KAI1/CD_(82)和MRP-1/CD_9在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因编码蛋白KAI1／CD82和能动性相关蛋白-1（MRP-1／CD9）在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学SP法观察52例膀胱癌石蜡标本中和KAI1／CD82和MRP-1／CD9的表达情况，结合临床资料进行分析。结果膀胱癌组织中KAI1／CD82和MRP-1／CD9的阳性表达率分别为50％和61．5％。KAI1／CD82和MRP-1／CD9阳性表达率在复发肿瘤中均随病理分级升高而下降（P〈0．05），但与临床分期无关（P〉0．05）。KAI1／CD82和MRP-1／CD9和的阳性表达率有显著相关性（r=0．316，P〈0．05）。结论KAI1／CD82和MRP-1／CD9的表达可能是判断膀胱癌生物学行为的重要指标。     

完全性肺静脉异位引流的外科治疗

完全性肺静脉异位引流（total anomonous puhnonary venous drainage，TAPVD）是一类低发病率的复杂心脏畸形，患者肺静脉血流人右心房，右心系统负荷增加，肺静脉回流受阻，造成淤血性肺静脉高压，最终导致肺动脉高压和右心功能衰竭而威胁患者的生命。同时也由于肺静脉血未回流左心房，使左心系统发育延缓，甚至发生退行性变，自然病程预后极差，其中50％于生后3个月内死亡，80％于1岁以内死亡，所以一旦明确诊断，应尽早手术治疗。现将我院1991年3月至2005年12月收治的49例TAPVD患者手术治疗情况报道如下：     

人VEGF基因转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

目的：建立人血管内皮生长因子165（hVEGF165）基因转染大鼠骨髓间充质干细胞的方法。方法：采用密度梯度离心-贴壁培养法获Wistar大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）,测定其生长曲线和表面标志CD34,CD44,CD45及SH3,检测其向成骨细胞及脂肪细胞诱导分化潜能后;用脂质体介导法将pcDNA3.1-hVEGF165导入MSCs,观察转染后细胞形态和生长状况,通过RT-PCR,Western blot和ELISA鉴定VEGF在MSCs中的表达情况。结果：大鼠MSCs经检测为CD44和SH3阳性,CD45和CD34阴性,可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞;经RT-PCR,Western和ELISA检测证实阳离子脂质体能成功地将hVEGF。转染至大鼠MSCs,并获得有效的表达。结论：真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165在MSCs中获有效表达。     

caspase-3在纳米磁药物靶向治疗胆管移植瘤组织中的表达

目的探讨纳米磁药物靶向治疗胆管移植瘤组织中凋亡相关基因caspase-3的表达。方法建立荷人胆管癌裸鼠模型，随机分为空白对照组、纳米磁药物组（药物浓度为250mg／kg）、纳米磁药物靶向A组（药物浓度为150mg／kg）和纳米磁药物靶向B组（药物浓度为250mg／kg）；取冶疗后第21d的各组肿瘤组织用免疫组化及RT—PCR法测量其中caspase-3的蛋白及mRNA表达量并进行分析。结果纳米磁药物靶向B组中caspase-3的表达量最高，其次依次为纳米磁药物靶向A组、纳米磁药物组，空白对照组几乎没有caspase-3蛋白及mRNA的表达，且各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论磁靶向治疗肿瘤后能引起更多凋亡相关基因caspase-3表达，并且随纳米磁药物剂量增加，caspase-3表达增多。     

MSCSHH心肌移植对大鼠心肌梗死后血管新生的作用机制研究

目的 探讨Sonic hedgehog（SHH）基因转染骨髓间充质干细胞并移植大鼠心梗区后,血管新生的变化及作用机制.方法 以结扎法制作大鼠急性心肌梗死模型,并按随机数字表法分为5组（每组40只）.分别在梗死周边部位移植BMMSCSHH（转染组）、等量的BMMSC（细胞组）、BMMSC和pcDNA3.1-Shh DNA的混合物（混合组）、单纯pcDNA3.1-Shh DNA质粒（基因组）、等容积的低糖DMEM培养基（对照组）.移植后第1、2、4、8周每组分别取10只为标本,qPCR检测移植后各组间移植部位Ptc1、Gli-2、COUP-TFⅡ等SHH信号传导通路下游基因以及血管内皮生长因子（VEGF）、Ang-1促血管再生因子的表达差异.结果 移植后第7天,转染组移植部位SHH下游基因Ptc1、Gli-2、COUP-TFⅡ表达分别较对照组、细胞组、基因组、混合组上调（Ptc1：P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05; COUP-TF Ⅱ：P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05;Gli-2：P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05）;转染组VEGF、Ang-1等促血管再生因子分别较对照组、细胞组、基因组表达上调（VEGF：P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05;Ang-1：P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05）,而与混合组比较差异无统计学意义,但有表达上升的趋势（VEGF：P＝0.147,Ang-1：P＝0.15）.而在后续第2、4、8周检测上述因子表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 转染SHH基因后的骨髓间充质干细胞移植大鼠心梗区后通过上调其下游基因表达促进血管新生,其作用随时间的推移逐渐减弱.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌梗死后细胞凋亡的作用

