PBTEOLA共聚酯体内外降解及组织相容性

目的探讨国产生物降解泌尿系支架材料（对苯二甲酸丁二醇酯-co-聚乙二醇-co-低聚乳酸）三元共聚酯（PBTEOLA）的组织相容性及体内、体外降解特性。方法将PBTEOLA试件埋植在SD大鼠脊柱两侧皮下组织内或浸泡于磷酸盐缓冲液中，分别于2、4、6、8、10、12、14及16周取出．通过组织病理学切片研究材料周围组织反应，利用扫描啦谴检夏材料的表面征象，准确称重以检测材料降解前后的重量。以了解PBTEOLA在体内、体外的降解情况和组织相容性。结果PBTEOLA材料在16周内可降解为细小颗粒．材料的体内、体外降解趋势相同，体内降解速度略快于体外降解。埋植材料周围皮下组织无脓肿形成和组织坏死发生，局部组织反也为轻微的炎症反应。结论PBTEOLA材料组织相容性良好，降解时间适宜，适用于制备泌尿系支架，可进一步研究开发。     

脑外伤后血清外泌体miR-451的表达变化及意义

目的探讨脑外伤后血清外泌体miR-451的动态表达变化及其在脑外伤诊断、损伤严重程度及预后评估中的价值。方法本研究共纳入脑外伤患者120例,另选取40例健康体检者作为对照组,所有患者伤后6个月行格拉斯哥预后（Glasgow Outcome Scale,GOS）评分。收集对照组和脑外伤患者伤后4 h内及1 d、3 d、7 d血清,提取血清中外泌体RNA,采用real-time PCR检测miR-451伤后的动态表达变化,分析其与脑外伤诊断、严重程度及GOS评分的关系。结果（1）脑外伤及轻型颅脑外伤患者伤后4 h内血清外泌体miR-451表达水平均明显高于对照组（P<0.01）,其受试者工作特征（ROC）曲线下面积分别为0.917和0.911;（2）伤后4 h内及1 d、3 d和7 d,轻、中、重三型患者血清外泌体miR-451表达水平逐级增高,与损伤严重程度呈正相关（P<0.001）;（3）脑外伤预后良好者（GOS为4~5分）伤后4 h内及1 d、3 d和7 d血清外泌体miR-451表达水平明显低于预后不良者（GOS为1～3分）（P<0.01）,与GOS评分呈负相关（P<0.001）。结论脑外伤后血清外泌体miR-451表达明显升高,对脑外伤的诊断、损伤严重程度及预后评估具有较高价值,可作为一种潜在的生物指标。     

镧对内毒素/脂多糖诱导的巨噬细胞核因子KB活化的抑制作用

目的了解稀土元素镧对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)核因子κB(NF-κB)活化的影响,并探讨其机制。方法分离培养小鼠腹腔 Mφ,分为:空白对照组,无刺激因素;LPS 组,用1μg/ml LPS 刺激30 min;镧离子(La~(3 ))组,用2.5 μmol/L La~(3 )刺激30 min;La~(3 ) LPS 组,先后用2.5μmol/L La~(3 )、1μg/mI LPS 各刺激30 min;La~(3 )/LPS 组,2.5μmol/L La~(3 )刺激30 min 后,洗涤细胞,再加入1μg/ml LPS 刺激30 min。采用细胞免疫荧光染色法观察 NF-κB在各组细胞中的分布与表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法捡测胞核中 NF-κB/p65蛋白活性;蛋白质印迹法检测细胞核内 NF-κB/p65蛋白及胞质中核因子抑制蛋白α(IκBα)的表达量。ELISA 法测定各组细胞培养上清液中肿瘤坏死冈子α(TNF-α)的含量。结果 (1)免疫荧光染色显示,空白对照组、La~(3 )组、La~(3 ) LPS 组和 La~(3 )/LPS 组 Mφ绿色荧光多分布于胞质,胞核荧光强度分别为42±7、73±30、48±11和67±19;LPS 组绿色荧光集中于胞核,荧光强度为116±14,明显高于其余4组(P<0.01)。(2)胞核 NF-κB/p65蛋白活性:LPS 组吸光度值为0.435±0.066.与空白对照组(0.048±0.027)、La~(3 )组(0.062±0.049)、La~(3 ) LPS 组(0.066±0.031)、La~(3 )/LPS 组(0.108±0.017)比较,明显偏高(P<0.01)。(3)LPS 组 Mφ胞核 NF-κB/p65蛋白表达水平明显高于其余4组,胞质 IκBα蛋白表达水平明显低于其余4组。(4)TNF-α含量:La~(3 )组培养上清液中 TNF-α含量低于试剂盒检测下限(25 pg/ml)及空白对照组(P<0.05),La~(3 ) LPS 组和 La~(3 )/LPS 组低于 LPS 组(P<0.01),但高于空白对照组。结论 LPS 可激活小鼠腹腔 MφNF-κB/p65核移位,并使胞核中 NF-κB/p65的表达量和活性升高、胞质 IκBα蛋白表达下调,导致 TNF-α分泌增多。镧可抑制上述效应。     

