经脐单孔腹腔镜精索静脉高位结扎术与传统腹腔镜手术的对比研究

目的探讨经脐单孔腹腔镜精索静脉高位结扎术的可行性及效果。方法 20例双侧精索静脉曲张患者随机分为经脐单孔腹腔镜精索静脉高位结扎术组和传统腹腔镜手术组,每组10例,对比两组的手术时间、术野情况及手术并发症等。结果 20例手术均获成功,无明显并发症。传统腹腔镜手术时间、手术术野等优于单孔腹腔镜手术。结论经脐单孔腹腔镜精索静脉高位结扎术是安全可行的,操作难度较常规腹腔镜精索静脉高位结扎术复杂、手术时间长,但手术伤口小,术后瘢痕隐蔽。     

女性膀胱癌腹腔镜根治性切除原位回肠新膀胱术术式改进

目的 探讨并改进腹腔镜女性膀胱癌根治性切除-原位回肠新膀胱术的手术方法,随访观察其治疗效果.方法 2003年2月至2008年9月,为19例女性膀胱癌患者施行了腹腔镜膀胱全切除-原位回肠新膀胱术,其中13例同时行子宫、卵巢及附件切除,6例行保留子宫、卵巢附件.主要手术步骤为:①行标准盆腔淋巴结清扫,②行膀胱全切除同时切除或不切除内生殖器,③在下腹正中线上作4～5 cm切口,取出标本,并构建"M"形去管回肠储尿囊,④输尿管末端形成半乳头,"插入式"种植于储尿囊;⑤储尿囊回纳腹腔,在腹腔镜下作储尿囊与尿道吻合.术后记录围手术期情况,并对患者进行定期随访,了解患者的生活质量、排尿情况,并检测患者的残余尿量、新膀胱压力等.结果 手术时间(340.5±43.1)min,术中出血(353.9±71.3)ml.术后随访2～69个月,半年内均能自主排尿,1例日间偶有尿失禁,2例夜间尿失禁,3例排尿困难.膀胱容量(333.6±45.4)ml,残余尿量0～210(41.2±18.1)ml.术后半年至1年,行静脉尿路造影,除1例单侧肾积液外,其余双肾显影良好,未见肾盂输尿管扩张.膀胱尿道造影,可见膀胱位于盆腔,其形状大小位置于正常膀胱相似,未见膀胱输尿管反流.术后输尿管新膀胱吻合口梗阻1例,新膀胱阴道瘘1例,肿瘤远处转移2例于随访期间死亡.结论 腹腔镜女性膀胱全切除-原位回肠新膀胱术,技术上可行,可根据患者情况采用保留或切除内生殖器的手术方法,术中出血较少,创伤较小,术后大部分患者能自主排尿,但尿失禁及排尿困难发生率略高于男性,术后中远期新膀胱功能及肿瘤根治效果还需进一步临床观察.     

前列腺癌中L-plastin启动子的非甾体激素类顺式作用元件的鉴定

目的:寻找前列腺癌中L-p lastin启动子的非甾体激素类顺式作用元件序列,并鉴定其相应的转录因子与调控途径。方法:在切除L-p lastin启动子中甾体类激素受体位点并建立相应的荧光素酶重组子的基础上,利用外切酶行巢式切除法分段切除L-p lastin启动子基因序列,并建立相应的荧光素酶重组子,检测切除各启动子序列片段后有雄激素刺激组和无雄激素刺激组的荧光素酶活性,寻找调控L-p lastin表达的非甾体激素类启动子基因序列所在位置,通过Transfect软件分析寻找对应的转录因子,再通过定点突变技术切除转录因子的结合位点并进一步进行荧光素酶活性测定,从而获得调控L-p lastin表达的非甾体激素类途径。结果:成功分段切除了L-p lastin启动子,并建立了相应的荧光素酶重组子,转染细胞后在有及无双氢睾酮刺激下检测荧光素酶活性,发现在-206~1片段存在明显的非甾体激素受体类的调控途径,通过软件分析发现AP-4和SP-1可以与该片段结合。切除AP-4和SP-1位点后,荧光素酶活性下降,以AP-4尤为明显。结论:在L-p lastin启动子中,除了甾体类激素受体途径,仍然存在其他非甾体类调控途径,该调控途径的结合位点主要在-206~1之间,可能是通过AP-4和SP-1与该片段的启动子基因序列结合来上调L-p lastin基因表达的。     

