川楝素与γδ T细胞协同抗结直肠癌的作用及机制研究

目的:探讨γδT细胞对结直肠癌细胞的杀伤活性,并研究川楝素对γδT细胞的协同效应。方法:体外培养人γδT细胞并用流式细胞术进行鉴定。乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测γδT细胞和川楝素对人结直肠癌SW480细胞的杀伤活性。Western blot实验检测川楝素对SW480细胞中Bcl-2、Bcl-x L和MCL-1表达水平的影响。ELISA实验检测川楝素是否影响γδT细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和Fas配体(Fas L)的分泌。流式细胞术检测川楝素和γδT细胞处理后SW480细胞的线粒体膜电位和凋亡情况。Western blot实验检测川楝素和γδT细胞处理后SW480细胞caspase-9和caspase-3的活化。结果:体外培养的γδT细胞高表达CD3和γδT细胞受体(TCR)。川楝素处理能显著增强γδT细胞对SW480的杀伤活性。川楝素不影响γδT细胞TRAIL和Fas L的表达。川楝素不影响SW480细胞中Bcl-2和Bcl-x L的蛋白水平但显著抑制MCL-1的表达。转染MCL-1质粒能显著抑制川楝素对γδT细胞的协同效应。川楝素通过抑制MCL-1的表达促进γδT细胞对SW480细胞线粒体膜电位的损伤和凋亡的诱导。川楝素通过抑制SW480细胞MCL-1的表达促进γδT细胞对SW480细胞caspase-9和caspase-3的活化。结论:川楝素通过抑制MCL-1的表达发挥对γδT细胞的协同抗结直肠癌作用。     

长期使用开塞露对排便障碍的影响及可能机制

目的研究长期使用开塞露对排便障碍的影响及可能的机制。方法收集2017年6月至2019年6月在浙江省立同德医院肛肠外科就诊的排便梗阻综合征（ODS）患者63例,其中长期使用开塞露的30例患者纳入观察组,未曾使用或基本不使用开塞露的33例患者纳入对照组。比较两组患者肛门指检、便秘症状评分、排粪造影、盆底肌电图检查结果,并探讨开塞露影响肛门功能的可能机制。结果观察组患者肛门指检提肛肌松弛障碍发生率、排便频率评分、排便费力评分、用力排便相肛直角度数变小发生率均高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）。结论便秘患者长期使用开塞露可导致肛肠环（耻骨直肠肌）在用力排便时出现痉挛、僵硬或反常收缩等松弛障碍现象,并加重患者的便秘症状。     

生物反馈联合护理干预治疗维持性血液透析患者便秘的疗效观察

维持性血液透析（MHD）是尿毒症患者主要的替代疗法,能明显提高尿毒症患者的长期生存率。但MHD也存在许多并发症,其中最常见的是便秘,发生率在70%以上[1],严重影响患者的透析质量和生活质量。生物反馈（BF）是一种新兴的生物行为治疗方法,其治疗便秘的有效率在69%以上[2],而综合的护理干预可以提高便秘患者BF的远期疗效[3]。近年来,我院血液净化中心及肛肠科应用BF技术联合护理干预对25例MHD便秘患者进行治疗,取得良好效果,现报道如下。     

雷公藤红素促进RIP1蛋白的去泛素化增强TNF-α对结肠癌细胞的凋亡诱导活性的研究

目的 探讨中药活性成分雷公藤红素对TNF-α体外抗结肠癌活性的影响并研究其机制。方法 用雷公藤红素联合TNF-α体外治疗结肠癌细胞系SW480,MTT法检测SW480细胞的细胞活力。SW480细胞用雷公藤红素联合TNF-α治疗后,Annexin V/PI染色法检测细胞的凋亡,Western blot法检测细胞caspase-8、caspase-9和caspase-3的活化和对CYLD蛋白表达的影响,并用免疫共沉淀法检测SW480细胞RIP1蛋白的泛素化水平。结果 雷公藤红素联合TNF-α对结肠癌细胞系SW480的细胞活力抑制率和凋亡诱导活性均显著高于雷公藤红素及TNF-α单治疗组。雷公藤红素联合TNF-α对SW480细胞caspase-8、caspase-9和caspase-3的活化显著高于雷公藤红素及TNF-α单治疗组,且两者联合治疗后,caspase-8的活化时间显著早于caspase-9和caspase-3。SW480细胞用雷公藤红素联合TNF-α治疗后,其RIP1蛋白的泛素化水平显著低于雷公藤红素及TNF-α单治疗组。进一步研究发现,雷公藤红素能显著诱导SW480细胞CYLD蛋白的表达,而TNF-α对CYLD的表达水平无影响,当用小干扰RNA沉默CYLD的表达后,雷公藤红素对TNF-α的协同效应丧失。结论 雷公藤红素通过促进RIP1蛋白的去泛素化增强TNF-α对结肠癌细胞的凋亡诱导活性。     

硝苯地平在混合痔术后水肿治疗中的应用

目的探求混合痔术后消退水肿的有效方法。方法采用多中心、开放、随机对照的方法,将混合痔术后水肿的患者分成3组进行不同的处理,其中研究组采用10%氯化钠溶液配制的0.3%硝苯地平溶液局部湿敷加肛周局部按摩,同时结合传统方法(先熏蒸,待温度降至41～42℃时,再将肛门浸入温水10～15min;局部红外线照射2次/d,15min/次)进行处理。对照1组采用传统方法处理。对照2组采用肛周局部按摩结合传统方法进行处理。结果3组患者治疗后轻度水肿消退时间间差别无显著性意义(P>0.05),研究组中、重度水肿患者水肿消退时间明显短于对照组。结论传统方法加硝苯地平溶液局部湿敷及肛周局部按摩对混合痔术后中、重度水肿的消退有效。     

