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目的:构建p27真核表达载体并导入胃癌SGC-7901细胞获得稳定表达p27的稳定细胞株,以研究p27在胃癌SGC-7901细胞顺铂耐药中所发挥的功能。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增出p27编码区,并将其连接到pCDNA 3.0-Flag载体上,转染293T细胞后分别用定量PCR和Western blot检测其表达情况,并通过Western blot检测SGC-7901细胞过表达Flag-p27稳定细胞株是否构建成功。通过CCK-8药物敏感性实验检测p27在胃癌细胞顺铂耐药中所发挥的功能。结果:双酶切和测序结果表明,pCDNA 3.0-Flag-p27构建成功,并在293T中成功表达,胃癌SGC-7901细胞过表达Flag-p27细胞株建立成功,通过耐药曲线表明过表达p27可以引起SGC-7901细胞顺铂耐药。结论:成功构建了带Flag标签的p27真核表达载体,为进一步研究p27在胃癌耐药中的功能奠定了基础。 相似文献
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目的研究促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)在鼻腔鼻窦鳞癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法采用回顾性研究,收集54例鼻腔鼻窦鳞癌患者(鼻腔鼻窦鳞癌组)、36例鼻息肉患者(鼻息肉组)及30例正常人(对照组)鼻腔黏膜组织标本。采用免疫组织化学染色法对其PRL-3蛋白表达阳性率进行检测,并用实时荧光定量PCR法对PRL-3 mRNA相对表达量进行检测,同时分析PRL-3与鼻腔鼻窦鳞癌患者临床病理特征的相关性。结果鼻腔鼻窦鳞癌组PRL-3蛋白表达阳性率较对照组、鼻息肉组明显升高(P 0. 05)。与对照组、鼻息肉组相比,PRL-3mRNA在鼻腔鼻窦鳞癌组中的表达明显上调(P 0. 05)。不同性别、年龄的鼻腔鼻窦鳞癌患者PRL-3蛋白表达阳性率的比较,并无显著差异(P 0. 05);低分化、病理分期为Ⅲ～Ⅳ期、伴有淋巴结转移的鼻腔鼻窦鳞癌患者PRL-3蛋白表达阳性率明显高于高分化、病理分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移者(P 0. 05)。结论 PRL-3高表达于鼻腔鼻窦鳞癌患者,且与肿瘤分化程度、病理分期及是否伴有淋巴结转移密切相关,提示其有望成为评估鼻腔鼻窦鳞癌患者预后的独立预测因子。 相似文献