全外显子组测序在自身免疫性疾病中的研究进展

自身免疫性疾病(autoimmune diseases,AIDs)是指机体对自身抗原发生免疫应答而导致自身组织损害的一类疾病,其确切发病机制尚不明确,目前普遍认为遗传因素在AIDs的发生发展中发挥重要作用.近年来,全外显子组测序技术的发展与应用鉴定了多个遗传变异与AIDs相关,并证实这些变异位点通过不同机制参与疾病的各...     

淫羊藿提取物对去卵巢大鼠骨转换率增强的抑制作用

目的研究淫羊藿提取物对去卵巢大鼠骨转换的影响。方法取3月龄SD大鼠手术切除双侧卵巢,1个月后ig给予阳性药17β-雌二醇(2mg/kg)以及淫羊藿提取物混悬液(110mg/kg),连续给药3个月。采用全自动生化分析仪测定血清中钙(s-Ca)、磷(s-P)的量和碱性磷酸酶(ALP)的活性及尿中钙(u-Ca)、磷(u-P)和肌酐(Cr)的量。利用ELISA试剂盒测定尿脱氧吡啶酚(DPD)的量。取胫骨近端制成不脱钙骨切片进行骨组织形态计量学分析。结果与假手术组相比,去卵巢大鼠s-Ca、s-P没有变化,ALP活性增强,u-Ca排出显著升高,尿中DPD与Cr的比值(DPD/Cr)显著增加,子宫萎缩。骨小梁面积百分比降低,骨小梁间隙增加。ig给予雌二醇或淫羊藿提取物3个月,血清ALP活性降低,u-Ca排出量减少,尿中DPD/Cr降低,骨小梁增加,且骨小梁间隙减小。雌二醇组大鼠子宫增生,淫羊藿组大鼠子宫与模型组相比没有变化。结论淫羊藿提取物能够显著抑制由于雌激素缺乏引发的骨转换增强,调整骨形成和骨吸收的关系,对遏制去卵巢造成的骨质疏松有一定的作用,且长期服用对子宫没有刺激作用。     

螺甾皂苷类化合物的体外抗人肝癌细胞增殖作用

目的通过体外实验初步探讨从茄科植物龙葵中提取的螺甾皂苷类化合物对人肝癌细胞株FHCC-98的细胞增殖抑制作用。方法采用MTT筛选由龙葵中提取分离的29种单体化合物,测定其在体外对人肝癌细胞株FHCC-98的生长抑制作用,以人正常肝细胞QSG7701为阴性对照。结果首先利用单浓度(100μmol/L)、单时间点(48h)对化合物进行初筛,其中有3个化合物符合要求,可以进行复筛,分别为solamar-gine;degalactotigonin;solasonine。复筛采用多浓度点(100,50,25,12.5,6.25μmol/L)、单时间点(48h)对化合物检测细胞毒性(IC50)。IC50值>100表示无细胞毒性。结论从龙葵中分离提取的螺甾皂苷类化合物solas-onine对人肝癌高侵袭细胞株的增殖具有一定抑制作用。     

红树林细菌Bacillus sp．次生代谢产物研究

目的研究红树林细菌Bacillus sp．发酵液中的化学成分。方法采用各种色谱方法进行成分分离，综合运用多种波谱学手段确定单体化合物的结构。结果从一株红树林细菌Bacillus sp．的发酵物中分离得到6个单体化合物和一个混合物，单体化合物分别鉴定为N-oleoyl-threonine（1）、大豆素（2）、尿嘧啶（3）、胸腺嘧啶（4）、腺嘌呤核苷（5）、腺嘌呤脱氧核苷（6），混合物鉴定为环（脯-甘）二肽（7）和1，5-dideoxy-3-C-methyl-arabinitd（8）。结论化合物1、8为首次从该属菌株中分离得到。     

抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库的构建

目的构建抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库。方法从B-淋巴细胞刺激因子免疫小鼠的脾细胞中抽提总RNA,经逆转录聚合酶反应合成cDNA,分别扩增小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因。通过重叠延伸拼接法将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成单链抗体基因,重组于载体pFUSE5,电转化E.coliXL 1-Blue。在辅助噬菌体援救下,构建成噬菌体单链抗体库。采用聚合酶链反应、核苷酸序列测定和酶联免疫分析鉴定单链抗体库的特征。结果本抗体库的噬菌体库容量约1×106,单链抗体基因插入效率为93%,存在序列差异性并含有抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体。结论成功地构建了抗人B-淋巴细胞刺激因子单链噬菌体抗体库,为筛选抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体药物奠定了良好的基础。     

