李氏5号方对D-半乳糖老化小鼠海马神经元NGF信号转导的影响

通过检测D 半乳糖老化小鼠海马神经元NGF(神经生长因子 )、PI3K(磷脂酰肌醇酯 3激酶 )、Akt/PKB(蛋白激酶B)、CREB(cAMP应答元件结合蛋白 )的表达 ,观察李氏 5号方对海马神经元NGF信号转导的影响。将小鼠随机分为 5组 :正常对照组 (C组 )、D 半乳糖模型组 (D组 )、李氏 5号方大剂量药物治疗组 (L组 )、中剂量药物治疗组(M组 )、小剂量药物治疗组 (S组 )。D、L、M、S 4组每日皮下注射半乳糖 65mg/kg。L、M、S 3个治疗组分别灌胃李氏5号方 0 .6、0 .3、0 .1 5g/kg ,连续 3个月。免疫组织化学染色方法和Westernblotting检测海马神经元NGF、PI3K、Akt/PKB、CREB的表达。结果 :4种抗体C组深染的阳性细胞在海马广泛分布 ,细胞计数与D组有显著性差异 ;D组海马阳性反应细胞着色浅 ,少有突起 ,细胞数目少。 3个剂量李氏 5号方治疗组染色结果与C组相似 ,与半乳糖老化组比较均有显著性差异 ,李氏 5号方水提取液能明显上调NGF的PI3K通路中的一些信号转导蛋白 ,提示 :李氏 5号方水提取液中可能含有能激活PI3K的活性物质 ,为深入研究李氏 5号方的有效成分打下基础。     

APP17肽对早衰小鼠学习记忆功能和海马神经细胞线粒体膜电位的影响

目的观察 APP17肽(β-Amyloid precursop protem,APP;319～335肽段)对早衰小鼠 Kh DIC 学习、记忆功能及海马神经细胞线粒体膜电位的影响。方法 2.5月龄的 Kh DIC 小鼠随机分为模型组和 APP17肽治疗组,对照组采用月龄和性别相匹配的正常昆明(KM)小鼠。APP17肽治疗组给予皮下注射 APP17肽,每只每次0.34μg,每周3次;模型组和正常对照给予等量的生理盐水;25周后开始实验。应用水迷宫试验观察小鼠学习、记忆功能的变化.应用流式细胞技术分析海马神经细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化。结果 (1)水迷宫结果显示,模型组小鼠存在明显的学习和记忆功能障碍,其第3d、4d、5d 游完全程的时间(98.06±27.53、93.18±30.31、81.65±28.35)s、和错误反应次数(6.11±1.76、5.71±2.05、5.23±2.13)均较对照组(76.00±19.69、69.71±24.12、52.93±21.23)和(4.59±2.09、3.41±2.29、2.35±1.11)增多(P<0.05):APP17肽治疗组小鼠的行为学障碍明显轻于模型组,其上述的水迷宫检测结果与对照组比较差异无统计学意义。(2)与对照组小鼠海马神经细胞线粒体膜电位(189.5±15.6)和凋亡发生率(2.8±0.9)比较,模型组线粒体膜电位(106.0±12.7)明显降低(P<0.01),凋亡发生率(7.6±1.5)显著增加(P<0.01);APP17肽治疗组检测结果与对照组接近,海马神经细胞线粒体膜电位(160.3±18.6)高于模型组(P<0.01),而凋亡发生率(5.5±1.7)低于模型组(P<0.05)。结论 Kh DIC 小鼠存在学习和记忆功能障碍;而且其海马神经细胞凋亡率增加、线粒体膜电位降低。提示海马神经细胞发生凋亡和线粒体膜电位下降可能参与脑老化的发生和发展;APP17肽具有部分改善这一病理过程的作用。     

