遵义地区汉族HLA-A、B等位基因多态性的研究

目的从基因水平调查遵义地区汉族人群HLA-A、B等位基因频率，并了解其多态性分布状况。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）方法对遵义汉族200名健康个体进行等位基因分型。结果遵义地区汉族HLA-A、B等位基因频率分布，在低分辨水平，共检出12个A＊基因，25个B＊基因，与我国北方、南方汉族比较，更接近南方汉族人群。南方汉族中分布频率极低的B＊07，在遵义汉族分布频率较高（GF值为2．0％）。结论遵义汉族人群HLA-A、B基因具有较为丰富的多态性，其分布符合南方汉族的特点，又具有高频B＊07地区性遗传特征。     

贵州省流行性出血热灭活疫苗远期流行病学效果研究

目的观察流行性出血热灭活疫苗远期流行病学效果。方法采用间接免疫荧光法检测流行性出血热（EHF）特异性IgG抗体。结果初次免疫、加强免疫和强化免疫反应率分别为0．04％、0．09％、3．42％；荧光抗体阳性率为40．54％、75．00％、85．23％。初次免疫和加强免疫后1年保护率为83．11％、95．10％，近9年免疫人群年均保护率达77．84％，强化免疫后血清抗体几何平均滴度由40．29上升至71．13。结论该疫苗安全性较好，具有良好的远期流行病学效果；疫苗接种人群应适时强化免疫。     

重组人白细胞介素-24及其联合顺铂对卵巢癌细胞体外生长的影响

目的探讨重组人白细胞介素24(rhIL-24)对SKOV3卵巢癌细胞株、卵巢癌顺铂(DDP)耐药SKOV3/DDP细胞株的抑制效应,并观察rhIL-24对卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡和细胞周期的影响。方法用rhIL-24、DDP及rhIL-24联合DDP作用于SKOV3、SKOV3/DDP细胞,以CCK-8法检测细胞增殖、用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化。结果 rhIL-24对体外培养的卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞的生长有明显抑制作用,rhIL-24联合DDP对SKOV3/DDP细胞株抑制率为30.7%,与单用DDP组抑制率6.5%相比有显著性差异,流式细胞仪检测rhIL-24、DDP和rhIL-24联合DDP各组凋亡率分别为14.95%、12.99%和16.32%,与阴性对照组凋亡率1.32%比较具有显著性差异;细胞周期检测中,SKOV3细胞周期变化显示rhIL-24组G2、S期增多,联合用药组出现S期增多;SKOV3/DDP细胞中,rhIL-24组处理出现G2期增多,联合用药组出现G1期增多。结论 rhIL-24对卵巢癌细胞DDP敏感和耐药株都具有抑制作用,联合用药可增强DDP的效应;rhIL-24对卵巢癌细胞的抑制作用通过诱导细胞凋亡实现,rhIL-24处理细胞后周期变化出现G2期阻滞,联合用药组出现G1期阻滞。     

重组人IL-31蛋白纯化方法的比较研究

目的 比较两种方法纯化rhIL-31的效果.方法 将含pET32a/rhIL-31的重组菌E.coil.BL21(DE3)经IPTG诱导表达,通过超声波破碎,包涵体的提取溶解,分别经G75凝胶层析和镍琼脂糖凝胶FF层析进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析.结果 镍琼脂糖凝胶FF层析法的杂蛋白去除率高于凝胶层析法,所得蛋白纯度略高.结论 比较重组人IL-31蛋白的纯化效果,镍琼脂糖凝胶FF层析的效果比G75凝胶层析的效果好.     

不同培养基上空肠弯曲菌生长特性及外膜蛋白表达差异的初步研究

目的 探讨不同培养基对空肠弯曲菌(CJ)的生物学特性和外膜蛋白表达的影响.方法 采用改良布氏、改良布氏血、改良卵黄等3种培养基培养CJ,48 h后进行菌落观察、菌体观察、动力学试验、生物化学检验、间接荧光检测等初步确定生物学特性,比较3种培养基上CJ生长特性的差别.采用0.2 mol/L、pH 2.2甘氨酸-HCl缓冲液抽提CJ外膜蛋白,SDS-PAGE电泳后,灰度扫描观察比较不同培养基上CJ的28 000～31000外膜蛋白表达差异.结果 改良卵黄培养基上CJ的生长特性典型,并且其菌体形态较另外两种培养基粗壮,繁殖速度更为快速,改良卵黄培养基来源的CJ的28000～31 000外膜蛋白的表达较改良布氏血培养基丰富.结论 改良卵黄培养基培养CJ是一种生长特性典型、28000-31000外膜蛋白表达丰富的培养基,该培养基的选择和使用将为该类蛋白的CJ亚单位疫苗大规模制备、CJ的流行病学检验、食品安全卫生检验检疫奠定重要基础.