人诱导多能干细胞自然分化过程中EMT变化研究

目的研究人诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells，iPSl自然分化过程中上皮-间质转化fepithelial_me8．enchymaltransition，EMT）的变化过程。方法按常规方法iPS细胞接种于单层饲养层细胞上培养并传代。通过EB的方式令iPS细胞自然分化，收集未分化的iPS细胞以及分化7d、14d、21d和28d的细胞，采用RT—PCR和WestemBlot方法检测EMT相关基因及蛋白的表达水平。结果RT—PCR和WesternBlot结果表明．未分化人iPS细胞可见E-cadherin基因和蛋白的表达，分化后E—cadherin的表达明显减少．而N—cadherin基因和蛋白在细胞未分化时均未见表达．发生分化后表达明显上调；在人iPS细胞分化过程中，Snail和Slug转录因子以及蛋白都明显发生上调。结论人iPS细胞自然分化与EMT，即E-cadherin和N—cadherin转化有关。     

脑外伤后小鼠海马区notch信号的表达变化

目的观察脑外伤后小鼠海马区notch信号基因的表达变化。方法采用Feeney自由落体法复制闭合性脑外伤小鼠模型,分为假手术对照组和脑外伤组,于伤后4h、1d、3d分别处死。采用实时荧光定量PCR法检测伤后各时间点notch1、hes1mRNA的表达。结果 (1)notch1 mRNA表达水平在伤后4h开始升高,1d时达到高峰,较对照组升高约6倍,3d时有所回落,但仍维持在高水平,较对照组升高2倍。(2)hes1 mRNA在伤后4h无明显变化,1d时达到高峰,较对照组升高3倍,3d时回落到正常水平。结论脑外伤后notch1和hes1 mRNA明显增高,提示notch信号被激活,可能与伤后NSCs增殖分化相关。     

胎肝源性细胞促进人骨髓间充质干细胞向肝细胞的定向分化

目的:探讨人胎肝源性细胞(HFLC)对骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导分化为肝系细胞的效应和机制.方法:药物流产的胎肝源性细胞和Hoechst33342标记的人MSCs,按培养方式不同,分为HFLC和MSCs直接接触共培养组及transwell共培养组,用倒置显微镜观察细胞形态,在不同时段用免疫细胞荧光法检测肝系细胞标志如AFP、 CK-18和CK-19并进行糖原染色.结果:在直接接触共培养组,免疫细胞荧光法显示分化细胞表达AFP、 CK-18和CK-19,并随分化时间延长表达量增加;同时,分化细胞具有贮存糖原功能,PAS染色显示分化细胞糖原染色阳性.而在transwell共培养组,分化细胞未检测到肝系细胞标志物的表达及糖原的贮存.结论:HFLC与MSCs的直接接触共培养体系的微环境,有利于MSCs定向分化为肝系细胞.     