β淀粉样前体蛋白17肽对糖尿病大鼠海马神经细胞线粒体膜电位和凋亡的干预

背景：糖尿病大鼠存在学习和记忆障碍，β淀粉样前体蛋白17肽具有改善这一行为的作用。糖尿病是否通过影响海马区神经细胞的膜电位及凋亡导致学习和记忆障碍以及β淀粉样前体蛋白17肽的相关作用机制尚不清楚。目的：观察糖尿病大鼠海马区神经细胞的线粒体膜电位和凋亡以及β淀粉样肽前体蛋白干预对其影响。设计：完全随机分组设计，对照实验。单位：首都医科大学宣武医院北京脑老化研究实验室和河北保定市第一中心医院内分泌科。材料：实验中指标测定部分于2002—05／2002—08在解放军总医院仪器测试中心完成。动物造模及干预阶段在首都医科大学附属宣武医院动物室完成。选用Wistar雄性大鼠18只。将大鼠按随机抽签法分为3组，正常对照组，糖尿病模型组，β淀粉样前体蛋白17肽治疗组，每组6只。方法：①糖尿病模型组和β淀粉样前体蛋白17肽治疗组大鼠禁食12h后用pH值4．4链脲佐菌素按60mg／kg腹腔注射诱发糖尿病模型。3d后测尾静脉血糖〉15mmol／L为造模成功。正常对照组大鼠不造模。β淀粉样前体蛋白17肽治疗组于背部皮下注射β淀粉样前体蛋白17肽，3．4μg／只，每周3次，共10周。正常对照组及糖尿病组给予等量的生理盐水相同部位注射，每周3次，共10周。②满10周时，将大鼠麻醉，断头取脑后冰浴下取海马组织制备单细胞悬液，采用线粒体膜电位特异性荧光探针JC-1标记线粒体及Annexin-V-FITC＆PI双染色技术，进行流式细胞仪上机检测线粒体膜电位和凋亡发生率。③数据间差异比较采用单因素方差分析。主要观察指标：各组大鼠海马神经细胞线粒体膜电位和海马单细胞凋亡率比较结果。结果：进入结果分析大鼠18只，每组6只。①海马神经细胞线粒体膜电位：糖尿病模型组明显低于正常对照组[（551．91&;#177;53．36），（809．88&;#177;82．41）道，P〈0．01]，β淀粉样前体蛋白17肽治疗组高于糖尿病模型组[（705．99&;#177;89．92）道，P〈0.05]，与正常对照组相近（P=0．146）。②海马单细胞凋亡率：糖尿病模型组明显高于正常对照组和β淀粉样前体蛋白17肽治疗组[（5．32&;#177;1．37）％，（1．03&;#177;0．55）％，（2．80&;#177;0．92）％，P〈0．01，0．05]。结论：海马线粒体膜电位下降和细胞的凋亡可能参与糖尿病脑病的发生发展；β淀粉样前体蛋白17肽具有改善这一病理过程的作用。     

老化小鼠脑核受体相关因子和Nogo受体表达及β-淀粉样肽前体蛋白63-73的影响

目的　观察D 半乳糖老化小鼠海马神经元核受体相关因子 1(Nurrl)和Nogo受体表达水平的变化以及 β 淀粉样肽前体蛋白63 73 (APP63 73 )对其改变的影响。　方法　雄性昆明小鼠 ,随机分为生理盐水对照组、半乳糖老化小鼠组、APP63 73 组 ,每组各 2 0只。采用免疫组织化学染色方法 ,检测海马神经元Nurr1和Nogo受体的表达水平。　 结果　D 半乳糖老化小鼠海马神经元Nurr1和Nogo受体表达水平明显减少 ,两种抗体阳性反应神经元数目分别为 8 6± 3 0和 5 6± 1 2 ,与对照组( 5 2 5± 16 2和 75 8± 30 3)比较差异有高度显著性 (P <0 0 1) ,APP63 73 组上述蛋白的表达结果与对照组接近 ,分别为 5 4 4± 13 7和 71 5± 2 4 6。　结论　D 半乳糖老化小鼠海马神经元存在着Nurr1和Nogo受体表达的下调 ,APP63 73 可使之恢复正常水平 ,其作用机制尚需进一步探讨     

