血链球菌特异DNA片段探针制备及临床应用

目的 探讨血透链球菌特异ＤＮＡ片段探针制备及临床应用。方法 采用特异引物的ＰＣＲ扩增及运用探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,斑点杂交来检测链球菌同源序列,结果：Ｓ３４ｓｒ,Ｓ３４非１和ＡＴＣＣ１０５５６的ＤＮＡ含有同源序列,另有两株血链球菌临床分离株五点杂交结果为弱阳性,其它３０余株细胞杂交结果阳性,结论 血链球菌ＡＴＣ－Ｃ１０５５６菌株中的ｎｉｆ基因为血链球菌的特异基因,该基因在血链球菌蛋白的表达及     

聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳在苯丙酮尿症产前基因诊断中的应用

苯丙酮尿症 (PKU)是常染色体隐性遗传病 ,因苯丙氨酸羟化酶 (PAH)基因突变致酶活性降低或丧失而造成高苯丙氨酸血症和智力低下。为进一步提高PKU产前基因诊断率 ,我们用s聚合酶链反应 变性梯度凝胶电泳 (PCR DGGE)对PCR短串联重复序列 (PCR STR)连锁分析 ,对家系的PAH基因的相对突变热点区域外显子 6 (e6 )、e7和e12作突变检测 ,以探讨其在PKU产前基因诊断的应用价值。一、对象和方法1.对象 :4个经典型PKU家系及其成员的外周血标本由中国医科大学第二临床医院提供。2 .DNA提取 :PKU家系父母外周血各 3ml,羊水 (妊娠16～ 2 …     

应用微卫星多态标记进行大肠癌中5q21-q22杂合性丢失的初步研究

应用ＡＰＣ基因下游４０Ｋｂ处的微卫星多态标记Ｄ５Ｓ３４６，检测３０例大肠癌组织ＤＮＡ，在可提供信息的１５例杂合子中检出５例５ｑ２１＿ｑ２２的杂合性丢失，占３３％。提示ＡＰＣ基因缺失也是中国人大肠癌的遗传改变之一     

阳性对照PCR-SSCP法检测肝癌中特异性p53基因点突变

用人肝癌细胞系PLC/PRF/5 DNA作阳性对照,通过聚合酶链式反应—单链构象多态分析(PCR-SSCP分析),检测五种人肝癌细胞系及6例原发性肝癌组织中p53基因点突变。在被检标本中未检出PLC/PRF/5中存在的肝癌特异性p53基因点突变,即249位密码子第3碱基G→T颠换。因此,这种特异性p53基因点突变并不是肝癌中的普遍现象。     

东北汉族人群7p14-15区域内9个STR位点的遗传多态分析

目的:分析东北汉族人群中7p14-15区域内9个短串联重复序列(STR)位点的遗传多态性。方法:采用荧光标记PCR扩增技术和毛细管电泳方法,对7p14-15区域内9个STR多态位点在100名随机选取的无血缘关系的东北汉族人群中的遗传多态性进行分析。结果:在东北汉族人群中,7p14-15区域的D7S526、D7S690、D7S2252、D7S817、D7S683、D7S656、D7S484、D7S2250、D7S2251位点分别检测出6、6、8、6、4、6、7、8和7个等位基因,17、19、29、17、10、17、24、27和22种基因型,杂合度分别为84%、85%、79%、82%、79%、85%、89%、88%和83%。结论:7p14-15区域的9个STR位点的基因频率和基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡,并在东北汉族人群中呈现较好的遗传多态性。     

RPS12基因表达与胃癌进展及淋巴结转移的研究

目的探讨核糖体蛋白S12(RPS12)基因表达与胃癌进展及淋巴结转移的关系。方法采用原位杂交方法检测39例进展期胃癌组织、17例正常胃黏膜中RPS12mRNA表达。结果胃癌中RPS12mRNA表达阳性表达率(87.2%)显著高于正常胃黏膜(17.6%),P<0.01;淋巴结转移阳性的胃癌中RPS12mRNA表达阳性率(96.2%)显著高于淋巴结转移阴性者(69.2%),P<0.05。结论RPS12基因高表达与胃癌进展及淋巴结转移有关。     

