RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌耐药细胞Topo Ⅱα基因表达并逆转耐药的体外研究

目的 探讨RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞TopoⅡα基因的表达是否能逆转耐药.方法 (1)设计并筛选针对Topo Ⅱα基因的、沉默效果最佳的小分子干扰RNA(siRNA),将其克隆到psilencer4.1-CMV-neo载体上;将psilencer4.1-CMV-neo-Tope Ⅱα重组质粒转染至受试细胞,建立稳定转染重组质粒的细胞Topo Ⅱα siRNA(+)SKOV3/DDP.(2)采用RT-PCR技术和蛋白印迹法测定稳定转染细胞中TopoⅡαmRNA和蛋白的表达;分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪和高效液相色谱法测定TopeⅡαRNA干扰前后细胞的耐药指数、细胞周期和细胞内顺铂含量的变化.结果 (1)转染psilencer4.1-CMV-neo-Topo Ⅱα质粒后能抑制SKOV3/DDP细胞中TopoⅡα基因的表达,TopeⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP和SKOV3/DDP细胞中TopoⅡα mRNA的表达水平分别为0和0.92±0.08;两种细胞中TopoⅡα蛋白的表达水平分别为0.51±0.04和1.95±0.09,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).(2)SKOV3/DDP细胞转染Topo Ⅱα siRNA后耐药指数下降,TopoⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP和SKOV3/DDP细胞的耐药指数分别为3.46和5.05,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)TopoⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP细胞的G_0/G_1期、G_2/M期细胞比例较SKOV3/DDP细胞增加,S期细胞比例减少(P均<0.05).(4)Topo Ⅱα siRNA(+)SKOV3/DDP细胞经20 μg/ml顺铂处理24 h后,其顺铂含量(157.20 ng)较SKOV3/DDP细胞(63.99 ng)升高,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 阻断卵巢癌耐顺铂细胞中Topo Ⅱα基因的表达能逆转其对顺铂的耐受性.     

复发上皮性卵巢癌的化学药物治疗

再次化学药物治疗是复发上皮性卵巢癌重要治疗手段之一,但仍存在诸多尚未解决的难题.现就近年来有关复发上皮性卵巢癌化疗的目标和价值、分型、化疗时机、化疗原则及化疗常用药物疗效的研究进展作一综述.     

抑制CDC25A表达的siRNA真核表达载体的构建

目的 在哺乳动物细胞中构建并鉴定抑制CDC25A表达的siRNA真核表达载体.方法 根据CDC25A的基因序列,设计特异性的siRNA,将合成的siRNA 核酸片段退火形成双链后连接到经Bam HI和HindⅢ双酶切后的psilencer4.1真核表达载体,命名为psilencer4.1-CDC25A以及psilencer4.1-Control,并进行酶切及测序鉴定.结果 通过酶切鉴定和序列测定,成功地构建出抑制CDC25A表达的siRNA载体及其阴性对照载体.结论 成功构建和验证了siRNA真核表达载体,为下一步研究奠定了良好的基础.     

腹腔镜检在孵巢癌二次探查术中的价值

对３８例术后多疗程化疗后临床常规检查无肿瘤征象的卵巢癌患者进行腹腔镜检结合剖腹探查。结果：镜下发现可疑病灶１４例，术后病理阳性９例；２４例镜下阴性者，术后病理阳性７例。腹腔镜下诊断与剖腹探查病理检查结果相对照，其诊断的敏感性为６４．３％，特异性为７０．８％，准确性为６８．４％。因此，腹腔镜检在卵巢癌二探术中有一定的临床诊断价值。尤其是对膈下病灶的发现有独到之处，但尚不能完全替代剖腹二次探查术。     

卵巢卵黄囊瘤18例临床及病理分析

本文对18例卵巢卵黄囊瘤进行临床及病理分析.结果:该瘤好发于青少年妇女,多为10～20岁.临床症状以腹部包块、腹痛为主.其病理形态复杂多样.治疗以手术加化疗为主.11例做AFP放免测定均为阳性.术后AFP测定有助于判断疗效及监测肿瘤复发.     

盆腔检查引起腹腔大出血三例报告

盆腔检查是妇科特有的检查方法,也是诊断妇科疾病的主要手段,一般很少发生意外。我科曾遇三例恶性滋养叶细胞肿瘤患者,盆腔检查后发生腹腔大出血,为从中吸取教训,特报告如下: 例一:张某;50岁、拟诊绒癌Ⅲ_B期于1985年9月15日入院。全身一般状况尚好。当日晚十时行盆腔检查,见宫颈光滑、着色,子宫如孕4个月大小、质轨、表面凹凸不平、活动差,未触及附件包块。妇检后不久,患者腹部剧痛、大汗淋漓、伴恶心呕吐,血压70/     

腹腔镜在卵巢癌诊断和处理方面的应用

卵巢癌发病率高,在妇女生殖道癌瘤中.它是造成死亡原因最高的一种。今天,一些重要的妇科恶性肿瘤,如子宫颈癌,子宫体癌和恶性滋养细胞肿瘤已经有了比较满意的办法,因而卵巢癌就自然成为妇科肿瘤专家主要研究的课题。腹腔镜为德国Palmal博士首创,于四十年代开始应用于临床,1979年美国腹腔镜协会主席philips将腹腔镜检查技术介绍到中国,目前,腹腔镜在妇科疾病的诊治上已经起到重要的作用,现介绍如下.     

多基因蛋白表达判断早期非小细胞肺癌术后化疗疗效的价值

目的 探讨多基因蛋白表达联合检查判断早期非小细胞肺癌(NSCLC)术后化疗疗效的价值.方法 采用组织芯片与免疫组织化学技术(二步法)相结合的方法,义寸86例NSCLC组织中caspase-3、Fas、bax、bcl-2,survivin,PCNA,Ki67,MGMT,p53,063,p73,p16、p27,VEGF、nm23、P-gP、MRP、LRP、GST-π、TopoⅡ、c-myc、cyclin D1、Her-2、Cox-2、Ku70、Ku80、DNA-PKcs、ERCCI、MSH2和BCRP等30种化疗相关蛋白进行检测,并分析其表达与早期NSCLC术后化疗疗效的关糸.结果 30种化疗相关蛋白在肺癌组织中的表达阳性率在27 9%～91.9%间.经过单因素分析,与早期NSCLC术后化疗效果密切相关的基因有8个,即survivin、P-gp、LRP、Ki67、p53、ERCC1高表达和bax、VEGF低表达的NSCLC患者术后化疗效果差.通过Logistic回归分析显示,ERCC1、survivin、bax和VEGF等4个基因联合检测对早期NSCLC术后化疗疗效的预测特异度达96.5%.结论 ERCC1、survivin、bax和VEGF是一组判断早期NSCLC术后辅助化疗效果、指导早期NSCLC的术后治疗的分子指标.     

子宫肌瘤钙化一例

子宫肌瘤整个钙化由X线盆腔照片首先发现的病例罕见报道。我科收治一例,现报告如下: 患者李××,66岁,已婚,因胃肠钡餐透视发现小骨盆钙化影四个月于1982年6月24日入院。患者16岁月经初潮后经量一向偏多,52岁绝经。绝经后无阴道流血流水,大小便正常。体检全身一般状况良好。妇检:外阴、阴道(-);子宫后位,鸭蛋大、质硬、活动、无压痛,双侧附件(-)。实验