血小板活化因子抗体的研制

血小板活化因子（ＰＡＦ）自发现以来,一直受到广泛的重视,现认为ＰＡＦ是一种具有激素样广泛生物学活性的物质［１］。关于血小板活化因子抗体的研制,国外有部分实验室有报道,国内少见报道,本文根据血小板活化因子特殊的化学结构,采用２种不同的方法制备出ＰＡＦ免疫原,经皮下多点和足底加淋巴结２种不同途径注射免疫新西兰白兔和Ｂａｌｂｃ小鼠,制备出效价较高、特异性较强的ＰＡＦ多克隆抗体。１　材料与方法１．１　材料　ＰＡＦ纯品、卵磷脂、胆固醇、弗氏完全佐剂（ＣＦＡ）、甲基化牛血清白蛋白（ＭＢＳＡ）均购自美国Ｓｉ…     

EHF疫苗不同途径免疫后血清及黏膜抗体应答情况

目的探讨EHF疫苗经不同剂量和途径免疫后血清IgG及黏膜IgA产生情况,以探讨合适的免疫剂量和接种途径。方法以不同剂量EHF双价灭活疫苗分别经皮下和灌胃免疫小鼠,共3次（第0、5、10天）,末次接种后5d收集血清和小肠冲洗液,用间接免疫荧光法（IFA）检测血清EHF IgG抗体和小肠冲洗液IgA抗体。结果皮下注射能诱导血清特异性IgG和黏膜IgA的产生,灌胃免疫未见抗体产生,1．4 TCID50的EHF疫苗剂量在皮下注射组血清IgG和小肠冲洗液IgA有100％阳性率。结论EHF疫苗皮下注射能诱导血清特异性IgG和黏膜IgA的产生,1．4 TCID50的剂量为较佳剂量。     

重组hIL-10抗家兔皮肤移植排斥反应中血清IL-10及其抗体的检测

目的检测重组人白细胞介素-10(recombinant human interleukiu-10,rhIL-10)作用后皮肤移植家兔血清中IL-10及其抗体的变化,探讨外源性hIL-10诱生IL-10增强抑制效应和外源性hIL-10有无免疫原性,为rhIL-10的应用提供实验依据。方法家兔分为6组:①组rhIL-10低剂量,②组rhIL-10高剂量,③组环孢菌素(CsA)低剂量,④组CsA高剂量,⑤组rhIL-10+CsA低剂量联合,⑥组生理盐水组。移植术前1d开始用药,连续用药10d,肌肉注射。术前1d、术后1d、4d、7d、14d、21d、28d分别取外周血,分离血清,以ELISA方法检测血清中IL-10及IL-10抗体水平。结果①移植家兔血清IL-10检测,术后各组结果较术前均有升高,在术后7d达到高峰,术后4d、术后7d rhIL-10低剂量及高剂量组IL-10水平高于其余各组(P<0.05)。CsA低剂量及高剂量组IL-10水平低于rhIL-10组及联合组(P<0.05)。②移植家兔血清抗IL-10抗体检测,术后各组检测结果较术前均无明显升高(P>0.05),与抗体阳性对照比较有显著差异(P<0.05)。结论 rhIL-10抗家兔皮肤移植反应中,家兔血清IL-10含量在皮肤移植后明显升高,表明外源IL-10诱导内源性IL-10分泌,从而增强抑制排斥反应;外源IL-10注射后家兔血清中没有检测出特异性抗体,外源性rhIL-10进入机体没有免疫原性。     

