体细胞重编程为干细胞的方法研究与进展

背景：克隆人类胚胎会引起伦理问题,这使科学家寻找替代的方法来逆向分化细胞为多能/全能干细胞,这个过程称为重编程。重编程的新方法是研究者关注的焦点。 目的：探讨重编程技术的研究现状,并对体细胞重编程为干细胞的各种方法做一综述。 方法：应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1983年1月至2006年12月关于重编程的文章,在标题和摘要中以“重编程,方法,体细胞,干细胞,分化”或“reprogramming, method, somatic cell, stem cell, differentiation”为检索词进行检索。选择文章内容与重编程有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。最终选择17篇文献进行综述。 结果与结论：一个多能干细胞重编程状态是细胞结构逐步重构,染色质表观遗传改变,转录表达和转录后调控的结果。靶细胞的重塑要求重编程有一个稳定的状态,最终可以被重新定向到特定的分化程序。有充分的证据表明,细胞鉴定可以被体外操作影响,重编程细胞的命运需要进一步体内检测。     

纯化和标记抗人轻链β2m单克隆抗体的方法

背景:通过杂交瘤细胞株接种小鼠腹腔可获得含大量抗体的腹水,但以往纯化腹水中单克隆抗的方法较复杂,不易操作。 目的：制备、纯化和标记抗人类白细胞抗原Ⅰ类分子轻链的单克隆抗体,以检测肿瘤细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达。 方法：将杂交瘤细胞接种至小鼠腹腔,获得含抗人轻链β2m抗体的腹水,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水,将纯化后的单克隆抗体标记异硫氰酸荧光素(FITC),标记后的抗体用于检测外周血单个核细胞、表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞和白血病K562细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子,并用流式细胞仪和荧光显微镜观察人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达。 结果与结论：纯化后的抗人轻链β2m-FITC单克隆抗体纯度为96%。流式细胞检测结果表明,人类白细胞抗原Ⅰ类分子在外周血单个核细胞表面高表达,在表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞表面低表达,而在白血病K562细胞表面不表达。结果证实,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水以此制备的抗人轻链β2m-FITC能有效区别不同细胞表达人类白细胞抗原Ⅰ类分子的强弱,其纯化方法简便易行。     

干细胞移植治疗慢性肾脏疾病的可行性

背景：慢性肾脏疾病的发病率呈逐年递增趋势，传统血液透析和同种异体肾移植仍是目前仅有的治疗选择。随着以干细胞为基础的再生医学研究的进展，有可能从干细胞的角度找到慢性肾病治疗的理想治疗措施。 目的：就不同来源干细胞治疗慢性肾脏的作用机制及临床应用的可能性等进行综述。 方法：应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中2006-01/2009-12关于干细胞治疗慢性肾病的文章，在标题和摘要中以“胚胎干细胞；骨髓干细胞；诱导性多少能干细胞；慢性肾脏疾病”或“Embryonic stem cells; Bone marrow stem cells; induced pluripotent stem cells；chronic kidney disease”为检索词进行检索。选择文章内容与干细胞治疗慢性肾病相关，同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。初检得到128篇文献，根据纳入标准选择30篇文章进行综述。 结果与结论：多种来源的干细胞具有向肾组织细胞分化的潜能，大量实验研究表明干细胞移植对急性肾损伤修复有积极作用，同时对于肾脏纤维化疾病、终末期肾病的治疗等也有相关研究报道。通过对干细胞相关特性的描述及干细胞治疗肾病的相关机制的研究，希望能通过新的方法治疗慢性肾病。     

绿色荧光蛋白转基因雄鼠肝细胞移植重建雌鼠的造血功能研究

目的 用荧光雄鼠的肝细胞回输半致死量射线照射的C57BL雌鼠,观察肝细胞是否有重建造血功能的作用.方法 用荧光雄鼠的肝细胞回输给半致死量射线照射的C57BL雌鼠,在移植后18、39和53 d剪鼠尾,采血并用CD4-PE和CD8-PE标记,再用氯化铵溶血,上流式细胞仪检测.移植87 d后杀鼠取骨髓用荧光原位杂交检测Y染色体阳性细胞的百分比,并取外周血、脾细胞、肝细胞和骨髓细胞检测绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞的百分比.结果 回输肝细胞的雌鼠外周血中检测到GFP阳性细胞,同时检测到一部分GFP阳性细胞转化成了CD4+或CD8+T细胞,外周血中GFP阳性细胞的比例与荧光原位杂交分析的骨髓中的Y染色体阳性比例呈正相关.同时在鼠的脾细胞、肝细胞和骨髓细胞中都检测到了GFP阳性细胞.而脾细胞中检测到的GFP阳性细胞百分比高于其他细胞,相比有统计学意义(P =0.003).结论 成年鼠肝细胞含有一定量的造血干细胞,在移植鼠体内存活并分布在多脏器,重建了雌鼠的造血功能.     