两种腹腔镜下膀胱尿道吻合训练模型的比较

目的 与鸡皮模型对比,验证利用鸡躯干、泄殖腔和猪大肠构建的新型腹腔镜下膀胱尿道吻合训练模型的训练功效. 方法 采用鸡的后半部躯干模拟人盆腔,3 mm泄殖腔残端模拟人尿道残端,15 cm猪结肠段模拟人膀胱或新膀胱.材料置人腹腔镜训练箱中,运用腹腔镜器械进行腹腔镜下膀胱尿道间断性吻合的模拟训练.40名无腹腔镜手术经验的学员随机分为2组.A组20名,采用新模型训练8 h;B组20名,采用鸡皮模型训练8 h.训练前、后采用动物模型测试学员完成腹腔镜下膀胱尿道吻合的时间和质量. 结果 与鸡皮模型相比,新型训练模型更好地模拟了人盆腔、尿道残端和膀胱、新膀胱的形态、结构和性状.训练后2组在测试中完成速度[实验组:(64±11)min与(123±20)min,P＜0.05;对照组:(77±12)min与(121±17)min,P＜0.05]和吻合质量(实验组:8.8±1.0与3.8±1. 2,P＜0.05;对照组:7.7±0.9与3.7±1.1,P＜0.05)均有较大提高,而训练后实验组学员比对照组所需的完成时间更短(P＜0.05),吻合质量更高(P＜0.05). 结论 新型腹腔镜下膀胱尿道吻合训练模型能有效帮助泌尿外科医生掌握腹腔镜下膀胱尿道吻合技术,提高腹腔镜下缝合技巧.     

p65基因序列shRNA慢病毒载体构建及其作用功能的初步研究

目的 建立稳定阻断前列腺癌细胞株LNCaP中核因子NF-κB(p65)表达的shRNA序列,构建慢病毒载体,检测p65在前列腺癌细胞中的作用功能.方法 根据p65基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3针对p65基因cds区的siRNA序列,组建shRNA对应的4对互补单链DNA将合成的序列插入空载体pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector中转染前列腺癌细胞,采用RTPCR方法检测不同序列片断对p65 mRNA的抑制效率,免疫印迹方法检测其对p65蛋白表达的抑制效率.将获得的慢病毒载体感染LNCaP细胞,设对照组、空转组.采用MTT、流式细胞术、Transwell等方法检测p65的生物学作用.结果 设计的3条针对p65序列中,第3条序列对前列腺癌细胞株中p65 mRNA的干扰效率为59%,对蛋白表达的抑制率达81%.目的序列位于p65(NM_021975)的1096～1113,茎环序列为5'-GATCC GCCCTATCCCTTTACGTCATTCAAGAGAT-GACGTAAAGGGATAGGGCTTTTTG-3'.转染细胞后,细胞可以稳定低表达p65.MTT检测实验组细胞96 h内未出现对数增殖,生长能力低于对照组和空转组.流式细胞检测实验组G0～G1期细胞百分率为61.49%,高于对照组的44.89%和空转组的41.52%;而S期细胞百分率为28.58%,低于对照组的47.36%和空转组的46.10%,差异有统计学意义(P＜0.05).Transwell检测实验组透过细胞数为(16.5000±6.62076)个,低于对照组和空转组[(45.6333±13.54159)个,(36.8333±5.68412)个],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功获得稳定阻断前列腺癌细胞株LNCaP中p65表达的shRNA序列,并构建慢病毒载体;初步验证了p65在前列腺癌细胞增殖、侵袭和转移中的促进作用.     

双氯芬酸钠栓联合特拉唑嗪治疗慢性非细菌性前列腺炎的临床研究

目的 探讨双氯芬酸钠栓塞肛联合特拉唑嗪治疗慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(CP/CPPS)的临床疗效.方法 慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征患者60人,随机分成三组:单用双氯芬酸钠栓组、单用特拉唑嗪组、双氯芬酸钠栓联合特拉唑嗪组,分别给药六周,观察临床疗效及不良反应.结果 治疗6周后,3组患者的各症状评分均有显著降低,联合用药组对症状改善优于单用双氯芬酸钠栓或特拉唑嗪.结论 双氯芬酸钠栓塞肛联合特拉唑嗪治疗可以有效缓解CP/CPPS的临床症状,提高患者生活质量.     

