产肠毒素大肠杆菌定居因子Ⅰ基因克隆与表达

目的：在大肠杆菌DH5α中表达产肠毒素大肠杆菌（Enterotoxigenio eseheriehia coli,ETEC）定居因子CFA／Ⅰ,检测重组表达的ETECCFA／Ⅰ。方法：以质粒pBV220为基础,构建pBV220-CFA／1重组载体,表达产物用SDS—PAGE鉴定,免疫原性实验验证。结果：成功构建了pBV220-CFA/Ⅰ重组载体,表达产物的分子量与天然蛋白相同,动物免疫试验表明重组菌具有免疫原性。结论：CFA／Ⅰ基因的成功克隆为今后的ETECCFA／Ⅰ候选疫苗研制奠定了基础。     

胰淀素对大鼠葡萄糖和脂肪代谢的影响

目的 :观察胰淀素对大鼠糖、脂肪代谢的影响。方法 :雄性SD大鼠 2 0只 ,随机分为 3组 ,以灌注生理盐水 (A组 )为对照 (n =7) ,灌注不同浓度 (B组 5nmol/h(n =7) ,C组 0 .5nmol/h(n =6 ) )的胰淀素 (amylin) 3h ,在灌注0min ,30min ,6 0min ,1 2 0min ,1 80min时采血测定游离脂肪酸 (NEFA)、甘油三酯 (TG)、胰岛素水平。后处死动物 ,取肝脏和肌肉以测定NEFA含量。结果 :灌注前A、B和C 3组动物体重、空腹血糖、胰岛素和血脂 (TG ,NEFA)各组间差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。灌注后B、C 2组血糖和胰岛素水平持续升高 ,30min时达到高峰 ,并分别高于A组 (P<0 .0 5 ) ;B和C组之间差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。B和C组灌注 6 0min时血NEFA开始升高 ,1 80min时升高最明显 ,并分别高于A组 (P <0 .0 5 ) ;B和C组之间差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。灌注 3h期间 ,A、B和C 3组血浆TG水平变化无统计学意义 (P >0 .0 5 )。肝脏NEFA含量在灌注 3h末 ,B和C组分别高于A组 ;3组肌肉NEFA含量差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :胰淀素能升高大鼠血糖和血NEFA水平     

双歧杆菌的选择计数培养基

双歧杆菌因其重要的生理功能已广泛应用于食品与保健品生产,成为微生态及食品学界研究的热点。迄今为止,对双歧杆菌的研究尤其是分子生物学方面的进展异常缓慢,主要原因之一是其自身很难分离和培养,这就要求有一个能选择性促进双歧杆菌生长的培养基。现就近几年的研究进展作一综述。     

应用SYBR实时荧光定量Real-Time PCR法检测人宫颈癌MCPH1mRNA表达

目的 应用SYBR实时荧光定量RT-PCR法检测MCPH1/BRIT1 mRNA的表达.方法 提取人宫颈癌总RNA,经逆转录PCR获得靶基因(MCPH1)及管家基因(GAPDH)的CDNA,采用SYBR Green 荧光实时定量法检测,以GAPDH基因作为内参,计算各组MCPH1 mRNA的相对表达量.结果 在31...     

乳腺癌基因芯片实验数据分析与挖掘

目的 对公共数据库上下载得到的乳腺癌基因芯片试验结果进行数据分析,找出在正常组织与癌组织中呈现差异表达的基因,并寻找差异表达基因的相关基因.方法 综合运用显著性分析(SAM)、顶级评分基因对(TSP)、关联规则挖掘等方法,对数据进行处理.结果 筛选出若干呈现差异表达的基因,并且寻找了其中一部分基因的可能高度相关的基因....     

人类小脑症基因1与基因组稳定性

人类小脑症基因1（Microcephalin 1,MCPH1）又叫人端粒酶逆转录酶抑制基因（BRCT-repeat inhibitor of hTERT ex－pression,BRIT1）,它编码一个110 kD的含有835个氨基酸的核结合DNA损伤应答蛋白,能与癌症相关基因蛋白（E2F、p53、BRCA1/2等）、DNA损伤应答蛋白（ATM、ATR、RAD51和Condensin Ⅱ等）以及细胞周期调节蛋白（CDK1、cyclins）等多种重要蛋白相互作用,它能参与到细胞周期调控、DNA损伤修复以及抑制肿瘤发生发展等多种细胞活动中,在维持基因组稳定性方面起重要作用。本文对MCPH1的生化结构、维持基因组稳定性以及在人类肿瘤中所发挥的作用做一综述。     

稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系的建立

目的：构建黑色素浓集激素受体2（MCHR2）/增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白真核表达载体pEGFPN1-MCHR2,转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y,建立稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系MCHR2-SH-SY5Y。方法：采用聚合酶链反应(PCR)法从人胎脑cDNA文库扩增MCHR2全长cDNA片段。用基因重组方法将其克隆到质粒pEGFPN1,构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2,并用Lipofectamine^TM转染到SH-SY5Y细胞,通过G418筛选,建立稳定表达MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞系,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting检测MCHR2的表达并用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白亚细胞定位。结果：扩增出人MCHR2全长cDNA;成功构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2;RT-PCR、Western blotting检测到MCHR2-SH-SY5Y细胞MCHR2的表达,激光共聚焦显微镜观察转染pEGFPN1-MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞融合蛋白定位于细胞膜,而转染空质粒pEGFPN1的SH-SY5Y细胞EGFP定位于细胞质。结论：成功建立稳定表达人MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞株。     

人MDC1基因shRNA反转录病毒载体的构建及鉴定

目的 建立反转录病毒介导的MDC1基因RNA干扰表达体系并观察其在官颈癌细胞(HeLa)中对MDC1表达的影响.方法 将人MDC1基因的RNA干扰双链DNA片段重组到反转录病毒质粒pSilencer5.1-H1 Retro中,构建携带人MDC1基因的RNA干扰反转录病毒载体psiRNA-MDC1.经PT67细胞包装后,产生的莺组反转录病毒感染宫颈癌细胞株HeLa细胞,并用嘌呤霉素筛选稳定的细胞克隆.采用RT-PCR和Western blotting检测细胞中MDC1 mRNA和蛋白表达的变化.结果 重组psiRNA-MDC1质粒经测序鉴定正确;重组反转录病毒感染HeLa细胞后用嘌呤霉素筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Western blotting检测人MDC1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未十扰组.结论 携带人MDC1基因RNA干扰双链DNA片段的反转录病毒感染HeLa细胞后能明显抑制MDC1 mRNA和蛋白表达,为进一步研究MDC1在宫颈癌中的作用奠定了基础.     

人宫颈癌Ca Ski 细胞 IL-24基因的克隆鉴定与真核表达

目的:克隆人IL-24基因并构建真核表达载体,转染Ca Ski细胞进行真核表达.方法:利用RT-PCR技术扩增出Ca Ski细胞中的IL-24基因.将IL-24基因克隆人pcDN3.1( )中,构建真核表达质粒pcDN3.1( )-hIL-24的表达.结果:PCR及测字结果均证实在功克隆了人IL-24,该质粒被转染人Ca Ski细胞中能表达出hIL-24蛋白.结论:成功构建了hIL-24基因的真核表达载体.     

人MCHR2真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立

目的 构建人MCHR2真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系.方法 采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1( ),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、Western blot及免疫荧光法检测MCHR2的表达.结果 成功构建了pcDNA3.1( )/MCHR2真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达目的基因.结论 真核表达载体成功构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究MCHR2的功能奠定良好的实验基础.