利用雌激素构建小鼠淋病奈瑟菌感染模型

目的探讨用雌激素构建淋病奈瑟菌感染小鼠模型的方法。方法淋病奈瑟菌WHO-A接种经皮下注射苯甲酸雌二醇和真皮下埋植尼尔雌醇片（雌三醇）预处理的雌性ICR小鼠，小鼠阴道拭子接种T-M选择培养基培养分离淋病奈瑟菌，取小鼠阴道分泌物涂片染色观察淋病奈瑟菌感染情况，比较两种雌激素对小鼠淋病奈瑟菌感染的差异。结果与对照组相比，苯甲酸雌二醇小鼠体内淋病奈瑟菌有短时间的定植，而尼尔雌醇组与对照组无差异。结论雌激素（尤其是雌二醇）有利于淋病奈瑟菌在小鼠阴道内的定植。     

bcr-ab1和白介素-7共表达基因疫苗诱导小鼠免疫保护作用

目的探讨小鼠白介素-7(IL-7)基因对bcr-abl融合基因疫苗诱导机体免疫应答的影响。方法采用pVbcr-abl/mIL-7质粒免疫BALB/c小鼠,检测小鼠血清中bcr-abl特异性抗体水平。以转染bcr-abl融合基因片段的SP2/0细胞为靶细胞,用LDH释放实验检测免疫小鼠脾细胞特异性细胞毒活性。结果pVbcr-abl/mlL-7质粒能诱导小鼠产生血清特异性抗bcr-abl抗体,pVbcr-abl/mIL-7免疫组的血清特异性抗体滴度高于pVbcr-abl免疫组,脾细胞杀伤SP2/0/bcr-abl靶细胞的细胞毒活性明显增强。结论共表达bcr-abl和mIL-7的基因疫苗能在小鼠体内诱导较高的特异性体液免疫和细胞免疫水平,为慢性粒细胞白血病基因疫苗的临床前实验研究提供了依据。     

可生物素化H-2K^d-BSP融合蛋白的原核表达和纯化

目的构建町生物素化的H-2K^d-BSP融合基因的表达载体，原核表达H-2K^d-BSP融合蛋白，以制备H-2K^d-肽四聚体。方法采用RT—PCR技术从小鼠SP2／0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2K^d基因的胞外区，拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列（BSP）后，插入pET-22b高效表达载体多克隆位点，诱导表达后对表达产物进行纯化，用Western印迹法分析鉴定纯化融合蛋白。结果成功构建pET-H-2K^d-原核表达载体，测序证实H-2K^d-BSP融合基因序列正确。pET—H-2K^d原核表达载体可在大肠枰菌BL21中高效诱导表达H-2K^d-BSP融合蛋白，表达量占菌体总蛋白的36％，主要以包涵体形式表达；经反复洗涤纯化，纯化蛋白纯度可达90％以上。纯化蛋白可被H-2K^d分子特异性单克隆抗体SF1—1．1所识别。结论可生物素化H-2K^d-BSP融合蛋白的原核表达和纯化为进一步制备H-2K^d-肽四聚体奠定了实验基础。     

NOD鼠体内CD_4~+NKG2D~+T细胞与CD_8~+T细胞间关系

目的探讨NOD鼠体内CD_4~+NKG2D~+T细胞与CD_8~+T细胞间关系。方法动态监测NOD鼠外周血中CD_4~+NKG2D~+T及CD8+NKG2D~+T细胞在不同周龄频率。利用IGRP206-214特异性CTL清除的NOD鼠,对其外周血中CD_4~+NKG2D+/CD_4~+T及CD8+NKG2D+/CD_8~+T细胞频率进行分析。将磁珠分选所得CD_4~+NKG2D~+T细胞分别与经CFSE标记的纯CD_4~+NKG2D-T细胞、CD_8~+T细胞共培养4 d,检测体系中CD_4~+NKG2D-T细胞、CD_8~+T细胞CFSE的荧光强度变化。结果 NOD鼠外周血CD_4~+NKG2D+/CD_4~+T及CD8+NKG2D+/CD_8~+T细胞频率均随其1型糖尿病疾病进程发展逐渐升高,且二者之间呈正相关。IGRP206-214特异性CTL清除的NOD鼠,外周血中CD_4~+NKG2D+/CD_4~+T细胞频率随CD8+NKG2D+/CD_8~+T细胞频率降低显著下降。与单独培养的CD_4~+NKG2D-T细胞相比,加入CD_4~+NKG2D~+T细胞的培养体系中,CD_4~+NKG2D-T细胞增殖加快。但CD_4~+NKG2D~+T细胞对CD_8~+T增殖作用不明显。结论 NOD鼠体内存在着一群与1型糖尿病疾病进程正相关的CD_4~+NKG2D~+T细胞,且该群细胞极有可能是通过直接作用于CD_4~+NKG2D-T细胞而间接对CD_8~+T细胞产生作用。     

