合浦珠母贝生殖腺及消化道GnRH及其受体的免疫组织化学研究

目的：观察合浦珠母贝生殖腺及消化道促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone，GnRH)及其受体的表达及分布，为进一步研究GnRH对合浦珠母贝生殖和消化功能的调控提供形态学依据．方法：利用免疫组织化学ABC法和SP法。结果：在消化道的上皮细胞，固有层细胞和生精小管上皮细胞，GnRH及其受体均呈阳性反应，阳性反应物分布在细胞质内，细胞核呈阴性反应，卵巢间质细胞均呈弱阳性反应．结论：合浦珠母贝生殖腺及消化道既能分泌GnRH又能表达其受体，说明GnRH可能通过自分泌或旁分泌作用来调节合浦珠母贝的繁殖及消化功能，这些发现为以后GnRH在合浦珠母贝人工育苗方面的应用奠定了基础。     

c-fos反义寡核苷酸探针对大鼠炎性痛和神经病理性痛的影响

研究c-fos反义寡核苷酸探针(antisense oligodeoxynucleotides,ASO)对大鼠炎性痛和神经病理性痛的作用效果,为临床慢性疼痛的治疗提供理论依据。以大鼠足底注射福尔马林(formalin)致炎性痛模型和腰5脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)诱导神经病理性痛模型为基础,分别观察鞘内给予c-fosASO对两种模型大鼠的行为学及腰5脊髓背角Fos阳性神经元表达的影响。行为学检测结果表明:和正义探针(SO)组以及生理盐水(NS)对照组相比,鞘内预先给予c-fosASO后,大鼠足底注射福尔马林引起自发缩足反射次数和SNL诱导的机械性缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)均有明显缓解(P<0.05),而c-fosASO不能逆转SNL诱导的神经病理性痛。免疫荧光组织化学染色结果发现:和对照组相比,鞘内给予c-fosASO能显著抑制福尔马林和SNL诱导的大鼠腰髓背角Fos阳性神经元的增加。上述结果提示,脊髓背角c-fos的活化对于炎性痛和神经病理性痛的发展都有显著意义,而抑制其活化在预防阶段比治疗阶段对慢性疼痛的缓解作用更为显著。     

高氧液对家兔心肌缺血再灌注损伤生化指标和超微结构的影响

目的 观察高氧液对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法 家兔36只随机分为非缺血对照组12只（A组）,缺血再灌注常规治疗组12只（B组）及缺血再灌注高氧平衡盐液治疗组12只（C组）。结果 与B组比较,C组心肌组织MDA含量、ET水平明显下降（P＜0.01）,心肌组织内T－SOD活性及血清NO水平显提高（P＜0.01）,心肌组织超微结构损伤程度明显减轻。结论 高氧平衡盐液可明显减轻家兔在体心肌缺血再灌注损伤。     

大鼠胃壁细胞GnRH受体的定位及GnRH类似物对壁细胞内钙的影响

目的　观察促性腺激素释放激素 (gonadotropin releasinghormone,GnRH)受体在培养的大鼠胃粘膜壁细胞中的定位 ,并探讨GnRH类似物阿拉瑞林 (alarelin)对壁细胞内游离钙动员的机制。　方法　采用免疫组织化学和原位杂交技术 ;应用Ca2 + 指示剂Fluo 3 AM作为细胞内钙离子的荧光探针 ,对负载培养的胃壁细胞 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测单个细胞内钙荧光强度的变化。　结果　大鼠胃壁细胞呈GnRH受体免疫反应阳性 ,阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;同样壁细胞内可检测到GnRH受体mRNA杂交信号 ,阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;胞内Ca2 + 浓度变化为 :1 在Hank液中 ,GnRH类似物浓度为 10 - 8、10 - 7、10 - 6 mol L时 ,胃壁细胞内Ca2 + 浓度逐渐升高 ,其峰高 (峰值减去静息值 )分别为 7 1± 1 4、12 1± 1 7、16 8± 2 2。其达峰时间也逐渐增快 ,分别为 34 2± 6 4s、18 9± 1 2s、10 4± 2 3s。相邻两组间其峰高及达峰时间均存在显著性差异 (P <0 0 5 ) ,且呈明显剂量依赖性。 2 在D Hank液 (去除外钙 )中 ,阿拉瑞林可轻度短暂升高胞内Ca2 + ;用内罗啶孵育后再加入阿拉瑞林也可轻度短暂升高胞内Ca2 + ,二者无显著性差异。 3 当用拉西地平孵育后再加入阿拉瑞林 ,可明显抑制胞内Ca2 + 的增加     

大鼠骨髓间充质干细胞经低氧诱导因子-1α基因转染后的生物学特性

目的 评价大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)经低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因转染后的生物学特性.方法 将构建好的HIF-1α基因表达载体(pcDNA3.1-HIF-1α)运用电穿孔法转染入第3代BMSCs中得到稳定表达HIF-1α的BMSCs( BMSCs-HIF-1α细胞).以单纯BMSCs和电转染pcDNA3.1的BMSCs( BMSCs-pcDNA3.1细胞)作为对照.采用免疫细胞化学法鉴定HIF-1α基因表达载体是否转染成功;低氧培养后,采用Western blot法测定HIF-1α表达;流式细胞术对转染后细胞进行周期与凋亡的检测,记录G1期、G2期和S期细胞比例,计算增殖指数(PI);MTT法绘制细胞生长曲线,记录细胞数目.结果 BMSCs-HIF-1α细胞核内充满蓝紫色深染颗粒,其余两种细胞未见深染颗粒.与BMSCs和BMSCs-pcDNA3.1细胞比较,BMSCs-HIF-1α细胞HIF-1α表达上调,细胞凋亡率降低,S期和G2期细胞比例和PI升高,G1期细胞比例降低,细胞数目增多(P＜0.05).BMSCs和BMSCs-pcDNA3.1细胞上述各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HIF-1α基因成功转染入大鼠BMSCs.     

