人类小脑症基因1与基因组稳定性

人类小脑症基因1（Microcephalin 1,MCPH1）又叫人端粒酶逆转录酶抑制基因（BRCT-repeat inhibitor of hTERT ex－pression,BRIT1）,它编码一个110 kD的含有835个氨基酸的核结合DNA损伤应答蛋白,能与癌症相关基因蛋白（E2F、p53、BRCA1/2等）、DNA损伤应答蛋白（ATM、ATR、RAD51和Condensin Ⅱ等）以及细胞周期调节蛋白（CDK1、cyclins）等多种重要蛋白相互作用,它能参与到细胞周期调控、DNA损伤修复以及抑制肿瘤发生发展等多种细胞活动中,在维持基因组稳定性方面起重要作用。本文对MCPH1的生化结构、维持基因组稳定性以及在人类肿瘤中所发挥的作用做一综述。     

JNK3抑制NF-κB转录活性的研究

目的研究人c-Jun氨基末端激酶3(c-Jun N-terminal kinases3,JNK3)对核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)转录活性的影响。方法构建人JNK3真核表达载体pcDNA3.1-JNK3,与3×κB-luc报告基因质粒共转染人胚胎肾细胞293(HEK293),分别进行如下处理:共转染50ngpCMV-Myc-p65质粒;转染24h后,加入浓度为10ng/ml的TNF-α或IL-1β刺激6h,收集细胞,检测荧光素酶活性。结果成功构建了pcDNA3.1-JNK3真核表达载体;提高细胞内p65水平,加入TNF-α或IL-1β刺激均可明显激活NF-κB的转录,JNK3对NF-κB的转录活性有明显抑制作用,且随着JNK3转染剂量的增加,抑制作用增强。结论JNK3能明显抑制NF-κB的转录活性。     

表皮生长因子受体靶向纳米载体荷载C-erbB2反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌SK-BR3细胞的摄取与滞留

背景:结合肿瘤的分子靶向技术和纳米技术,制备出一种新的具有靶向作用的纳米载体,以达到对肿瘤更好靶向作用的目的.目的:制备表皮生长因了偶联牛血清白蛋白纳米载体,联合核素标记的c-erbB2反义寡脱氧核苷酸,体外观察人乳腺癌SK-BR3细胞对其摄取情况.设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-09/2008-03在重庆医科大学生物化学和分子生物学教研窀,重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心,重庆医科大学放射医学教研室完成.材料:生血清白蛋白(生物技术级)由美围Amresco公司提供,表皮生长因子由英国PeproTech EC LTD提供,125Ⅰ由成都中核高通同位素股份有限公司提供.寡脱氧核苷酸由上海生工生物工程技术服务有限公司提供.方法:采用超声乳化-化学交联及羧和反应制备表皮生长因子偶联白蛋白靶向纳米载体,通过核素标记示踪技术检测表皮生长因子偶联白蛋白靶向纳米载体的相关性质.主要观察指标:测量表皮生长因子靶向纳米载体荷载c-erbB2反义寡脱氧核苷酸的载药量、包封率及释药率,人乳腺癌SK-BR3细胞对表皮生长因子靶向纳米载体的摄取率及滞留率.结果:表皮生长因子靶向纳米载体包载125Ⅰ标记的反义寡脱氧核苷酸组的摄取率及滞留率高于正义寡脱氧核苷酸组和无义寡脱氧核昔酸组.同时c-erbB2寡脱氧核苷酸使用纳米载体荷载组的摄取率及滞留率均高于未使用纳米载体组,差异有显著性意义(P<0.05).结论:125Ⅰ标记的表皮生长因子靶向纳米载体能够提高乳腺癌SK-BR3细胞对o-erbB2反义寡脱氧核苷酸的摄取和滞留,能达到更好的靶向作用.     

稳定、高效表达人MCHR2的SHG-44细胞系的建立

目的:构建黑色素浓集激素受体2(MCHR2)真核表达载体pcDNA3.1( )MCHR2,转染SHG-44细胞,建立稳定、高效表达人MCHR2的SHG-44细胞系.方法:PCR法从人胎脑cDNA文库扩增MCHR2全长cDNA片段.用基因重组方法将其克隆到pcDNA3.1( ),构建真核表达载体pcDNA3.1( )MCHR2,并用LipofectamineTM转染到SHG-44细胞,通过G418筛选,建立稳定表达MCHR2的SHG-44细胞系,用RT-PCR、Western印迹及免疫荧光法检测MCHR2的表达.结果:扩增出MCHR2的全长cDNA)成功构建pcDNA3.1( )MCHR2;RT-PCR、Western印迹及免疫荧光法检测到MCHR2的表达,提示成功建立了稳定、高表达MCHR2的SHG-44细胞株.结论:MCHR2-SHG-44细胞株的建立为进一步研究MCHR2的功能奠定了良好的实验基础.     