花生油对2型糖尿病大鼠海马CA1区胰岛素受体及胰岛素受体底物表达的影响

目的通过观察2型糖尿病大鼠海马CA1区胰岛素受体(insulin receptor,InsR)、InsR底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)、InsR底物-2(IRS-2)表达的改变,研究花生油对2型糖尿病大鼠海马神经元InsR信号转导通路的影响,探讨花生油在防治糖尿病脑病中的作用及相关机制。方法 60只健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(C组)、2型糖尿病组(T2DM组)、2型糖尿病给予2mL花生油组(T2DM+2mL组)及2型糖尿病给予5mL花生油组(T2DM+5mL组)。其中C组大鼠给以正常饮食喂养,其他3组大鼠给以高脂饮食喂养。2个月后,按25mg/kg体质量腹腔注射链脲佐菌素制成2型糖尿病模型,T2DM组、T2DM+2mL组及T2DM+5mL组大鼠继续给予高脂饮食。糖尿病造模1个月后处死全部大鼠,行脑冰冻切片,用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马CA1区InsR、IRS-1和IRS-2的表达。结果①T2DM组大鼠海马CA1区InsR表达比C组明显降低(P<0.05),T2DM+5mL组大鼠海马CA1区InsR表达明显高于未给予花生油的T2DM组(P<0.05)。②T2DM组大鼠海马CA1区IRS-1表达显著低于C组(P<0.05),T2DM+2mL组及T2DM+5mL组大鼠海马CA1区IRS-1表达均明显高于未给予花生油的T2DM组(P<0.05)。③T2DM组大鼠海马CA1区IRS-2表达比C组明显降低(P<0.05),T2DM+5mL组大鼠海马CA1区IRS-2表达明显高于未给予花生油的T2DM组(P<0.05)。结论 2型糖尿病大鼠海马CA1区存在胰岛素信号转导通路障碍,这可能是2型糖尿病脑病发生的原因之一。花生油可改善2型糖尿病大鼠海马区内胰岛素信号转导通路相关蛋白的表达,因此,花生油具有一定的保护大鼠糖尿病脑病的作用。     

多肽P165对糖尿病小鼠学习记忆功能及海马神经元蛋白表达的影响

目的研究多肽P165对糖尿病模型小鼠学习记忆能力及海马神经元蛋白表达的影响。方法用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型,应用P165(0.07,0.17,0.3mg·kg-1)灌胃治疗,5wk后进行Morris水迷宫试验;小鼠脑组织海马做Akt、PI3K、P-CREB、Bcl-2、Bax、CytoC免疫组织化学染色;另一部分鼠脑海马,做Bcl-2、Bax抗体蛋白免疫印记。结果①水迷宫试验:糖尿病模型小鼠到达站台游动时间比正常对照组延长(P<0.01);而P165(0.07,0.17,0.3mg·kg-1)灌胃治疗组较DM组动物分别缩短(P<0.01)。②神经免疫组织化学实验及Westernblot结果:糖尿病给予P165小鼠与对照组小鼠海马组织内神经元表达细胞存活相关蛋白及抗凋亡相关蛋白PI3K、Akt、P-CREB、Bcl-2阳性细胞数相似,明显高于糖尿病小鼠(P<0.01);糖尿病给予P165小鼠与对照组小鼠表达凋亡蛋白Bax、CytoC阳性细胞数相似,明显少于糖尿病小鼠(P<0.05)。Westernblot结果相同。结论糖尿病小鼠海马神经元表达细胞存活相关蛋白下降,神经元表达细胞凋亡相关蛋白增加,导致其学习记忆能力下降。P165应用可以使上述蛋白恢复到接近正常,从而改善糖尿病小鼠学习记忆能力。     

不同能量的培养条件对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响

目的 建立热量限制的体外模型,观察不同能量培养条件下对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞生长代谢的影响.方法 将人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞分别采用含有低浓度(2 g/L)、正常浓度(3.15g/L)或高浓度(4.5 g/L)葡萄糖的培养基进行常规传代培养,利用MTT代谢率、细胞生长曲线及LDH漏出率等指标观察各组细胞生长情况.结果 与正常葡萄糖浓度培养条件下培养的对照组相比,高糖组细胞突起缩短,细胞胞体皱缩,MTT代谢率稍低(0.573±0.001),LDH漏出率高,细胞生长状态差;与对照组相比,低糖组细胞突起伸展,MTT代谢率较低(0.428±0.003),LDH漏出率低,细胞生长速度缓慢,但是形态良好.结论 高糖培养对细胞有损伤作用,细胞代谢加速,更容易衰老死亡;而低糖培养起到保护作用,在热量限制允许范围内降低培养液的含糖量,不但不会对细胞造成损伤,反而对细胞的代谢及生长起到保护作用,延长细胞的总体寿命.     

