小鼠CD_8分子α链在SP2/0细胞中的表达及鉴定

目的构建CD8α真核表达载体,为构建膜型细胞因子提供重要工具。方法采取RT-PCR从磁珠分选的CD8α＋T细胞中得到CD8α的cDNA基因,将其克隆入表达载体pVITRO。经测序后转染SP2/0细胞,通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测CD8α分子在SP2/0细胞中的表达情况。结果构建的pVITRO/CD8α载体测序后,Genebank比对证实为CD8α的cD-NA分子,流式细胞仪和激光共聚焦显微镜结果均说明CD8α在SP2/0细胞的细胞膜上得到表达。结论 CD8α在真核细胞膜上能成功表达,为进一步构建膜表达型细胞因子奠定了基础。     

p210~(bcr-abl)抗原的T细胞表位鉴定及其特异性CTL细胞检测

目的:探讨p210~(bcr-abl)抗原的免疫原性,预测并鉴定该蛋白来源的HLA-A2限制性T细胞表位,并在慢性粒细胞白血病患者中检测其特异性CTL细胞分布.方法:首先利用生物信息学软件预测并选取2个p210~(bcr-abl)来源的表位:~(BCR-ABL)_(642)与~(BCR-ABL)_(926m);T2细胞亲和力实验鉴定短肽与HLA-A2分子的亲和力;然后制备分别锚合这2种表位的可溶性HLA-A2四聚体,流式检测术检测其特异性CTL细胞在CML患者外周血CD8+T细胞中的频率.结果:与健康人群相比,~(BCR-ABL)_(642)和~(BCR-ABL)_(926m)肽表位限制性CTL细胞的频率在CML患者均明显升高(P<0.01);而来自流感病毒短肽的特异性CTL细胞在两个群体中无统计学差异(P>0.05);另外,~(BCR-ABL)_(642)特异性CTL细胞的频率在CML慢性期和急变期之间有统计学差异(P<0.05).结论:所选2种肽表位均具有免疫原性,可建立基于这2种短肽的免疫治疗措施.     

腹腔感染患者血中肿瘤坏死因子浓度的检测及临床意义

采用肿瘤坏死因子(TNF)细胞毒活性检测方法检测了20例腹腔感染患者、10例消化道肿瘤患者和30例正常人血中TNF浓度。其结果为腹腔感染患者血中TNF浓度显著高于正常人和消化道肿瘤患者,重症腹腔感染患者显著高于一般腹腔感染者;治愈后两组患者血中TNF浓度均显著下降;死亡患者血中TNF浓度持续不降。提示血中TNF浓度对判断腹腔感染的严重性和预后有重要价值。     

D3细胞的制备及其对几种病原体的敏感性研究

目的制备基因转染（D3）细胞并测定能引起先天性感染的几种病原体的敏感性.方法HEP-2细胞的DNA转染人胚肺细胞（HEL）,得到基因转染细胞,命名为D3细胞.分析D3细胞的核型.研究丹参对D3细胞促增殖作用和丹参对病原体不同的促增殖作用.普通显微镜观察病原体感染D3细胞后的细胞病变.免疫荧光试验研究D3细胞对病原体的敏感性.电子显微镜观察由D3细胞培养物纯化的病原体形态.在酶联免疫吸附试验（ELISA）中,分别纯化病原体制作抗原,检测1196份孕妇血清特异性抗体（IgG、IgM）.结果传代5～100代的D3细胞的染色体数均是96.丹参（SMB,100μg/ml）对D3细胞和病原体有明显的促增殖作用.D3细胞感染病原体后72 h,均出现明显的细胞病变效应（CPE）和荧光阳性细胞.电镜下见到了病原体典型的形态.结论永生性的D3细胞可用于培养病原体,所培养的病原体可制备用于诊断的抗原.     