单纯疱疹病毒体外诱导特异性抗体应答的实验研究

用灭活的单纯疱疹病毒（Ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ，ＨＳＶ１）为致敏原，体外诱导成人外周血淋巴细胞产生特异性抗体应答，特异性抗体诱生水平与血清抗体无相关性（Ｒ＝０．４５，Ｐ＞０．０５），抗体类型为ＩｇＧ。同法致敬新生儿淋巴细胞则不能诱生任何类型的特异抗体，表明此体外抗体应答属继发性免疫应答。特异性抗体应答有明显的ＨＳＶ１抗原剂量依赖性，且需要Ｔ、Ｂ细胞的相互作用。ＨＳＶ１体外致敏的实验研究，为探讨正常和疾病状态下体外特异性抗体应答和免疫调节提供一个有用的实验模型。     

RANTES拮抗剂的研究进展

RANTES具有多种生物学活性,不仅对多种细胞有趋化作用,还能增强细胞毒作用。人们试图采用RANTES类似物开发RANTES拮抗剂,RANTES拮抗剂对治疗慢性炎症、减轻移植排斥反应、抑制HIV感染等方面有重要意义。以下就RANTES拮抗剂的研究进展作一综述。     

稳定表达bcr-abl融合基因片段的鼠SP2/0细胞系的建立

为了建立稳定表达bcr-abl融合基因片段的SP2/0细胞系,从重组克隆载体pGEMbcr-abl中酶切出bcr-abl融合基因片段,并将其亚克隆进逆转录病毒载体pLXSN中。脂质体介导重组逆转录病毒载体pLXSNbcr-abl转染包装细胞PT67,采用G418筛选后获得稳定产病毒的包装细胞。收集病毒感染NIH/3T3细胞,加G418筛选后进行逆转录病毒滴度的测定,计算病毒效价为2×107CFU/ml。结果表明,收集病毒上清感染SP2/0细胞(H-2d),经G418筛选获得了稳定表达bcr-abl融合基因片段的SP2/0细胞株。经特异性PCR扩增和RT-PCR反应扩增,从基因组整合和基因表达水平证实获得了能稳定表达bcr-abl融合基因片段的鼠SP2/0细胞系。结论:成功建立了表达bcr-abl融合基因的鼠SP2/0细胞系,这一肿瘤细胞模型可作为研究bcr-abl基因疫苗的有效实验工具,为检验bcr-abl基因疫苗激发小鼠CTL应答的研究奠定物质基础。     

开展大学生探索性实验项目优化创新性人才培养模式

高等教育的任务是培养具有创新精神和实践能力的高级专门人才。目前全国多数医学院校正建立多种渠道、多种机制鼓励大学生参与科研。扬州大学医学院基础医学实验教学中心通过开展大学生探索性实验项目,培养学生的创新意识、创新思维,提高学生分析问题、解决问题的能力,从而积极探索创新性人才实践教学改革,优化创新性人才培养模式。     

基础医学实验教学示范中心的建设成效与思考

基础医学实验教学示范中心的建设是教育部实施高等学校本科教学质量与教学改革工程的重要内容之一。对基础医学实验教学示范中心的建设内容和建设成效进行归纳和总结,并就建设过程中出现的问题进行分析,从而优化实验示范中心内涵建设,最终提高基础医学的实践教学质量,为培养高素质的医学人才奠定基础。     

脂多糖对B细胞的活化作用及机制的初步研究

目的观察TLR4配体脂多糖(LPS)对B细胞功能影响及相关的信号转导通路。方法利用免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD19+B细胞,体外用LPS刺激后,CBA(cytometric bead array)法检测B细胞分泌的Ig(immunoglobulin)亚型;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测B细胞表型;CBA法检测培养上清中细胞因子IL-6、IL-10、IL-12p70、TNF浓度。利用ERK、JNK、p38MAPK和NF-κB信号转导抑制剂检测B细胞内细胞因子分泌的信号转导通路。结果 LPS可以诱导B细胞产生IgG1-κ和IgM-κ抗体,上调B细胞表面CD40、CD80、CD86和MHCⅡ类分子的表达,促进IL-6、IL-10和TNF的高分泌。JNK、p38MAPK和NF-κB信号转导通路调控B细胞IL-6、IL-10和TNF的分泌。结论 LPS可以通过诱导抗体产生、上调共刺激分子表达和促进细胞因子分泌等多方面调节B细胞功能。