糖尿病肾病患者血清miRNA-93的表达变化及意义

目的探讨miRNA-93在糖尿病肾病患者血清的表达情况及其临床意义。方法用实时荧光定量PCR技术分别检测20例糖尿病肾病患者血清和健康对照组血清中miRNA-93的表达变化。分析其与临床病理参数的关系;运用TargetScan等靶基因预测分析软件预测miRNA-93靶基因。结果与健康对照组相比,糖尿病肾病患者血清中miRNA-93低表达(P<0.05);尿毒症组患者血清中miRNA-93较非尿毒症组低表达(P<0.05);生物信息学分析显示为糖尿病肾病中miRNA-93的靶基因为VEGFA、MTHFR、ADRA2B、SDC2、APOB、PPARG。结论 miRNA-93在糖尿病肾病患者血清中低表达,可能通过调控其下游靶基因在糖尿病肾病发生过程中起重要作用。     

PBTEOLA共聚酯体内外降解及组织相容性

目的探讨国产生物降解泌尿系支架材料（对苯二甲酸丁二醇酯-co-聚乙二醇-co-低聚乳酸）三元共聚酯（PBTEOLA）的组织相容性及体内、体外降解特性。方法将PBTEOLA试件埋植在SD大鼠脊柱两侧皮下组织内或浸泡于磷酸盐缓冲液中，分别于2、4、6、8、10、12、14及16周取出．通过组织病理学切片研究材料周围组织反应，利用扫描啦谴检夏材料的表面征象，准确称重以检测材料降解前后的重量。以了解PBTEOLA在体内、体外的降解情况和组织相容性。结果PBTEOLA材料在16周内可降解为细小颗粒．材料的体内、体外降解趋势相同，体内降解速度略快于体外降解。埋植材料周围皮下组织无脓肿形成和组织坏死发生，局部组织反也为轻微的炎症反应。结论PBTEOLA材料组织相容性良好，降解时间适宜，适用于制备泌尿系支架，可进一步研究开发。     

脑外伤后血清外泌体miR-451的表达变化及意义

目的探讨脑外伤后血清外泌体miR-451的动态表达变化及其在脑外伤诊断、损伤严重程度及预后评估中的价值。方法本研究共纳入脑外伤患者120例,另选取40例健康体检者作为对照组,所有患者伤后6个月行格拉斯哥预后（Glasgow Outcome Scale,GOS）评分。收集对照组和脑外伤患者伤后4 h内及1 d、3 d、7 d血清,提取血清中外泌体RNA,采用real-time PCR检测miR-451伤后的动态表达变化,分析其与脑外伤诊断、严重程度及GOS评分的关系。结果（1）脑外伤及轻型颅脑外伤患者伤后4 h内血清外泌体miR-451表达水平均明显高于对照组（P<0.01）,其受试者工作特征（ROC）曲线下面积分别为0.917和0.911;（2）伤后4 h内及1 d、3 d和7 d,轻、中、重三型患者血清外泌体miR-451表达水平逐级增高,与损伤严重程度呈正相关（P<0.001）;（3）脑外伤预后良好者（GOS为4~5分）伤后4 h内及1 d、3 d和7 d血清外泌体miR-451表达水平明显低于预后不良者（GOS为1～3分）（P<0.01）,与GOS评分呈负相关（P<0.001）。结论脑外伤后血清外泌体miR-451表达明显升高,对脑外伤的诊断、损伤严重程度及预后评估具有较高价值,可作为一种潜在的生物指标。     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血区微血管增生及Notch1表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞（MSC）移植对脑缺洫皮质区血管形成的影响及微血管Noteh1表达的变化。方法用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注损伤动物模型,随机分为假手术对照组、单纯脑缺血损伤组和脑缺血后BMSC移植组。采用免疫组织荧光染色法检测各组缺血皮质区Ⅷ因子及Notch1的表达。结果（1）植入的BMSC可以趋向性迁移到脑缺血损伤区域。（2）BNSC移植组脑缺血皮质区新生徽血管密度较单纯脑缺血损伤组和假手术对照组明显增高。（3）BMSC移植组缺血皮质区多数微血管内皮细胞阳性表达Notch1,且明显多于单纯缺血组和假手术对照组。结论BMSC移植可促进脑缺血区血管新生,且可能与促进Notch1表达有关。     

