兔抗人唾液酸转运蛋白抗体的制备及特性鉴定

目的：制备兔抗人唾液酸转运蛋白（sialin）的抗体，并进行特性鉴定。方法：应用RT—PCR从培养的人颌下腺细胞系HSG中扩增编码sialin N端1～38氨基酸的DNA序列，构建重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin，测序鉴定后，转化大肠杆菌JM109，在0．1 mmol／L IPTG的诱导下表达GST—sialin融合蛋白。经SDS-PAGE鉴定后，利用GSTrap FF^TM柱纯化融合蛋白，并以其免疫家兔制备抗人sialin抗体。用ELISA法测定兔抗sialin血清的效价；用Western blot及免疫细胞化学等方法鉴定抗血清的特异性。结果：构建了重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin；以其转化大肠杆菌在IPTG诱导下，获得以可溶性形式表达的GST-sialin融合蛋白；表达的GST—sialin经GSTrap FF^TM柱纯化后，免疫家兔制备出抗sialin抗血清，ELISA法测定抗血清的效价为1：32000。Western blot鉴定表明，制备的抗sialin抗体可特异地识别HSG细胞中相对分子质量（Mr）约55000的sialin蛋白。免疫细胞化学检测表明，sialin抗血清识别的抗原定位于HSG细胞的细胞质和胞核。结论：成功地制备出兔抗人sialin抗血清，为进一步研究sialin在涎腺组织的功能奠定了基础。     

乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备鼠抗人乙醛酸还原酗羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体（mAb）并进行初步鉴定。方法：将正常成人肝组织匀浆离心并分离出肝脏胞质总蛋白，用肝脏胞质总蛋白免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备mAb，并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特异性鉴定，通过免疫沉淀联合质谱和Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原。结果：通过间接ELISA筛选获得杂交瘤细胞株ADB291，其分泌的mAb Ig亚类（型）为IgG1（κ），Western blot结果显示该mAb识别相对分子质量（Mr）为35000的蛋白；对免疫沉淀获得的相应抗原回收、酶切、质谱鉴定为GRH—PR。同时应用mAb ADB291对人肝脏cDNA表达文库（Uni-ZAP XR）进行筛选，筛选所获得的阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为GRHPR；阳性克隆转化表达后的Western blot结果确认该抗体识别肘，35000的表达蛋白。结论：mAb ADB291特异识别的抗原为GRHPR，该mAb在GRHPR的功能研究和二型原发性尿草酸盐过多遗传疾病的临床诊断等方面具有应用价值。     

射线对小鼠3T3成纤维细胞内Ⅲ型胶原含量的影响

用＾６０Ｃｏγ射线照射体外培养的小鼠３Ｔ３成纤维细胞后３天内，发现细胞内Ⅲ型胶原的含量明显增多，且随时间的延长而增加。其中以１０Ｇｙ照射时增多３９．５％，以５０Ｇｙ照射时增多１倍，３０Ｇｙ照射后变化最明显，约２倍。电镜观察照射前后成纤维细胞超微结构的变化，发现其呈蛋白合成正旺盛像，且 量效关系与Ⅲ型胶原含旦的增多提供了结构依据。     

抗人IgD单克隆抗体的制备及其特性鉴定

本文采用Ultrogel AcA34凝胶过滤,DEAE离子交换及亲和层析法,从骨髓瘤病人血清中分离高纯度的IgG,以此为抗原免疫小鼠,利用常规杂交瘤技术制备了3株分泌抗人IgD单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为ZD2、ZD61和ZD94,此3株杂交瘤细胞分泌的抗体与IgD有特异性反应,而与人其它类别的免疫球蛋白重、轻链无交叉反应,均属IgG1亚类。免疫转印结果显示,均能识别分子量为67kD的IgD重链条带。用ELISA法测定3株抗体分别识别两种不同的抗原决定簇。     

放射性肺损伤小鼠动物模型的建立及其病变规律

目的:建立放射性肺损伤小鼠动物模型,研究放射性肺损伤病变规律。方法:用不同剂量60Cog射线进行小鼠全胸照射,采用光镜组织病理学检查及图像分析仪形态定量分析肺组织病变。结果:肺脏病变初期呈现急性炎症,以后转为慢性炎症和纤维化。与对照组相比,20或30Gy照射组小鼠肺泡间隔厚度,肺间质面密度增加,肺泡腔面积减小p<0.05 ～p<0.01。结论:用20Gy或30Gy可以建立放射性肺损伤小鼠动物模型,随照射剂量增大,肺部病变加重,肺纤维化出现提早。     