昆明鼠胚胎干细胞系的建立及其特性

背景：到目前为止,国际上通用的动物胚胎干细胞细胞系大多是从129品系和C57BL/6系小鼠中获得的,少部分来自BALB/C系,来自于中国昆明鼠则鲜有报道。 目的：分离培养昆明系小鼠胚胎干细胞,并对其生物学特性进行初步鉴定。 设计、时间及地点：以细胞为对象的观察性实验,于2006-05/2007-06在南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所完成。 材料：昆明小鼠3.5 d胚龄的囊胚。 方法：自昆明系小鼠3.5 d胚龄的囊胚分离内细胞团细胞,接种于小鼠原代胚胎成纤维细胞饲养层上,对分离的内细胞团细胞进行扩增、传代培养。 主要观察指标：观察胚胎干细胞集落的生长情况,对其碱性磷酸酶表达进行染色分析,采用免疫荧光法检测其阶段特异性胚胎抗原1表达,以反转录-聚合酶链反应检测其特异性表达因子c-Myc,Nanog,Oct3/4和Sox2的基因表达情况,并对其体内外分化能力对进行鉴定分析。 结果：分离、培养自内细胞团的细胞呈典型的胚胎干细胞集落样生长,碱性磷酸酶染色及阶段特异性胚胎抗原1荧光染色阳性,细胞表达c-Myc,Nanog,Oct3/4和Sox2等基因,细胞在体内外均能分化成来源于不同胚层的多种细胞类型。 结论：成功从昆明小鼠囊胚中分离并建立一株胚胎干细胞系,其生物学特性与其他胚胎干细胞株相符。     

人诱导性多能干细胞的培养及鉴定

目的建立稳定的人诱导性多能干细胞（iPS细胞）培养体系。方法取第3．5代的小鼠胚胎成纤维细胞．丝裂霉素C处理后用作饲养层。人iPS细胞接种于饲养层上生长,胶原酶消化或机械法传代。倒置显微镜下观察iPS细胞生长状态：观察拟胚体形成能力;RT—PCR检测iPS细胞多能性基因的表达情况。结果（1）小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）为贴壁生长细胞,呈梭形或多角形。细胞增殖旺盛。（2）生长在饲养层上的人iPS细胞呈典型的克隆状生长。克隆呈圆形或椭圆形．边界清晰。克隆内细胞排列紧密,细胞体积小,核大,细胞核／质比高。RT—PCR结果显示人iPS细胞强表达多能性基因Oct4,Nanog,Sox2;去除饲养层后悬浮培养能形成拟胚体（EB）。结论本实验的培养体系适合人iPS细胞的培养,人iPS细胞能稳定增殖,保持自我更新及分化潜能。     

miRNA－92a在缺血再灌注肾损伤中的表达变化

目的观察miRNA-92a在缺血再灌注（I／R）损伤4h、24h后小鼠肾组织的表达变化,探讨肾脏缺血损伤后血管生成的可能机制。方法采用双侧夹闭小鼠肾蒂的方法制备急性缺血再灌注肾损伤模型,术后灌注24h后收集血清和。肾脏标本,分别检测肾功能及观察肾组织病理学改变。实时定量逆转录聚合酶链反应（real—time RT-PCR）的方法检测小鼠I／R损伤4h和24h组中miRNA-92a的表达水平。结果（1）采用血清肌酐（Scr）和尿素氮（UN）评估肾功能,肾脏I／R 24h组与假手术组（sham）比较有显著性差异（P〈0．05）;HE染色观察肾组织病理改变明显,肾缺血再灌注模型成功。（2）而I／R4h和24h后,miRNA-92a的表达上调,其上调倍数分别为3．23±0．74．1．53±0．33（P〈0．05）。结论小鼠I／R损伤中miRNA-92a表达显著上调,miRNA-92a可能参与缺血再灌注肾组织损伤的血管再生的调控过程。