nm23、CD44V在卵巢恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义

采用免疫组织化学（ＩＨＣ）和ＲＮＡ聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测了４１例卵巢恶性肿瘤,２０例卵巢良性肿瘤和２１例正常卵巢组织ｎｍ２３、ＣＤ４４Ｖ蛋白的表达,以探讨ｎｍ２３、ＣＤ４４Ｖ基因在卵巢恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义。结果：（１）卵巢恶性肿瘤组织ｎｍ２３,ＣＤ４４Ｖ表达阳性率明显高于卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织（Ｐ〈０．０１）。（２）Ⅰ～Ⅱ期患者ｎｍ２３阳性表达高于Ⅲ～Ⅳ期患者（Ｐ〈０     

胎盘免疫调节因子对恶性肿瘤病人T淋巴细胞亚如的影响

观察胎盘免疫调节因子对恶性肿瘤病人外周血Ｔ淋巴细胞亚群的影响。方法：利用ＰＩＦ治疗妇科恶性肿瘤６３例,肺癌３６例,检测并比较ＰＩＦ治疗前后病人外周血Ｔ淋巴细胞亚群指标。结果：妇科恶性肿瘤病人及肺癌病人经ＰＩＦ治疗后,治疗组病人的外周血ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８比值明显增高,而对照组的这些指标均有所降低。结论提示ＰＩＦ可提高妇科恶性肿瘤病人及肺癌病人的细胞免疫功能。     

腹腔镜下Ⅲ型根治性子宫切除及腹膜后淋巴结切除术20例分析

目的:探讨腹腔镜下Ⅲ型根治性子宫切除及腹膜后淋巴结切除术的解剖、技术要点及安全可行性.方法:对20例ⅡB期宫颈癌患者先辅助化疗后行腹腔镜下Ⅲ型根治性子宫切除及腹膜后淋巴结切除术,并对手术时间、术中失血量、术后排气时间、术后膀胱功能恢复情况及术后大便、术中术后并发症情况进行统计分析.结果:所有手术均在腹腔镜下完成,手术平...     

导流杂交法检测宫颈病变中人乳头瘤病毒的基因型及其感染的临床意义

目的应用导流杂交基因芯片技术(HybriMax)检测宫颈病变人乳头瘤病毒(HPV)基因型及其感染情况,并探讨其临床意义。方法 296例行导流杂交法HPV分型检测的宫颈病变患者分为正常组(58例)、慢性炎症组(32例)、宫颈上皮内瘤变组(66例,该组再分为3个亚组,CINⅠ级组21例、CINⅡ级组19例、CINⅢ级组26例)、宫颈癌组140例,对每个组HPV的阳性率进行比较。结果 296例受检者中191例患者HPV DNA检测为阳性,阳性率为64.53%;正常组HPV阳性率为18.97%(11/58)、慢性炎症组为25.00%(8/32),CINⅠ级组为28.57%(6/21)、CINⅡ级组为73.68%(14/19)、CINⅢ级组为88.46%(23/26)、宫颈癌组为92.14%(129/140),其中正常组与慢性炎症组及CINⅠ级组差异无统计学意义(P>0.05),正常组HPV阳性率较CINⅡ级组、CINⅢ级组及宫颈癌组低(P<0.05),随病变级别增加HPV阳性率逐渐上升(P<0.05)。宫颈病变患者感染率较高的6种HPV病毒为16、18、58、52、53、33型,其阳性率分别为35.47%(105/296)、10.47%(31/296)、6.42%(19/296)、5.41%(16/296)、3.04%(9/296)、2.70%(8/296)。结论宫颈病变与HPV的感染密切相关,高危型HPV感染是宫颈癌变的重要因素之一,导流杂交基因芯片技术检测HPV,对于筛查、治疗及随访CIN及宫颈癌患者有重要意义。     