重组hIL-10抗家兔皮肤移植反应中CC、IL-8/CXCL8趋化因子的变化

目的:检测家兔皮肤移植经rhIL-10作用后,血清中CC、IL-8/CXCL8趋化因子的变化,探讨CC、IL-8/CXCL8趋化因子在rhIL-10抗免疫排斥机制中的作用。方法:皮肤移植家兔分6组:①rhIL-10低剂量,②rhIL-10高剂量,③CsA低剂量,④CsA高剂量,⑤rhIL-10+CsA低剂量联合和⑥生理盐水组;每只家兔均于术前1天开始肌注给药,连续注射10天;各组分别于术前1天、术后1、4、7、14、21、28天取外周血,分离血清,以ELISA法检测移植家兔血清CC、IL-8/CXCL8趋化因子水平。结果:(1)术后各组IL-8水平均升高,术后4天、7天⑥组IL-8水平高于各组(P<0.05)。(2)术后各组MCP-1水平明显升高,术后1天、4天,⑥组MCP-1水高于各组(P<0.05),术后7天⑥组MCP-1水平高于①组、⑤组(P<0.05);术后7天、14天CsA抑制组高于联合组(P<0.05)。(3)术后各组MIP-1α明显升高,术后4天⑥组MIP-1α水平高于①、③、⑤组,术后7天⑥组MIP-1α水平高于各组(P<0.05);(4)术后各组MIP-1β水平升高,但同时间段组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CC、IL-8/CXCL8趋化因子在皮肤移植后明显升高,表明在急性排斥反应中发挥了重要作用,随排斥反应加重而进一步增高,皮片排斥后下降,可作为观察和诊断移植排斥的合适标志物。     

重组hIL-10 对AA 大鼠T 淋巴细胞及IL-17A 的影响研究

目的:以重组人白细胞介素-10(human interleukin-10,h IL-10)及其联合甲氨碟呤(MTX)作用佐剂性关节炎大鼠模型,检测T淋巴细胞亚群及IL-17A水平的变化情况,研究重组hIL-10及其联合MTX治疗佐剂性关节炎大鼠的效果。方法:用IL-10、MTX以及IL-10+MTX处理AA大鼠模型,用流式细胞仪测定各组大鼠血液中CD4~+T细胞与CD8~+T细胞比值,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清IL-17A的含量。结果:各治疗组CD4~+淋巴细胞总数与CD4~+/CD8~+值不同程度下降,各治疗组与模型组比较有显著性差异(P0.05)。各治疗组IL-17A水平有不同程度下降,各治疗组与模型组比较有显著性差异(P0.05),联合组与IL-10组比较有显著性差异(P0.05)。结论:重组hIL-10能下调AA大鼠血液中CD4~+T细胞的数量及CD4~+/CD8~+比值,降低血清中IL-17A水平,联合组较IL-10组对血清中IL-17A影响更显著,提示重组hIL-10联合MTX在治疗类风湿关节炎中能更好地发挥作用。     

重组人白细胞介素10抗家兔同种异体皮肤移植排斥模型的建立

背景:研究表明,白细胞介素10在移植排斥反应的预防和治疗中具有一定的应用前景,有望成为一种新的临床用免疫抑制剂.动物移植模型是研究免疫抑制剂常用的实验平台,最常用的皮肤移植模型动物是小鼠,但小鼠属于小动物模型,移植技术要求较高.目的:建立家兔同种异体皮肤移植模型,观察重组人白细胞介素10抗家兔皮肤移植排斥反应的效果.方法:取家兔背部皮肤修剪成含真皮层的全厚皮片、中厚皮片和不含真皮层的薄层皮片进行家兔自体皮肤移植,随机分为固定组和非固定组,固定组用自制脖套对家兔头颈部活动进行一定限制;药物抗家兔同种异体移植排斥设重组人白细胞介素10组、环孢素A阳性对照组和生理盐水阴性对照组.采用混合淋巴细胞反应法观察家兔混合淋巴细胞反应增殖指数.在30 d内连续观察移植皮肤出现排斥的时间和移植皮片平均存活时间.结果与结论:供、受体混合淋巴细胞培养呈增殖反应,表明家兔同种异体主要组织相容性复合体不同,相互皮肤移植可发生排斥反应.移植皮片厚度以含真皮的中厚皮片为最佳;自制脖套固定可有效限制家兔脖头颈部活动,有利于移植创面的保护.实验成功建立了重组人白细胞介素10抗家兔同种异体皮肤移植排斥模型,重组人白细胞介素10具有抗移植排斥的作用.     