结肠癌瘤细胞对不同来源自体淋巴细胞的影响

[目的]研究结肠癌瘤细胞对自体肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、肿瘤引流淋巴结的淋巴细胞(LNL)、外周血淋巴细胞(PBL)的影响。[方法]比较结肠癌患者自体肿瘤细胞对体外培养TIL、PBL、LNL，细胞增殖、诱生细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ水平的影响。[结果]结肠癌患者的TIL和PBL、LNL相比，CD8^ 细胞增加，CD4^ 细胞数减少。PBL和LNL对PHA、rhIL-2刺激产生的细胞增殖能力比TIL强。PBL能产生较高水平的TNF-α和IFN-γ，而IL-2产生水平较低；LNL产生高水平的TNF-α和IL-2，但仅产生低水平的IFN-γ。TIL产生的TNF-α、IFN-γ水平较PBL、LNL低。[结论]结肠癌患者自体肿瘤细胞对不同来源淋巴细胞的细胞因子分泌有不同影响，PBL可能是结肠癌过继性细胞免疫治疗较为理想的CTL前体细胞来源。     

双表达外源性4-1BBL/RANTES的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究

目的探讨K562细胞表达外源性蛋白4-1BBL/RANTES后,对T细胞、NK细胞有无活化作用,为进一步构建人工抗原提呈细胞提供前提。方法采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和RANTES基因插入双表达载体pVITRO-2,命名为pV4-1BBL-RANTES。经测序鉴定后,利用脂质体介导的转染及潮霉素筛选,获得稳定双表达4-1BBL、RANTES分子的K562细胞(K562/4-1BBL/RANTES)。经流式细胞仪(FACS)分选后,K562/4-1BBL/RANTES细胞用丝裂霉素C处理,与外周血淋巴细胞孵育24,FACS检测淋巴细胞表面活化性受体CD69的表达;对NK细胞同时检测了活化性受体NKG2D的表达情况。结果受K562/4-1BBL/RANTES细胞刺激后,CD3+T细胞、CD4+T细胞、γδT细胞和NK细胞的活化性受体CD69的表达与未受刺激前相比,均有明显上调;但与单纯K562细胞刺激组相比,无显著差异。另外,CD8+T细胞CD69的表达及NK细胞NKG2D的表达无明显变化。结论将4-1BBL和RANTES共表达于K562细胞,不具备活化淋巴细胞的效应。     

用PCR-SSP方法分析南方汉族人群MICA基因多态性

目的调查南方汉族人群MICA基因外显子2~6的多态性。方法采用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR-SSP)方法,调查113例江苏省扬州地区汉族正常人群MICA等位基因的分布情况。结果共检测出18个MICA等位基因,最常见的3种等位基因分别是MICA*008(23.0%),MICA*010(17.6%)和MICA*002/020(11.2%),最罕见的3种等位基因是MICA*042(0.4%),MICA*045(1.3%)和MICA*044(1.3%)。结论中国南方汉族人群MICA等位基因分布频率具有自己的种族特异性。     

肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)治疗恶性肿瘤的临床疗效观察

目的 :体外诱导肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL) ,评价其抗肿瘤临床应用价值。方法 :采集患者外周血 ,分离淋巴细胞 ;手术切除肿瘤或转移淋巴结 ,分离肿瘤细胞 ;将淋巴细胞用肿瘤细胞体外致敏 ,诱导产生CTL细胞 ,并以rIL -2大量扩增后回输患者 ,观察其抗肿瘤作用及其对患者免疫功能的影响、并随访患者术后复发及生存期。对部分有转移病灶的病例应用单光子发射计算机断层仪 (ECT)进行5 1 Cr标志的CTL体内分布显像。结果 :CTL细胞过继性免疫治疗后 ,产生明显的抗肿瘤作用、增强患者的T细胞免疫功能、对于预防术后复发和转移具有明显作用。5 1 Cr标志的CTL体内分布显示 ,转移病灶处放射性浓聚。结论 :对于恶性肿瘤患者的综合治疗 ,CTL过继性免疫治疗是有效方法之一。