携带OPCML基因的慢病毒表达质粒的构建

目的:建立携带和表达OPCML基因的慢病毒(lentiviral viruses,LV)表达质粒。方法:用内切酶将OPCML基因从已构建的表达质粒pcDNA3-OPCML上切下,插入慢病毒载体pWPI-GFP中,构建慢病毒表达质粒pWPI-OPCML,通过酶切、测序和检测验证OPCML蛋白后,将pWPI-OPCML、pCMV-dR8.74和pMDG共转染包装细胞293T,获得重组慢病毒,再感染靶细胞A2780,通过检测标志蛋白-绿色荧光蛋白(GFP)和目的蛋白OPCML进一步验证pWPI-OPCML在细胞中OPCML的表达。结果:(1)pWPI-OPCML中携有正确的OPCML基因,并能在人类细胞中表达;(2)pWPI-OPCML共转染包装细胞293T能产生重组病毒;(3)目的基因OPCML能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞A2780,并达到稳定的表达,转导效率几乎达100%,荧光显微镜下能直接观察到GFP,Western blotting能检测到OPCML和GFP蛋白在靶细胞中的表达。结论:pWPI-OPCML能在人细胞中表达OPCML蛋白,共转染包装细胞获得的重组慢病毒能感染人细胞,作为转基因的工具,具有高效性。     

人类微小RNA-1246慢病毒抑制载体的构建及对宫颈鳞癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 构建并鉴定微小RNA(miRNA)-1246慢病毒抑制载体,并探讨miRNA-1246下调对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响.方法 针对miRNA-1246成熟体的反义核苷酸片段设计引物并合成目的基因miRNA-1246-down,应用基因重组技术将目的基因克隆到空载质粒GV280中,通过酶切、PCR、DNA测序验证重组慢病毒质粒(GV280-miRNA-1246-down)的构建是否成功,将GV280-miRNA-1246-down、Helper 1.0、Helper 2.0共转染293T细胞获得重组慢病毒,浓缩提纯病毒液并检测病毒滴度,再用重组病毒液感染宫颈鳞癌细胞SiHa,通过检测绿色荧光蛋白(GFP)验证GV280-miRNA-1246-down在SiHa细胞的表达情况,用嘌呤霉素筛选GV280-miRNA-1246-down稳转细胞株.将SiHa细胞分为空白组(NC组)、阴性病毒组(NC-LV组)、miRNA-1246下调组(miRNA-1246-down-LV组),用细胞计数的方法检测细胞的生长率,用Transwell检测细胞侵袭能力.结果 (1)对菌落进行PCR鉴定筛选构建正确的慢病毒载体,DNA测序证实插入的基因序列正确.(2)慢病毒将目的基因miRNA-1246-down成功导入SiHa细胞中,同时达到稳定表达,转染率达90％以上,在荧光显微镜下能直接观察到GFP.(3) miRNA-1246-down-LV组SiHa细胞增殖数低于其他两组(P＜0.05),细胞穿膜次数较其他两组减少(P＜0.05).结论 miRNA-1246慢病毒抑制载体构建成功,miRNA-1246稳定下调的SiHa细胞株建立成功.在SiHa细胞中miRNA-1246下调可抑制宫颈鳞癌SiHa细胞的增殖以及侵袭能力.     