一组抗人重组IL－6单克隆抗体的制备及鉴定

以基因重组的人ＩＬ－６免疫了Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，利用小鼠杂交瘤技术，建立了２０余株分泌抗人重组ＩＬ－６单克隆抗体的杂交瘤，并对其中的Ｃ＿（９２）、Ｃ＿（９７）、Ｃ＿（２０３）、Ｃ＿（２２０）进行了较系统的鉴定，其抗体类别均为ＩｇＧ，亚类分别为ＩｇＧ＿（２ａ）、ＩｇＧ＿１、ＩｇＧ＿（２ａ）和ＩｇＧ＿（２ａ）。它们均特异性地识别ＩＬ－６，而与多种其它因子和无关蛋白无交叉反应。免疫转印结果显示，各单抗均能识别分子量为１７ｋＤ的ＩＬ－６单一条带，并具有中和ＩＬ－６生物活性的效应。     

抗人重组IL－1单克隆抗体的制备及初步鉴定

以重组人ＩＬ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞６５３融合，得到一组分泌抗人重组ＩＬ－１单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的３株ＹＡ１３３、ＹＡ１４０和ＹＡ１６３进行了初步鉴定；抗体类别为ＩｇＧ，亚类均为ｌｇＧｌ；免疫转印显示，３株抗体均能特异性地识别分子量为１７．５ｋＤ的ＩＬ－１蛋白条带；ＥＬＩＳＡ法证明与其它细胞因子如：ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＤ－α、ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ均无交又反应；放射免疫测定结果证实，３株抗体分别识别ＩＬ－１分子上两个不同的抗原决定簇。     

放射性肺纤维化发病机制研究进展

纤维化是正常组织成分被基质和各种胶原纤维取代,从而失去器官功能。放射性肺纤维化可由不适当的高剂量治疗和意外的电离辐射引起。     

重组人血管内皮生长因子D诱导鸡胚尿囊膜血管增生

为了表达和纯化具有生物学活性的人血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）-D,探讨VEGF-D对血管增生作用,从人胎肺组织中提取总RNA,设计特异性引物并应用RT-PCR法扩增VEGF-D成熟肽片段;经测序证明目的片段序列正确后,构建重组表达质粒pGEX-5X-1/VEGF-D并在大肠杆菌BL21（DE3）中进行GST-VEGF-D融合蛋白的表达。结果表明,融合蛋白的分子量约为38kD,表达量占菌体总蛋白的15%以上,抗GST和抗VEGF-D的抗体均能识别融合蛋白;纯化的GST-VEGF-D融合蛋白与VEGFR-3/Fc具有结合活性,并能刺激红白血病细胞系HEL细胞生长;在鸡胚尿囊膜实验中GST-VEGF-D具有促进鸡胚尿囊膜血管生成的作用。结论：成功表达了具有生物学活性的重组人VEGF-D融合蛋白,为进一步研究VEGF-D的作用机理提供了实验模型。     

抗人重组肿瘤坏死因子β(rHTNF-β)单克隆抗体的研制及鉴定

肿瘤坏死因子β(TNF-β)是细胞毒性蛋白,与肿瘤坏死因子α(TNF-α)具有相似的生物学功能。为了进一步研究TNF-β的结构和功能,探讨TNF-β同TNF-α在生物学功能方面的相互关联,并且为纯化应用于临床的rHTNF-β提供技术手段。本实验应用脾内免疫杂交瘤技术制备了一株抗rHTNF-β单克隆抗体B5。Western blotting结果表明,B5特异地识别分子量为22kDa的TNF-β。B5和rHIL-1、rHIL-2、rHIL-6、rHIFN-γ、rHIFN-α、GM-CSF及E.Coli菌裂解液无交叉反应,B5培养上清与rHTNF-α有弱交叉,腹水在高浓度时有交叉反应。B5具有中和rHTNF-β细胞毒能力,亚类测定为小鼠IgG_1。