人IL-31基因克隆、表达及在皮肤炎症中的作用

目的 克隆人IL-31基因,构建原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达,研究hIL-31蛋白与皮肤炎症的关系.方法 采用RT-PCR克隆人IL-31基因,将其克隆到原核表达载体pET28a( ),并通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达,用该目的蛋白刺激人表皮角质细胞HaCaT,RT-PCR检测趋化因子MIP-3β、TARC及TCA-3(I-309)mRNA的表达;小鼠皮内注射该目的蛋白,观察局部炎症表现,皮肤标本HE染色观察皮肤炎性特征,采血进行白细胞计数及分类,ELISA法检测血清IL-1βIL-6和TNF-α水平,流式细胞仪分析胸腺及脾脏T细胞亚群.结果 成功获得495bp的人IL-31基因,原核表达质粒构建正确,IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中大量表达;该目的蛋白可刺激HaCaT表达趋化因子MIP-3β、TARC、I-309;小鼠皮肤注射部位有脱毛,HE染色可见炎性细胞浸润,外周血白细胞总数增加,中性粒细胞比例增高,血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平增高,脾脏CD4 T细胞百分比增高,CD8 T细胞百分比减少.结论 人IL-31基因克隆及原核表达已获成功,hIL-31蛋白可刺激HaCaT细胞表达MIP-3β、TARC、I-309,诱导小鼠皮肤炎症反应.     

EHF早期快诊技术研究(Ⅱ.RFC—SpA法检测EHF病人血清中IgG抗体)

用RFC—SpA法诊断流行性出血热。先在抗原片中加入EHF病人血清,经作用后加入SpA菌体试剂,洗涤、染色后在普通光学显微镜下观察花环形成细胞。共检测77份病人血清中EHF IgG体滴度,结果表明本法与IFA及HRP—SpA染色法是特异的,敏感的。还就RFC—SpA实验条件选择以及IgG抗体检测与病程的关系进行了讨论。     

HBV感染与未感染人群血清中C3、C4含量比较

目的：检测感染和未感染HBV人群血清中C3、C4的含量。方法：ELISA法测定乙肝表面抗原、抗体;免疫透射比浊试验测定C3、C4含量。结果：检测148例人群中16例HBV感染后补体C3、C4含量低于正常值的有16例。结论：HBV感染后血清中C3、C4含量与未感染组比较有明显差异。     

腺病毒介导的白细胞介素-24基因对Karpas299细胞增殖与凋亡影响的实验研究

目的探讨体外腺病毒介导的白细胞介素-24基因(Ad-IL-24)对间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)Karpas299细胞增殖及凋亡的影响。方法将Karpas299细胞分为空白对照组、Ad-IL-24组及携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒组(Ad-GFP组)。Ad-IL-24组加入200.0μL Ad-IL-24原液,Ad-GFP组加入200.0μL Ad-GFP原液,空白对照组加入200.0μL PBS溶液。分别于处理12、24及48 h后,采用细胞毒性与增殖检测试剂盒(CCK-8试剂盒)检测3组的细胞增殖抑制率;于处理48 h后,采用流式细胞仪检测3组的细胞凋亡率。结果 Ad-IL-24对Karpas299细胞的生长具有抑制作用,且随时间延长,Ad-IL-24组的细胞增殖抑制率呈上升趋势;同时点与Ad-GFP组相比较,12、24及48 h时Ad-IL-24组的细胞增殖抑制率均较高(P<0.05)。与空白对照组及Ad-GFP组相比较,Ad-IL-24组的细胞凋亡率较高(P<0.05)。结论 Ad-IL-24对Karpas299细胞的生长具有抑制作用,且能引起Karpas299细胞的凋亡。