HPV 16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗诱导CTL致CaSki细胞凋亡体外实验研究

目的:采用人乳头状瘤-16(HPV-16)E6E7重组腺病毒(pAd-E6E7)转染树突状细胞(Dendritic cell,DC),观察基因修饰的DC疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)致使CaSki细胞凋亡的效果。方法:将pAd-E6E7转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞制备DC疫苗,激光共聚焦显微镜观察转染的小鼠未成熟树突状细胞绿色荧光蛋白表达,流式细胞术检测转染前后小鼠树突状细胞表面标志物(CD40、CD86、MHCⅡ和CD11C)。DC疫苗诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞,与CaSki细胞共培养后,采用DAPI、TUNEL及流式细胞术检测CaSki细胞凋亡情况。结果:pAd-E6E7成功转染体外培养的小鼠未成熟树突状细胞,体外转染效率约为40%～50%,成功制备了HPV16 E6E7基因修饰树突状细胞疫苗,诱导产生细胞毒性T淋巴细胞,经DAPI、TUNEL及流式细胞术检测证明CaSki出现凋亡。结论:以带有HPV16 E6E7基因的重组腺病毒载体转染DC制备基因修饰的DC疫苗,诱导CTL致使CaSki细胞出现凋亡。     

豚鼠MCHR2基因外显子1的克隆及序列分析

目的 探明豚鼠体内MCHR2基因的表达情况, 为构建动物模型提供实验依据.方法 利用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,从新鲜豚鼠大脑组织的总RNA中扩增MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,从豚鼠脑组织中提取基因组DNA,PCR扩增MCHR2基因外显子1的序列,克隆入pUCm-T载体后进行序列分析.结果 RT-PCR法未获得目的 片段;由基因组DNA扩增出的MCHR2基因外显子1的序列片段长183 bp,与GenBank登录的人、猴、白鼬、犬的MCHR2序列比对,在第47位后面多了一个碱基--A,由于移码错译而导致提前出现终止密码,从而缩短了预测的开放阅读框架.结论 豚鼠体内的MCHR2基因是无功能的假基因.     

LncRNA UNC5B-AS1通过调控Toll样受体信号通路对宫颈癌细胞增殖及上皮间质转化的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)UNC5B-AS1对宫颈癌细胞增殖及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 利用GEO和TCGA数据库进行差异表达分析，采用qRT-PCR在正常与癌变宫颈组织中进行验证，筛选出差异表达lncRNA UNC5B-AS1。在宫颈癌细胞株中转染lncRNA UNC5B-AS1干扰和过表达质粒，通过平板克隆、CCK-8、EdU实验检测lncRNA UNC5B-AS1对宫颈癌细胞增殖的影响；通过Transwell实验检测其对宫颈癌细胞迁移、侵袭能力的影响；通过Western blot检测EMT相关蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin的表达水平；通过转录组测序得到lncRNA UNC5B-AS1调控的信号通路，验证其相关基因的表达水平。结果 RNA微阵列和生物信息学分析显示，lncRNA UNC5B-AS1在宫颈癌中的表达水平明显高于正常宫颈组织，并与患者的总生存时间相关。与阴性对照组相比，敲低lncRNA UNC5B-AS...