RNA干扰抑制S100A8基因表达对Hec-1B细胞凋亡及体外药敏的影响

目的子宫内膜癌是女性生殖器最常见的恶性肿瘤之一,晚期及复发性患者预后差,对多种化疗药物耐药.本文探讨RNA干扰抑制S100A8基因表达对子宫内膜癌细胞Hec-1B凋亡及体外药敏的影响.方法体外合成RNA干扰用S100A8 siRNA,采用脂质体将S100A8 siRNA转染到人子宫内膜癌细胞Hec-1B中,用RT-PCR、Wesyern blot检测S100A8基因表达,TUNEL和流式细胞仪检测细胞凋亡变化,MTT法检测细胞抑制率.在转染S100A8siRNA后不同时间的Hec-1B细胞中分别加入2个浓度的顺铂,表柔比星,紫杉醇等药物,设立阴性对照,观察Hec1B细胞体外生长的变化.结果1)转染S100A8 siRNA可抑制Hec-1B细胞的S100A8基因表达,该作用可维持10天,随着该基因表达被抑制,细胞凋亡增加,在第5天达最高峰,转染组细胞凋亡率(30.34±10.30)%,明显高于对照组(18.14±2.68)%,(P=0.01),而随着S100A8基因表达恢复,细胞凋亡率下降至转染前水平.2)Hec-1B细胞S100A8基因表达抑制后,顺铂,表柔比星,紫杉醇等药物抑制Hec-1B细胞生长作用明显增强.除40.0μmol/L表阿霉素(P=0.056)外,33.3μmol/L和66.5μmol/L顺铂,20.0μmol/L表阿霉素,5.0μmol/L和10.0μmol/L紫杉醇,与对照组比较,均显示对Hec-1B细胞生长抑制增强,存在显著差异(P＜0.05).结论我们首次报道RNA干扰可抑制Hec-1B细胞S100A8基因表达,诱导该细胞凋亡,抑制S100A8基因表达使Hec-1B对化疗药物敏感性增加,提示该基因可能与子宫内膜癌耐药相关.     

一个47,XXY,5P~-核型患者

本文首次报告一例核型为47,XXY,5p~-,兼有Klinefelter和Cri du Chat-(猫叫)两种综合征的活婴。1977年Hook等对56,952例活婴进行细胞遗传学分析,只有两例真正的和两例拟似的5p~-,而47,XXY却有35例,说明前者发病数很少,后者较为常见。患儿的母亲21岁,是初产妇。患儿是在怀孕33周后出生的,体重2115g。其父22岁,都是白人,无先天性疾病家族史。出生时,患儿因动脉导管未闭而有充血性心衰,呼吸困难,面色苍白。住院51天未见长大。出院后于7.5月龄又复住院。体检呈严重儿童生长延缓。小头,头围40cm,前     

胎鼠肌组织蛋白质组的双向电泳分析

目的优化胚胎鼠肌组织蛋白质组双向电泳分析方法。方法以固相pH梯度胶条等电聚焦为第1向，以十二烷基磺酸钠（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳为第2向，对孕21d大鼠胚胎胫骨后肌总蛋白进行双向电泳，经银染或考马斯亮蓝染色，并采用ImageMaster 5．0软件分析处理。在不同的3张胶上选一对应点进行质谱分析和网络数据检索鉴定。结果获得了分辨率及重复性均较好的二维图谱。对应点质谱数一致。结论通过条件优化双向电泳结果能满足胎鼠肌组织蛋白质点分析鉴定需要。     

杜氏肌营养不良症的无创性产前基因诊断研究

目的 探讨杜氏肌营养不良症（Duchenne muscular dystrophy,DMD)的无创性产前基因诊断的可行性。方法 用不连续密度梯度离心方法初步富集妊娠9－21周孕妇外周血中的有核红细胞,细胞涂片离心机制片,瑞氏姬姆萨染色标记,显微操作仪获得单个有核红细胞,改良的PEP（primer extension preamplification)方法扩增单个核红细胞的全基因组DNA,在综合性别和DMD基因内的数个STR位点连锁分析进行DMD诊断诊断的同时,鉴定单个有核红细胞的来源,再应用标记聚合酶链反应扩增9个微卫星片段,进行基因型分析,进一步判定单个核红细胞来源。结果 成功诊断了1例DMD男性患病胎儿。结论 初步建立了DMD的无创性产前基因诊断的方法。