目的：探讨骨髓间充质干细胞心肌移植对大鼠心肌梗死区细胞凋亡的影响。方法：取大鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养、增殖和标记,同时以液氮冷冻左室游离壁建立心肌梗死模型,4周后分别将2×106个细胞悬液或冷D-Hanks液注入心肌梗死区数个不同部位。于移植后1周、2周和4周依次获取心肌梗死区标本。随机于第2周实验组与对照组中各抽取两个标本进行透射电镜检查,凋亡细胞计数,RT-PCR检测所有标本bcl-2 mRNA的表达。结果：部分心肌细胞呈调亡细胞初期形态改变,实验组和对照组调亡指数分别为0.02和0.08。bcl-2 mRNA在术后第1,2及4周的表达水平实验组与对照组相比均增加（P<0.01）,且随着时间的推移其表达量两组均呈迅速降低的趋势（P<0.01）。结论：骨髓间充质干细胞心肌移植可促进心肌梗死区Bcl-2蛋白表达,并减轻大鼠心肌梗死后细胞凋亡。     

纳米磁小体靶向药囊治疗人胆管癌细胞株移植瘤实验研究

目的:将纳米磁小体靶向药囊(TM5-FUNC)经尾静脉注射入胆管癌荷瘤裸鼠体内,通过埋植在移植瘤内的磁化支架所产生的磁靶向引导作用,TM5-FUNC选择性地聚集于裸鼠胆管癌移植瘤组织内;探讨此装置对人胆管癌的生长抑制作用。方法:建立人胆管癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分成6组,通过尾静脉按分组方案给药,分别将TM5-FUNC 250mg/kg、200mg/kg和150mg/kg组列为高、中、低剂量组。计算各组裸鼠肿瘤体积、抑瘤率和肿瘤生长曲线。处死裸鼠后,将肿瘤标本置电镜下观察肿瘤组织超微结构改变情况。结果:结合内置支架的TM5-FUNC高、中剂量组的移植肿瘤体积在治疗后35d与对照组比较有显著差异(P<0.05);TM5-FUNC低剂量组的肿瘤体积与对照组比较则无明显差异(P>0.05)。其肿瘤的抑制率分别为:高剂量组39.6%、中剂量组14.6%、低剂量组7.9%。从高、中、低剂量TM5-FUNC干预组中可见,随着药物浓度的增高,肿瘤生长越缓,高剂量组肿瘤生长曲线变化最为缓慢,中剂量组次之,其余组曲线变化较为一致。电镜结果显示,TM5-FUNC对荷瘤裸鼠的肿瘤细胞有诱导凋亡作用,且随着药物浓度的增大,细胞凋亡的形态改变越为明显。结论:本课题组所研制的TM5-FUNC新剂型,在内磁场的导向作用下,能有效抑制人胆管癌裸鼠移植瘤的生长。     

经脐单孔腹腔镜下保胆取石术的临床研究

目的:探讨经脐单孔腹腔镜保胆取石术临床应用的可行性及价值。方法:回顾性分析30例施行单孔腹腔镜下保胆取石手术(观察组)患者的临床资料并与同期开展的30例常规腹腔镜保胆手术(对照组)进行对比分析。结果:两组手术均顺利完成无中转开腹情况。两组术后住院时间、术中出血量、胆汁漏、术后胆囊内出血,胆囊功能减退、切口感染、结石残留、结石复发等指标对比分析,差异无统计学意义(P0.05)。在手术时间及住院费用上观察组多于对照组(P0.05)。结论:单孔腹腔镜保胆取石术可行、安全、微创,患者近期效果好,但需进一步的临床对比研究及远期观察。     

血糖控制对心脏瓣膜置换术患者乳酸水平的影响

目的：评价围手术期不同血糖控制水平对血清乳酸的影响,探讨血糖与乳酸的关系,寻求保护心肌的新途径。方法：把入选志愿者随机分为实验组(n=38)与对照组(n=33),实验组进行胰岛素强化治疗,对照组进行传统标准治疗,分别于患者换瓣术后在ICU不同时间点抽取动脉血进行血气分析,并收集相关资料数据进行分析。结果：两组病例的血糖均有一个血糖降低到升高再恢复的过程;两组病例的乳酸均有一个升高到降低再升高然后恢复的过程,尤其以术后2 h为最高;两组病例血糖、乳酸水平在术后2,12,24 h差异有统计学意义(P＜0.01),其余监测指标差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：瓣膜置换术后2,12,24 h血糖与乳酸水平变化趋势一致。通过控制血糖降低血乳酸水平,为该类疾病的心肌保护提供实验依据。     

HIF-1α基因克隆及其转染骨髓干细胞的实验研究

目的构建并鉴定HIF．1et真核表达载体HIF-1α-pcDNA3.1,研究HIF-1α真核表达载体HIF-1α-pcDNA3.1体外转染MSCs及HIF-1a基因在MSCs中的表达情况。方法抽提大鼠心肌细胞mRNA,以mRNA为模版,逆转录得到cDNA,PCR扩增HIF-let目的基因,连接到pGEM-T载体中,酶切,测序证实,双酶切将HIF-1α转至pcDNA3.1中。采用密度梯度离心-贴壁培养法获Wistar大鼠MSCs。采用脂质体介导技术将HIF-1α-pcDNA,,转染至MSCs,在倒置显微镜下观察转染后细胞形态和生长情况的变化,通过RT-PCR,Western和ELISA鉴定HIF-1α在细胞中的表达情况。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示RT-PCR扩增出的特异片段约2480bp,基因测序结果与GenBank报道的完全一致,成功构建了HIF-1α-pcDNA¨真核表达载体。采用Percoll密度梯度离心-贴壁培养法易获取大鼠MSCs。RT－PCR证实采用阳离子脂质体Lipofectamine2000转染的MSCs表达HIF－1α mRNA明显增加,West－era和ELISA检测证实转基因MSCs表达HIF－1α蛋白明显增加。结论成功克隆HIF-1仅基因,利用脂质体将HIF－1α-pcDNA3.1转染至MSCs,通过RT-PCR、Western和ELISA等检测证实外源性HIF－1α在MSCs中获有效表达。