丙型肝炎病毒核心蛋白上调诱导型一氧化氮合酶基因启动子的转录活性

目的 探讨丙型肝炎病毒（HCV）核心（core）蛋白对诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因启动子转录的激活作用。方法 利用生物信息学技术确定iNOS基因的启动子区域（iNOSp），聚合酶链反应（PCR）扩增iNOSp的DNA，克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中，构建pCAT3-iNOSp报告载体；以该质粒转染正常人肝细胞LO2，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测氯霉素乙酰转移酶（CAT）的表达活性；并与HCV核心蛋白的真核表达载体pcDNA3．1（-）-core共转染LO2细胞，用ELISA法检测CAT的表达活性。结果 成功获得iNOS基因启动子的正确克隆，pCAT3-iNOSp和pcDNA3．1（-）core瞬时共转染LO2细胞时，报告基因表达载体中的SV40病毒的即刻早期启动子的转录活性明显提高，CAT表达活性是pCAT3-Basic空载体的11倍，是pCAT3-iNOSp的6倍，重复试验得到了相似的结果。结论 成功克隆的iNOS启动子有转录活性；HCV核心蛋白具有对iNOS基因启动子的反式激活作用。HCV核心蛋白在细胞内的表达对于iNOS基因反式激活在HCV感染相关的慢性肝脏疾病的发病过程中具有重要意义。     

指骨骨骺兴趣区域的自动提取方法

背景：在骨龄自动化评定中,许多方法对骨骺兴趣区域的提取不够理想。目的：通过k余弦算法定位出手指骨的特征点,解决对骨骺兴趣区域的提取的困难和提取方法的局限性。方法：提取指骨兴趣区域,并用各向异性扩散方法进行滤波,然后根据骨龄指骨的图像数据进行统计,寻找出定位指骨中心点的方法,通过3次多项式对中心点线进行拟合,定位出指骨的中心轴,在此基础上提取出指骨骨骺兴趣区域。结果与结论：用该方法定位出的指骨中心轴比较真实的反映指骨骨架,在此基础上能提取出指骨骨骺兴趣区域,成功率>95%,并能运用到后续对指骨骨骺兴趣区域相关的评定中。     

仙台病毒载体对未成熟树突状细胞蛋白表达的影响

目的:研究仙台病毒载体对未成熟树突状细胞(DC)蛋白质表达的影响. 方法:提取转染仙台病毒载体的树突状细胞和对照细胞的总蛋白,定量. 双向凝胶电泳分离蛋白质组分,胶体银染显色,PDQuest进行图像分析后选取差异点,胶内酶解后MALDI-TOF MS进行肽指纹图谱鉴定. 结果:图像分析结果显示,处理组2-DE图缺少了40个以上的蛋白点,对其中明显没有表达的5个蛋白点进行了鉴定. 结论:仙台病毒载体感染未成熟树突状细胞可引起蛋白表达的减少.     

真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1的构建及其在Siha细胞中的表达

目的：构建真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1并稳定转染人宫颈癌细胞系Siha细胞,检测MKRN1表达情况及对细胞增殖和凋亡的影响.方法：用RT-PCR技术从人胚肾细胞株HEK293细胞中获得MKRN1的cDNA并将其插入表达载体pEGFP-N1中;构建的重组质粒经脂质体介导转染Siha细胞;Western Blot鉴定MKRN1在Siha细胞中的稳定表达.结果：RT-PCR成功地扩增出一条约1477 bp的片段,经限制性内切酶酶切分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,荧光显微镜下观察到稳定转染的细胞发出较强绿色荧光,Western Blot证明人MKRN1能以融合蛋白的形式在Si-ha细胞中稳定表达.结论：成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-MKRN1,获得了稳定表达人MKRN1基因的Siha细胞克隆,为进一步研究人MKRN1的功能及其与细胞增殖及凋亡的关系提供了实验基础和重要的细胞模型.     

生物化学实验教学改革初探

对近年来国内生物化学实验教学改革的现状进行了回顾，并以此为基础，结合生物化学实验教学中存在的问题，对生物化学实验教学的内容、实验考核办法等进行了初步改革和小范围试点，取得了良好的效果，为进一步建立更为完善的面向21世纪的医学生物化学实验教学新体系奠定了良好的基础。     

小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞蛋白表达的分析

目的 利用双向电泳和质谱技术对小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)表达的蛋白质进行分析.方法 IL-4和GM-CSF诱导未成熟DC的分化,提取细胞总蛋白,定量.双向凝胶电泳分离蛋白质组分,胶体银染显色,PDQuest进行图像分析后选取蛋白点,胶内酶解后MALDI-TOF MS进行肽指纹图...