Abstract：

Objective To evaluate the biological characteristics of Campylobacter Jejuni (CJ) cultured on different culture media and their expression abundance of outer membrane proteins (OMPs). Methods CJ was cultured on the improved Bull's medium yolk agar, improved Bull's blood agar or improved Bull's agar for 48 h. The biological characteristics of the bacteria, including the colony feature, morphology, motility, biochemistry, and results of indirect fluorescence test were observed and compared. OMP of the cultured CJ was extracted using 0.2 mol/L and glycine-hydrochloride buffered solution (pH 2.2) and identified by SDS-PAGE to compare the expression abundance of the OMPs with molecular weight of 28-31 kD. Results CJ exhibited typical biological characteristics with larger cell body and more rapid growth on improved Bull's medium yolk agar than those on improved Bull's blood agar and improved Bull's agar. The bacteria grown on improved Bull's medium yolk agar showed also greater expression abundance of the OMPs with molecule mass between 28 kD and 31 kD. Conclusion Improved Bull's medium yolk agar allows rapid growth of CJ with typical biological characteristics and enhanced expression of the OMPs with molecular weight of 28 -31 kD, and can be widely used in CJ subunit vaccine development, CJ epidemiological survey, CJ food safety examination, and CJ quarantine.     

启发式、研讨式、参与式相结合的教学法在研究生免疫学教学中的实践

介绍启发式、研讨式、参与式相结合的教学法,鼓励研究生在学习过程中积极参与教学过程,发挥其在教学中的主动性,加强教师与学生之间以及学生与学生之间的交流和反馈,使研究生在教学中能深刻地领会和掌握所学的免疫学知识,实现教与学的紧密结合。     

重组人IL-10对皮肤移植家兔血清中IL-17家族水平的影响

目的检测皮肤移植家兔注射重组人IL-10(rhIL-10)后血清IL-17家族水平的变化,探讨IL-17家族在rhIL-10抗免疫排斥机制中的作用。方法皮肤移植家兔分6组,分别为rhIL-10低剂量组、rhIL-10高剂量组、环孢菌素A(CsA)低剂量组、CsA高剂量组、rhIL-10+CsA低剂量联合组及生理盐水组。于皮肤移植术前1 d开始用药,每只家兔连续10 d肌肉注射。各组分别于皮肤移植术前1 d、术后1、4、7、14、21、28 d取血,分离血清,以ELISA法检测血清中IL-17家族细胞因子水平。结果术后IL-17A～F水平较术前明显升高,在术后14 d达到峰值,然后逐渐降低。rhIL-10能抑制IL-17A、IL-27、IL-17F的分泌及促进IL-25的分泌,抑制强度与使用剂量成正相关。结论 IL-17家族细胞因子大量分泌,可能介导移植后的炎症反应,促进炎性因子分泌从而参与移植排斥反应。     

空肠弯曲菌外膜蛋白亚单位疫苗的研制及免疫原性研究

目的 探索用脂质体包裹空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)Mr 28 000～31 000外膜蛋白制备安全、稳定、有效的CJ亚单位脂质体佐剂疫苗及其免疫原性、免疫剂量和途径.方法 采用薄膜-超声-冻融法制备阴离子脂质体(AL)、阳离子脂质体(CL)CJ疫苗后对其进行质量鉴定;用ELISA(间接法)检测经CJ疫苗免疫后的新西兰兔血清IgG抗体水平.结果 ①疫苗无菌试验及热原质试验均合格,均无明显不良反应;②阴、阳离子脂质体疫苗冻融前包裹率分别为32.1%、22.5%,冻融后分别是38.3%、28.4%;③CJ阴离子组比CJ阳离子组血清IgG的OD值显著增高(P<0.01),与CJ弗氏组无统计学差别(P0.1);CJ阴、阳离子组0.50 mg/kg的免疫剂量血清IgG的OD值最大;CJ阳离子皮下注射组与肌肉注射组IgG的OD值无统计学差别(P0.1);特异性IgG抗体经6个月动态观察,5个月后抗体效价下降.结论 ①采用薄膜-超声-冻融法制备CJ亚单位佐剂疫苗安全、稳定,冻融法可以提高脂质体疫苗包裹率;②同一剂量的阴离子脂质体疫苗血清抗体水平明显高于阳离子脂质体疫苗;③脂质体疫苗最佳接种剂量为0.50 mg/kg,肌肉注射与皮下注射免疫效果无显著差异;④较高水平的特异性抗体维持5个月,6个月后应加强免疫.     

重组人IL-10在毕赤酵母X-33及SMD1168中表达效率的比较

目的研究重组人IL-10（rhIL-10）在两株毕赤酵母X-33和SMD1168的表达水平,为rhIL-10的表达选择合适的表达菌株。方法以0.5%甲醇分别诱导毕赤酵母X-33和SMD1168表达rhIL-10,用SDS-PAGE和WesternBlot分析和鉴定rhIL-10,用ELISA法测定培养液rhIL-10含量,用Bradford法测定培养液总蛋白含量并计算rhIL-10占总蛋白的比例。比较同等培养条件下两株酵母表达rhIL-10和总蛋白的水平。结果 SDS-PAGE和Western Blot均检测到42kD左右的蛋白条带;rhIL-10在X-33中的表达量平均达20.00mg/L,在SMD1168中的表达量平均达1.90mg/L,在两株不同酵母中的表达量有显著性差异（P〈0.05）;同时段的X-33培养液中总蛋白质含量平均为50.00mg/L,rhIL-10占总蛋白的40.00%;SMD1168培养液中总蛋白质含量平均为48.23mg/L,rhIL-10占总蛋白的4.00%。结论 rhIL-10在不同的毕赤酵母表达效率有差异,X-33较1168更适于rhIL-10的表达。