斑马导丝引导下经皮肾镜治疗肾盏残余结石

目的 探讨经皮肾镜中斑马导丝引导下治疗肾盏残余结石的临床疗效.方法 采用B超定位微创经皮肾镜碎石术治疗肾盏残余结石96例.结果 96例患者一次取净结石89例,术后需二期经皮肾镜手术3例,体外冲击波碎石4例.结石一次取净率92.7%,手术时间平均75min,术中出血平均80 mL,一次取净结石患者术后住院时间平均7 d,术中未见明显大出血和其他并发症.结论 B超定位经皮肾穿刺斑马导丝引导治疗肾盏残余结石效果肯定,安全可靠.     

构建PSMA shRNA慢病毒载体转染293T细胞后PSMA mRNA和蛋白的表达变化

目的：利用基因工程技术筛选获得阻断前列腺癌细胞株LNCaP中前列腺癌特异性膜抗原 (PSMA) 表达的shRNA序列，并构建慢病毒载体。观察转染前列腺癌细胞后对PSMA mRNA和蛋白表达的影响。方法：〖HTSS〗根据PSMA基因信息，设计siRNA1、siRNA2、siRNA3三条针对PSMA基因cds区的siRNA序列，组建shRNA对应的4对互补的单链DNA，包括siRNA的正义链和反义链；正义链序列按5向3顺序依次为：酶切位点（BamHⅠ）、干扰序列（19 bp）、loop环（TTCAAGAGA）、干扰序列的反向互补序列（19 bp）、终止信号（TTTTT）、酶切位点（EcoRⅠ）。将合成的序列插入空载体pSIH1-H1-copGFP shRNA vector中，转染前列腺癌细胞后，通过real-time PCR检测对PSMA mRNA表达，通过Western blotting检测PSMA蛋白的表达。结果：〖HTSS〗设计的3条针对PSMA的序列中第2条的抑制效果最好，目的序列位于PSMA（NM_004476）的1207到1226，茎环序列为5-GATCC GTCTCAAAGTGCCCTACAA TTCAAGAGA TTGTAGGGCACTTTGAGAC TTTTT G-3。其对前列腺癌细胞株中PSMA mRNA表达的抑制率为60%，对PSMA蛋白表达的抑制率为86%。转染细胞后，细胞可以稳定低表达PSMA。结论：〖HTSS〗成功获得阻断前列腺癌细胞株LNCaP PSMA表达的shRNA序列，并构建慢病毒载体，pSIH-PSMA-siRNA2转染前列腺癌细胞后对PSMA mRNA 表达的抑制率为60%，对PSMA蛋白表达的抑制率达86%。为后期研究PSMA在前列腺癌发病中的作用机制以及免疫导向治疗等提供了实验基础。     

双侧输尿管结石并梗阻性无尿的急诊处理

目的:比较不同手术方法急诊处理双侧输尿管结石并梗阻性无尿的疗效.方法:回顾性分析59例因双侧输尿管结石急性梗阻并梗阻性无尿急诊入院患者的临床资料,比较急诊输尿管镜碎石与膀胱镜下逆行插管引流解除梗阻的成功率、肾功能恢复及并发症发生情况.结果:输尿管镜碎石组解除梗阻的成功率为100%,而膀胱镜下逆行插管组成功率仅为70.8%;术后1周输尿管镜碎石组肾功能完全恢复正常者占85.7%.膀胱镜下逆行插管成功患者中肾功能完全恢复正常者占83.3%;两组病例手术均无输尿管断裂、梗阻性脓肾等重大并发症发生.结论:双侧输尿管结石并梗阻性无尿选择输尿管镜治疗是一种适宜的腔内手术方法,创伤少、成功率高,并可在解除梗阻的同时清除结石.     

KLH在肿瘤免疫治疗中的应用

血蓝蛋白(Hemocyanin)是在软体动物和贝类动物体内广泛存在的一种呼吸色素蛋白质,这些和血红蛋白有着相同作用的物质有很强的抗原性,而从南加利福尼亚海域的腹足软体壳类动物Megathura crenulata的血淋巴中提取的钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)[1]不仅有强的抗