23-羟基白桦酸诱导LoVo细胞凋亡与线粒体膜电位的变化

目的探讨23-羟基白桦酸对人结肠癌细胞株LoVo细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测23-羟基白桦酸对LoVo细胞的增殖抑制作用。Hoechst染色、流式细胞仪检测细胞凋亡及线粒体膜电位的变化。结果23-羟基白桦酸能抑制LoVo细胞的增殖,其作用呈明显的时间和剂量依赖性。Hoechst33258染色显示细胞凋亡特征。23-羟基白桦酸25、50、100及200μmol·L-1作用LoVo细胞48h后,其凋亡率分别为11.32%±0.92%、19.23%±0.78%、24.51%±5.88%及42.22%±2.32%,显示一定的剂量依赖性关系。与空白组相比,23-羟基白桦酸可明显降低LoVo细胞线粒体膜电位(P<0.01)。结论23-羟基白桦酸可抑制LoVo细胞的增殖,其机制与降低线粒体膜电位继而诱导LoVo细胞凋亡有关。     

中华大蟾蜍皮化学成分的研究

中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor是两栖纲无尾目蟾蜍属动物，广泛分布于全国大部分地区。蟾蜍入药，始见于《本草别录》，其味辛，性凉，有毒，归心、肝、脾、肺经，具有解毒散结、消积利水、杀虫消疳的功效。现代医学证明蟾蜍还有局麻、强心、升压、抗肿瘤等多方面的作用。传统中药多以蟾酥入药，为了更好地合理利用蟾蜍资源，本实验对中华大蟾蜍干皮进行了化学成分研究。     

小花鬼针草中的苯丙苷类成分及抑制组胺释放活性

目的研究小花鬼针草Bidens parviflora全株的化学成分,并通过组胺抑制实验寻找活性成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20和ODS柱色谱分离化合物,运用1D NMR、2D NMR波谱学方法鉴定了化合物的结构,通过组胺抑制实验测定化合物抗过敏活性。结果分离鉴定了4个苯丙苷类及1个苯甲醇苷成分:4-羟基-3-甲氧基苯丙三醇8-O-β-D-葡萄糖苷(guaiacyl glycerol 8-O-β-D-glucosideⅠ)、丁香酚苷(syringin,Ⅱ)、4-烯丙基-2-甲氧基苯酚-O-(6-O-β-D-芹糖基)-β-D-葡萄糖苷[4-allyl-2-methoxyphenol-O-(6-O-β-D-apiofuranosyl)-β-D-glucoside,Ⅲ]、5,7-二羟基色原酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(5,7-dihydroxy chromone7-O-β-D-glucoside,Ⅳ)、苄醇-O-β-D-葡萄糖苷(benzyl alcohol-O-β-D-glucoside,Ⅴ)。化合物Ⅰ~Ⅴ抑制组胺释放,IC50分别为70、61、>100、52、>100μg/mL。结论化合物Ⅰ~Ⅴ首次从本植物中分得,Ⅲ为未见文献报道的新化合物,命名为鬼针草酚葡萄糖苷(bidenphenol glucoside)。化合物Ⅰ~Ⅴ具有抑制组胺释放的活性。     

小鼠乳腺癌实验动物模型中树突状细胞的功能检测及意义

目的观察在肿瘤生长过程中DCs的功能是否存在变化，并探讨其意义。方法建立小鼠乳腺癌动物模型，用FACS分析荷瘤早、晚期时间点肿瘤浸润淋巴细胞中DCs的比例及其MHC-Ⅱ类分子和协同刺激分子CD80、CD86的表达；用ELISA法检测DCs的细胞因子IL-4、IL-10、IFN-γ和TNF-α的分泌情况；观察DCs对CD4^＋T细胞增殖及对CD8^＋T细胞杀伤功能的影响。结果与荷瘤早期相比，荷瘤晚期肿瘤浸润淋巴细胞中DCs的比例从11．76±2．3％增加到17．45±3．2％（p〈0．05）；晚期DCs下调表达MHC分子及协同刺激分子CD86，而上调表达IL-4、IL-10；晚期DCs刺激CD4^＋T细胞增值的能力明显减弱，并且对CD8^＋T细胞的杀伤能力的刺激作用也显著降低。结论随着荷瘤时间的延长，DCs的成熟度及其对T淋巴细胞的免疫刺激作用逐渐降低，这可能与肿瘤的免疫逃逸密切相关。     

王老吉凉茶对氧化应激负荷小鼠脂代谢的影响

目的:研究王老吉凉茶对拘束负荷诱发小鼠脂代谢机能低下及体内过氧化状态的影响。方法:实验将雌性小鼠分为正常对照组、应激对照组、125mg·kg^-1人参皂苷对照组、125mg·kg^-1及500mg·kg^-1王老吉凉茶给药组,连续给药5d后拘束负荷20h,尾静脉注射10%脂肪乳剂(Intralipids?)40min后检测血脂消除能力、肠系膜脂肪酶活性,同时测定血浆过氧化状态及抗氧化能力。结果:与应激对照组相比,王老吉凉茶明显增加应激小鼠血浆甘油三酯消除速率及肠系膜脂肪组织中脂肪酶活性。此外,王老吉凉茶有效改善拘束负荷升高的血浆脂质过氧化反应产物丙二醛(MDA)含量,提高体内抗氧化能力指数(ORAC)水平。结论:王老吉凉茶改善拘束负荷诱发小鼠脂代谢机能低下,其作用机制可能与缓解机体内的过氧化状态有关。