中有７例白细胞内ＨＢＶ ＤＮＡ阳性。     

白细胞内HBV DNA与HBV血清标志物的关系

对250例一般人群血清中HBV标志物类型与白细胞内HBVDNA存在的关系进行了对比观察。结果显示：在HBsAg及HBeAg阳性9例中，4例白细胞内HBVDNA阳性，抗－HBe阳性的9例中仅1例白细胞内HBVDNA阳性。在HBsAg消失后产生抗－HBs的96例中有7例白细胞内HBVDNA阳性。血清HBV标志物全阴性而斑点杂交白细胞内HBVDNA阳性的2例，经原位杂交检测亦证实白细胞内有HBV阳性颗粒。提示：在人体HBV多器官感染中，白细胞亦是重要感染部位和潜隐场所。