腹腔镜下保留盆腔自主神经广泛性子宫切除术治疗早期宫颈癌疗效和安全性的Meta分析

目的评价腹腔镜下保留盆腔自主神经的广泛性子宫切除术(laparoscopic nerve sparing radicalhysterectomy,LNSRH)治疗早期宫颈癌的手术安全性、根治性以及术后膀胱功能恢复情况。方法计算机检索CENTRAL(1966～2011.9)、MEDLINE(1966～2011.9)、EMbase(1974～2011.9)、CBM(1960～2011.9)和CNKI(1994～2011.9)数据库,并手工检索相关杂志,对符合纳入标准的研究进行资料提取、质量评价后,采用RevMan 5.1软件进行Meta分析。结果最终纳入7个研究,共506例患者,其中LNSRH组255例,腹腔镜下广泛性子宫切除术(laparoscopic radical hysterectomy,LRH)组251例。各研究两组患者年龄、体重指数、临床分期、病理类型及组织学分级等方面差异均无统计学意义。Meta分析结果显示:①LNSRH组所需手术时间较LRH组长,其差异有统计学意义[MD=44.89,95%CI(6.83,82.96),P=0.02],但术中出血量两组差异无统计学意义[MD=6.94,95%CI(–27.30,41.19),P=0.69];②LNSRH组较LRH组切除宫旁组织长度短,其差异有统计学意义[SMD=–0.31,95%CI(–0.49,–0.12),P=0.001 0],但阴道切除长度差异无统计学意义[MD=–0.10,95%CI(–0.31,0.12],P=0.38];③LNSRH术后患者膀胱功能恢复比LRH组好[MD=–8.18,95%CI(–10.21,–6.14),P<0.000 01]。结论 LNSRH具备安全性及可行性,能有效减轻早期宫颈癌患者术后膀胱功能障碍,提高生存质量,是一种新的手术模式。但因该术式开展时间短,目前缺乏多中心、大样本、前瞻性的随机对照试验,对其根治性、远期复发率、生存率等目前尚不能定论,尚需进行更多高质量临床研究以提供LNSRH与LRH比较的重要数据。     

乙酰肝素酶三质粒重组慢病毒系统的构建

目的：成功构建了HPSE基因的慢病毒表达载体。方法：用PCR法扩增HPSE cDNA与慢病毒载体pWPI连接后测序并经BLAST检索，证实后转染293T细胞，48h后提取mRNA，RT—PCR检验HPSE基因表达情况。结果：重组慢病毒质粒HPSEpWPI测序结果经BLAST证实与HPSE基因的同源性达99％且转染293T后有HPSE基因的表达。结论：成功的构建了HPSE基因的重组慢病毒系统，为今后的HPSE靶向治疗奠定了基础。     

CD44V3、CD44V6基因蛋白在卵巢恶性肿瘤中的表达及临床意义

 目的 探讨恶性卵巢肿瘤组织中CD44V₃ 、CD44V₆ 的表达及其临床意义。方法 用免疫组织化学方法,检测41 例卵巢恶性肿瘤、20 例卵巢良性肿瘤和21 例正常卵巢组织中CD44V₃ 、CD44V₆ 基因蛋白的表达情况并分析相关的临床病理因素。结果 CD44V₃、CD44V₆ 表达阳性率恶性组显着高于良性组和正常组;有转移者CD44V₃ 、CD44V₆ 阳性率显着高于无转移者,转移灶阳性率高于原发灶;CD44V₃、CD44V₆ 阳性表达者近期疗效比阴性者差;CD44V₃ 、CD44V₆ 阳性表达率与病理类型、组织学级别无关。结论 CD44V₃、CD44V₆ 与近期疗效有关,可作为评估预后的指标。     

子宫内膜癌C—erbB2基因蛋白表达与预后的关系

目的:为探讨C-erbB2基因与子宫内膜癌的关系。方法:作者应用免疫组化检测了64例子宫内膜癌、16例正常子宫内膜、32例子宫内膜增殖症、5例子宫内膜息肉组织中C-erbB2基因蛋白的表达情况。结果:C-erbB2阳性表达率在癌、内膜增殖症、正常内膜分别为60.9％、21.9％、18.8％,息肉均无阳性表达,癌与增殖症、正常内膜比较差异有显著性(P<0.05)。C-erbB2阳性表达与临床分期、组织学分级有相关性,而与病理类型、肌层浸润无关。阳性表达的患者3年、5年生存率明显低于阴性患者(P<0.01)。结论:C-erbB2与子宫内膜癌的发生、发展密切相关,可以作为评估其恶性生物学行为和预后的指标。