MCL-1 siRNA通过线粒体凋亡途径部分逆转耐顺铂结肠癌细胞系SW480的耐药性

目的 探讨顺铂耐药结肠癌细胞的MCL-1表达水平与顺铂耐药性的关系。方法 用MTT法检测顺铂耐药结肠癌细胞系SW480(SW480-R)对顺铂的敏感性。通过检测siRNA下调SW480-R 细胞MCL-1的表达作用观察其对细胞耐药性的影响。Western blot试验检测SW480-R 细胞Bcl-2家族蛋白及线粒体来源促凋亡因子的表达水平。Annexin V/PI染色检测SW480-R 细胞的凋亡。结果 SW480-R细胞相比于常规SW480细胞对顺铂的敏感性显著下降,western blot结果表明SW480-R细胞的MCL-1水平显著上调而其他Bcl-2蛋白家族成员(Bcl-2,Bcl-xl,BIM,BAK,BAX)表达水平变化不明显。体外转染MCL-1 siRNA能逆转SW480-R细胞的耐药性,提高顺铂对SW480-R的杀伤活性。在SW480-R细胞中,MCL-1 siRNA能促进线粒体来源的促凋亡因子(细胞色素C、凋亡诱导因子、Smac/DIABLO)在顺铂治疗下从线粒体中释放到细胞质中,进而诱导耐药肿瘤细胞发生凋亡。结论 MCL-1的高表达可能是结肠癌细胞产生顺铂耐药性的重要机制,MCL-1基因沉默能通过线粒体凋亡途径逆转耐顺铂结肠癌细胞系SW480的耐药性。     

无淋巴结转移的结直肠癌患者淋巴结切除数目对预后的影响

结直肠癌是我国最常见的癌症死亡原因之一。术中切除的淋巴结数目与结直肠癌患者的预后密切相关,特别是对无淋巴结转移的患者具有重要的临床意义。其机制可能包括淋巴结错误病理分期及淋巴结微转移等。因此,术中规范地进行淋巴结清扫,术后对高危患者进行强化治疗,提高微转移检测手段等对结直肠癌患者的预后具有重要作用。     

人胃癌、大肠癌中CD44 v6表达的研究

应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法及免疫组化染色 (IHC)法检测CD4 4v6在胃癌、大肠癌中的表达与淋巴结转移、远处转移的关系 ,旨在探讨CD4 4v6在胃、大肠癌发展、转移中的作用。一、材料与方法1.材料 :4 4例胃癌和 76例大肠癌组织标本及正常黏膜标本取自手术切除标本。胃癌标本男 30例 ,女 14例 ,平均5 8.1岁 ,其中有淋巴结转移 30例 ;远处转移 14例。大肠癌标本男 4 6例 ,女 30例 ,平均 5 8.9岁 ,其中大肠癌 2 5例 ,直肠癌 5 1例 ;有淋巴结转移 31例 ,远处转移 13例。正常组织为距癌 10cm以上的组织。2 .试剂 :CD4 4v6引物序列…     

促纤维增生性小圆细胞肿瘤二例

例1男，34岁，体重66k，因“发现左腹部肿块20余d”于2005年2月25日入院。体检：肝肋下7cm、剑突下10cm，质硬、无压痛、表面粗糙、可扪及结节，两侧下腹可扪及15cm×10cm×7cm大小肿块，质硬表面不平整，固定，边界清楚，无压痛。实验室检查：白细胞5．0×10^9／L，中性粒细胞0．78，血红蛋白121g/L．丙氨酸转氨酶16U／L，血肌酐67μmol／L．尿素氮1．7mmol／L。人院后肿块穿刺病理检查：[第一段]     

MiR-19反义核酸与CD133+HT29细胞亚群对多柔比星敏感性关系的研究

目的 探讨miR-19反义核酸与CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星敏感性的关系并研究其机制。方法 用RT-qPCR方法检测miR-19在结直肠癌细胞中的表达水平。流式细胞术检测miR-19反义核酸和多柔比星对HT29细胞系的CD133⁺细胞亚群种群比例的影响。MTT法检测miR-19反义核酸对多柔比星杀伤CD133⁺HT29细胞亚群能力的影响。利用生物信息学及Western blot法验证miR-19是否调节CD133⁺HT29细胞亚群中PTEN的表达。运用Western blot、免疫共沉淀、流式细胞术研究miR-19反义核酸影响多柔比星疗效的信号通路。结果 结直肠癌细胞系的miR-19表达水平显著高于正常结直肠上皮细胞系,并且CD133⁺细胞中的miR-19表达水平显著高于常规结直肠癌细胞。多柔比星体外单独治疗能提高HT29细胞系中CD133⁺细胞亚群的比例,然而联用miR-19反义核酸后CD133⁺HT29细胞亚群的种群比例显著下降。MTT结果表明miR-19反义核酸可显著增强多柔比星对CD133⁺HT29细胞亚群的杀伤活性。Western blot实验表明miR-19的靶基因可能为PTEN。MiR-19反义核酸可显著抑制CD133⁺HT29细胞亚群PI3K、AKT和Bad的磷酸化,增强Bad与Bcl-2和Bcl-xl的结合,从而提高CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星依赖的凋亡信号的敏感性,促进caspase-9和caspase-3的活化。结论 MiR-19反义核酸通过PTEN/PI3K/AKT/Bad途径提高CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星的敏感性。