不同浓度脂多糖腹腔注射对大鼠认知功能的影响

目的 观察脂多糖(LPS)腹腔注射后大鼠认知功能的变化.方法 将18只雄性SD大鼠随机分为A、B、C三组,分别腹腔注射LPS 6、12 mg/kg及生理盐水.通过Morris水迷宫测定大鼠的学习和记忆能力的变化.结果 与C组相比,在LPS腹腔注射后2、4、8、16和24 h,B组登台潜伏期明显延长,靶象限停留时间明显缩短(P<0.05);而A组仅在LPS腹腔注射后8 h时登台潜伏期延长及靶象限停留时间缩短(P<0.05).与C组相比,在LPS腹腔注射后36 h,B组靶象限停留时间缩短,穿台次数明显减少(P<0.05).结论 LPS 12 mg/kg腹腔注射后可引起大鼠认知功能障碍.     

子宫内膜样腺癌组织新型雌激素受体GPR30表达及其临床意义

目的:探讨新型雌激素受体GPR30在子宫内膜样腺癌组织中表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学对40例不同分化级别的子宫内膜癌组织中GPR30进行了定位研究,随机选取GPR30免疫组化阳性的不同分化级别子宫内膜癌组织各5例,进行了原位杂交实验;采用图像分析技术研究其相对定量.结果:GPR30免疫反应阳性物质主要位于腺癌细胞质内,细胞核阴性;高分化子宫内膜样腺癌GPR30阳性表达率为66.7%(12/18),低分化组为77.8%(7/9),两者差异有统计学意义,P＜0.05;随着子宫内膜样腺癌分化程度的降低,GPR30 mRNA杂交信号物质的相对含量也逐渐增强,相邻各组间差异有统计学意义,P＜0.01.结论:GPR30可能参与了子宫内膜样腺癌增殖与分化的调节.     

抗子宫内膜抗体阳性患者体内其他自身抗体出现频率的研究

0　引言　近几年的研究发现 ,子宫内膜抗体阳性与子宫内膜异位相关 ,并易导致女性不育 ,并且认为子宫内膜异位症是一种自身免疫性疾病 ,但是内膜抗体阳性和其他特异性自身抗体间的血清学关系至今未见相关报道 ,我们研究了我院不育门诊内膜抗体阳性患者和健康经产妇女血清中的几种特异性自身抗体 ,并观察它们间的相关性 ,进一步探讨内膜抗体形成的机制 .1　临床资料与方法　 2 0 0 1 0 3/ 2 0 0 2 0 3我院生殖门诊经ＥＬＩＳＡ实验 ,诊断为抗子宫内膜抗体阳性患者 5 0例 .3ｍｏ内未用激素类药物 .年龄 2 1～ 4 5 (平均 33± 4岁 ) .同期选择…     

培养的大鼠胃壁细胞促性腺激素释放激素的定位、克隆及序列分析

目的 研究培养的大鼠胃壁细胞GnRH的定位及其基因序列。方法 应用免疫组织化学和腺位杂交的方法进行定位研究；从壁细胞中提取总RNA，应用RT-PCR的方法扩增GnRH基因，并对产物进行纯化回收，连接入pUC19载体中扩增，经PCR和酶切鉴定后进行序列分析。结果 大鼠胃壁细胞呈GnRH免疫反应性阳性物质位于细胞质，细胞核为阴性；壁细胞内亦可检测到GnRH mRNA杂交信号，信号物质位于细胞质，细胞核为阴性；同样从大鼠胃壁细胞中扩增出GnRH基因的特异性条带，经序列分析发现，扩增产物的基因序列与文献报道的大鼠下丘脑的完全一致。结论 大鼠胃粘膜壁细胞能表达GnRH基因，其序列和下丘脑的完全一致，并能自身合成GnRH，说明GnRH可能以自分泌或以旁分泌的方式参与胃壁细胞功能的调节。     

电磁脉冲对大鼠大脑额叶皮层炎性因子TNF-α、IL-1β及NFκBp65表达的影响

目的:研究电磁脉冲(electromagnetic pulse,EMP)的生物学效应,为免受电磁辐射损伤提供新的研究靶点。方法:成年雄性SD大鼠随机分为四组:对照组、EMP照后1 h组、EMP照后6 h组、EMP照后24 h组。通过HE染色、ELISA和Western Blot实验方法,研究EMP(400 kv/m,200个脉冲)连续辐照3 d后在不同组大鼠大脑额叶皮层神经元的组织学变化、额叶皮层组织炎性因子-肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及NFκBp65的表达变化。结果:(1)HE染色结果显示:经EMP辐照6 h后,大脑额叶皮层内异常神经元数目增多,异常神经元细胞核边移,胞浆与细胞核深染。(2)ELISA结果显示:EMP辐照后,大脑额叶皮层内TNF-α水平随时间逐渐升高,于辐照后6 h尤为明显(P0.05),24 h逐渐恢复至正常;IL-1β水平各实验组均较对照组明显升高,于辐照后1 h升高最为明显(P0.05)。(3)Western Blot结果显示:经EMP辐照后,6 h组大脑额叶皮层内NFκBp65的表达明显增多,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论:电磁脉冲照射会引起大鼠大脑额叶皮层神经元损伤和炎性反应,其机制可能是通过诱导NFκB活化,启动炎性反应,进而导致大脑额叶皮层神经元损伤。