D-半乳糖老化小鼠神经元信号转导通路的改变以及APP63-73的作用

目的　观察D -半乳糖老化小鼠海马神经元神经生长因子(nerve growth factor, NGF)信号转导通路的改变以及APP63 -73的作用。方法　采用免疫组化染色法检测 D -半乳糖老化小鼠模型海马神经元 NGF、PI3′K、Akt和CREB的表达水平,并观察APP63 73的保护作用。结果　D- 半乳糖老化小鼠海马CA1区信号转导通路中相关蛋白表达水平明显减少,与对照组比较差异有显著性(P<0 .01),APP63- 73 组上述各种蛋白的表达结果与对照组相近。结论　D- 半乳糖老化小鼠海马神经元存在信号转导通路障碍,APP63 -73 可使之恢复正常水平并发挥神经营养和保护作用,提示其在治疗神经元退行性变中可能有应用前景。     

固相合成法合成葡萄球菌RNAⅢ抑制肽的鉴定

背景：葡萄球菌感染和生物被膜形成受群体感应机制调控。葡萄球菌RNAⅢ抑制肽可以干预葡萄球菌群体感应系统，阻断葡萄球菌细胞间的信号传导通路，进而抑制葡萄球菌的毒素分泌和生物被膜形成，防治葡萄球菌感染。 目的：探讨葡萄球菌RNAⅢ抑制肽(RIP)的人工合成方法。 设计、时间及地点：单一样本观察。于2006-08/11在北京宣武医院中心实验室完成。 材料：Fmoc-AA、Pipredine、TFA、HMP购自美国MERCK公司；DCC、HOBT、DMAP购自美国ABI公司。 方法：采用固相合成法合成RNAⅢ抑制肽，HPLC法纯化，进行质谱分析法、酸水解法、红外光谱分析法和内酰胺酶活性测定法检测。 主要观察指标：①合成和纯化结果。②分子量测定结果。③组成成分分析结果。④氨基酸序列分析结果。⑤结构分析结果。⑥生物活性鉴定结果。 结果：合成的RNAⅢ抑制肽纯度为97.42%，相对分子质量为914.37, 与理论相对分子质量基本一致；与天然RNAⅢ抑制肽具有相同的氨基酸组分、氨基酸序列以及空间结构；生物活性检测证明合成RNAⅢ抑制肽具有和天然RNAⅢ抑制肽相同的功效，可以有效抑制细菌产生RNAⅢ。 结论：采用固相合成法成功合成RNAⅢ抑制肽，鉴定分析证实合成的多肽和天然RNAⅢ抑制肽蛋白具有相同的结构和功能。     

APP17肽对卵巢去势大鼠海马神经元退行性变的作用

目的 通过观察APP17肽对卵巢去势大鼠海马神经元退行性变的作用。证实APP17肽对神经元退行性变的改善作用。方法 雌性大鼠，行双侧卵巢切除手术造模。并于6周后皮下注射APP17肽进行治疗。手术后12周行水迷宫实验，至13周取血并行灌注固定，取脑海马组织作超薄切片电镜分析，并作冰冻切片进行雌激素受体（ERα），神经生长因子（NGF）及脑源性神经生长因子（BDNF）免疫组织化学染色，并用全自动化学发光免疫分析仪测定血清雌二醇水平。结果 卵巢去势组大鼠血清雌二醇水平降低。水迷宫检测卵巢去势组大鼠较正常组游完全程所须时间明显延长，错误反应次数明显增多，海马神经元超微结构出现明显损害；海马光镜观察发现ERα表达增多，NGF及BDNF表达减少，使用APP17肽治疗后并不改变血清雌二醇水平，但能明显改善海马神经元超微结构的损害，使上述有关蛋白质的表达恢复到正常水平。结论 APP17肽不同通过改变雌激素水平来发挥改善神经元功能减退的作用。而可能是通过神经营养因子起作用。