人诱导性多能干细胞的培养及鉴定

目的建立稳定的人诱导性多能干细胞（iPS细胞）培养体系。方法取第3．5代的小鼠胚胎成纤维细胞．丝裂霉素C处理后用作饲养层。人iPS细胞接种于饲养层上生长,胶原酶消化或机械法传代。倒置显微镜下观察iPS细胞生长状态：观察拟胚体形成能力;RT—PCR检测iPS细胞多能性基因的表达情况。结果（1）小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）为贴壁生长细胞,呈梭形或多角形。细胞增殖旺盛。（2）生长在饲养层上的人iPS细胞呈典型的克隆状生长。克隆呈圆形或椭圆形．边界清晰。克隆内细胞排列紧密,细胞体积小,核大,细胞核／质比高。RT—PCR结果显示人iPS细胞强表达多能性基因Oct4,Nanog,Sox2;去除饲养层后悬浮培养能形成拟胚体（EB）。结论本实验的培养体系适合人iPS细胞的培养,人iPS细胞能稳定增殖,保持自我更新及分化潜能。     

miRNA－92a在缺血再灌注肾损伤中的表达变化

目的观察miRNA-92a在缺血再灌注（I／R）损伤4h、24h后小鼠肾组织的表达变化,探讨肾脏缺血损伤后血管生成的可能机制。方法采用双侧夹闭小鼠肾蒂的方法制备急性缺血再灌注肾损伤模型,术后灌注24h后收集血清和。肾脏标本,分别检测肾功能及观察肾组织病理学改变。实时定量逆转录聚合酶链反应（real—time RT-PCR）的方法检测小鼠I／R损伤4h和24h组中miRNA-92a的表达水平。结果（1）采用血清肌酐（Scr）和尿素氮（UN）评估肾功能,肾脏I／R 24h组与假手术组（sham）比较有显著性差异（P〈0．05）;HE染色观察肾组织病理改变明显,肾缺血再灌注模型成功。（2）而I／R4h和24h后,miRNA-92a的表达上调,其上调倍数分别为3．23±0．74．1．53±0．33（P〈0．05）。结论小鼠I／R损伤中miRNA-92a表达显著上调,miRNA-92a可能参与缺血再灌注肾组织损伤的血管再生的调控过程。     

脑外伤后小鼠海马区notch信号的表达变化

目的观察脑外伤后小鼠海马区notch信号基因的表达变化。方法采用Feeney自由落体法复制闭合性脑外伤小鼠模型,分为假手术对照组和脑外伤组,于伤后4h、1d、3d分别处死。采用实时荧光定量PCR法检测伤后各时间点notch1、hes1mRNA的表达。结果 （1）notch1 mRNA表达水平在伤后4h开始升高,1d时达到高峰,较对照组升高约6倍,3d时有所回落,但仍维持在高水平,较对照组升高2倍。（2）hes1 mRNA在伤后4h无明显变化,1d时达到高峰,较对照组升高3倍,3d时回落到正常水平。结论脑外伤后notch1和hes1 mRNA明显增高,提示notch信号被激活,可能与伤后NSCs增殖分化相关。     

人诱导多能干细胞自然分化过程中EMT变化研究

目的研究人诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells，iPSl自然分化过程中上皮-间质转化fepithelial_me8．enchymaltransition，EMT）的变化过程。方法按常规方法iPS细胞接种于单层饲养层细胞上培养并传代。通过EB的方式令iPS细胞自然分化，收集未分化的iPS细胞以及分化7d、14d、21d和28d的细胞，采用RT—PCR和WestemBlot方法检测EMT相关基因及蛋白的表达水平。结果RT—PCR和WesternBlot结果表明．未分化人iPS细胞可见E-cadherin基因和蛋白的表达，分化后E—cadherin的表达明显减少．而N—cadherin基因和蛋白在细胞未分化时均未见表达．发生分化后表达明显上调；在人iPS细胞分化过程中，Snail和Slug转录因子以及蛋白都明显发生上调。结论人iPS细胞自然分化与EMT，即E-cadherin和N—cadherin转化有关。     

脑外伤后小鼠海马区notch信号的表达变化

目的观察脑外伤后小鼠海马区notch信号基因的表达变化。方法采用Feeney自由落体法复制闭合性脑外伤小鼠模型,分为假手术对照组和脑外伤组,于伤后4h、1d、3d分别处死。采用实时荧光定量PCR法检测伤后各时间点notch1、hes1mRNA的表达。结果 (1)notch1 mRNA表达水平在伤后4h开始升高,1d时达到高峰,较对照组升高约6倍,3d时有所回落,但仍维持在高水平,较对照组升高2倍。(2)hes1 mRNA在伤后4h无明显变化,1d时达到高峰,较对照组升高3倍,3d时回落到正常水平。结论脑外伤后notch1和hes1 mRNA明显增高,提示notch信号被激活,可能与伤后NSCs增殖分化相关。