猕猴自体骨髓CD133+细胞肝门静脉移植治疗肝损伤的实验研究

目的探讨自体CD133 细胞肝门静脉移植对猕猴肝损伤的治疗意义,为人类肝损伤治疗提供新技术。方法猕猴每日皮下注射40?L40.5ml/kg复制肝损伤模型后连续饲喂高脂饲料,经肝功能生化指标检测及肝穿组织病理学观察确认肝损伤后,免疫磁珠法分离自体骨髓CD133 细胞,按3×105细胞/kg将细胞植入肝门静脉,植入后60d进行肝功能相关指标检测及组织病理学观察。结果连续注射CCL44d后,血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、球蛋白(GLOB)均显著升高,而总蛋白(TP)和白蛋白含量无变化(P>0.05),肝组织结构紊乱,部分肝细胞水肿、变性和坏死,汇管区及周围有大量炎性细胞浸润。第二次肝门静脉细胞移植后30d,血清AST、ALT活性和GLOB、BIL含量显著低于对照组(P<0.05),而TP、ALB、LDL含量高于对照组(P<0.05),治疗组肝组织结构清楚,而对照组有部分纤维增生和肝细胞有脂肪变性。结论自体CD133 细胞肝门静脉移植能有效促进肝损伤修复和阻止猕猴肝损伤的发展,改善猕猴肝组织结构和功能。     

环磷酰胺对喉癌Hep-2细胞端粒酶活性及p16表达的影响

目的 观察环磷酰胺对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞端粒酶活性及其p16表达的影响，以揭示环磷酰胺的抗癌机制。方法 运用体外细胞培养、端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)及流式细胞技术观察、分析不同浓度的环磷酰胺作用72h的Hep-2细胞。结果 环磷酰胺能以浓度依赖方式下调端粒酶活性并诱导细胞p16基因的表达增强。端粒酶活性下调与p16基因表达紧密相关。结论 环磷酰胺能下调端粒酶活性、诱导细胞增强p16的表达，这可能是环磷酰胺抗癌作用的重要机制之一。     

细胞免疫激活对杀伤细胞抑制性受体(KIR) P58+细胞的影响

本研究的目的是观察细胞免疫激活对P5 8基因表达的影响 ,探讨免疫激活与抑制的相互调节关系 ,为临床干细胞移植后的移植物抗宿主病 (GVHD)防治提供理论依据。用IL 2 ,膜抗原 (LP)和ConA分别或联合与人外周血单个核细胞培养 72小时 ,流式细胞术分析单个核细胞中总P5 8.1+ ,P5 8.2 + 细胞及CD3+ ,CD4 + ,CD8+ 和CD16 + CD5 6 + 细胞亚群中的P5 8.1+ 和P5 8.2 + 细胞比率变化。结果发现 ,IL 2 ,LP和ConA分别均可使CD3+ ,CD4 + ,CD8+ 和CD16 + CD5 6 +细胞比率增加 (P <0 .0 1) ,IL 2 ,LP和ConA联合与人外周血单个核细胞培养 72小时有协同刺激P5 8基因表达的作用 (P <0 .0 5 )。结论 :IL 2 ,LP和ConA均可在激活细胞免疫的同时刺激P5 8基因表达或P5 8.1+ 和P5 8.2 + 细胞增殖 ,表明P5 8基因的表达受免疫激活因子调控 ,存在激活诱导表达机制。     

蜂胶乙醇提取物降低肝星状细胞活化、增殖和胶原合成

肝纤维化是多种病因所致慢性肝损伤以后的共同结局。近几年的基础研究表明肝星状细胞 (HSC)在肝纤维化的病理生理过程中起着关键作用。我们建立了用HSC筛选药物的方法 ,并观察到蜂胶乙醇提取物 (EEP)具有降低HSC活化、增殖和胶原合成的作用。材料与方法一、材料Wistar大鼠由我院动物中心提供 ;蜂胶产自云南省嵩明县 ,经云南农业大学鉴定为优质蜂胶 ;α SMA免疫组织化学试剂购自晶美公司 ,3 H TdR和3 H Pro购自中国原子能研究所 ;其余试剂均为分析纯试剂。二、方法(一 )EEP的制备　 10 0 g蜂胶于低温粉碎以后 ,加 5 0 0mL80 %乙醇…