体外转染canstatin核糖核酸诱导血管平滑肌细胞凋亡的研究

目的 :研究体外转染canstatin核糖核酸 (RNA)对培养的兔血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡的影响。方法 :在无菌条件下取新西兰白兔胸主动脉 ,采用阳离子脂质体介导的基因转染方法 ,将外源性canstatinRNA转入VSMC中 ,应用流式细胞仪 (FCM )、TUNEL及电镜观察canstatinRNA转染细胞的凋亡。实验共分对照组、DOSPER组和canstatin组。结果 :阳离子脂质体介导的canstatinRNA成功转入VSMC并表达 ,流式细胞仪检测表明 ,canstatinRNA转染细胞的细胞周期发生细胞生长期 (G1期 )阻滞 ,G1期细胞 ( 5 8 93± 2 17) %较对照组 ( 4 9 13± 2 0 7) %及DOSPER组 ( 4 9 99± 1 45 ) %增加 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,脱氧核糖核酸合成期 (S期 )细胞 ( 19 88± 2 2 8) %较对照组 ( 2 8 0 6± 3 77) %及DOSPER组( 2 8 5 0± 4 41) %减少 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。canstatin组RNA转染细胞的凋亡率 ( 17 74± 3 93) %高于对照组 ( 4 89± 3 5 9) %及DOSPER组 ( 4 0 6± 1 80 ) % ,有极显著性差异 (P <0 0 1) ,而对照组及DOSPER组无显著性差异 (P >0 0 5 )。TUNEL检测显示 ,canstatin基因转染细胞凋亡明显增加 ,电镜下观察到转染细胞出现典型凋亡特征性改变。结论 :阳离子脂质体介导的canstatinRNA成功转染VSMC并能显著     

脑损伤组织提取液对成年大鼠损伤的大脑皮质神经元的作用

本研究的目的是探讨神经元的再生。ＳＤ成年雄性大白鼠３８只，随机配对为实验组和对照组。大鼠经切除双侧大脑皮质顶叶下正中部分（４ｍｍ×３ｍｍ×１ｍｍ），用大约２ｍｍ×２ｍｍ×１ｍｍ海绵胶（ｇｅｌｆｏａｍ）粒浸入脑损伤组织提取液（ＢＷＴＥ）中，术时将上述海绵胶粒放入大脑皮质损伤腔内，２个月内加入ＢＷＴＥ４次。对照组用上述方法加入等量的Ｈｎｎｋ’ｓ液，术后６０ｄ取材。取含损伤腔的大脑皮质，用Ｎｉｓｓｌ染色，辅以神经丝抗体免疫染色以及电镜结合体现学定量方法分析，结果实验组与对照组相比发现ＢＷＴＥ组可明显促进损伤皮质神经无的存活（Ｐ＜０．００１）。实验组出现较多胞体增大的神经元（Ｐ＜０．０２），且多具有粗大的顶树突。体视学定量方法分析结果是：神经元的线粒体体密度、数密度、面密度以及粗面内质网的面密度均较对照组增加（Ｐ＜０．０５）。提示ＢＷＴＥ对成年大鼠损伤的皮质神经元具有神经营养活性，可能含有神经营养因子（ｎｅｕｒｏｎｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒｓ，ＮＴＦｓ）。     

TGFα—SAP对平滑肌细胞增殖和内膜增生的抑制作用

目的：探讨生物导向药物TGFα－SAP对平滑肌细胞增殖及动脉损伤后内膜增生的特异性抑制作用。方法：用SPDP化学联结的方法合成TGFα－SAP，采用细胞计数方法观察TGFα－SAP对培养中的增殖平滑肌细胞的细胞毒性作用。并以^3H-leucine渗入法进一步了解TGFα－SAP对平滑肌细胞的蛋白质合成的影响；在体实验中将Sprague-Dawle大鼠随机分为治疗组和对照组，均行右颈总动脉球囊内膜剥脱术，治疗组术后避部注射TGFα－SAP，对照组予以生理盐水，于不同时间点处死动物取动脉段行光镜观察及计算机图像分析。结果：从体外实验可见TGFα－SAP能明显抑制SMCs的生长增殖及蛋白质合成；在体实验中图像分析结果显示：动脉损伤后TGFα－SAP治疗组在第3，9和28天内膜／内膜加中膜面积显著小于对照组（P＜0．05），结论：TGFα－SAP与Saporin相比对增殖平滑肌细胞具有明显增强的细胞毒性，在体实验中亦可见其对损伤后的内膜增生具有明显的抑制作用。     

超声介导载三突变型人低氧诱导因子-1a基因微泡靶向传输

目的血管新生疗法有望成为治疗缺血性心血管疾病的新方法。然而,基因传输的有创性阻碍了血管新生疗法的深入发展,超声介导的基因转移技术为基因传输带来了希望。因此,本研究探讨超声介导载人三突变型人低氧诱导因子-1a(Hypoxia inducible factor-1a,HIF-1a)基因微泡靶向传输促缺血下肢血管新生的可行性。方法 24只实验小鼠予结扎一侧下肢股动脉制备下肢缺血模型,另一侧下肢作为对照组。术后1周所有小鼠随机等分为3组,A组:尾静脉注入HIF-1a基因微泡+超声照射;小鼠仰卧位,通过尾静脉10 min内恒速输注载基因微泡,同时将超声探头垂直固定于缺血下肢,照射10 min(探头17L5,频率7.0 MHz,机械指数1.9);B组:尾静脉注入HIF-1a基因微泡;C组:超声照射(同A);采用Western Blot检测基因转染后第5天人HIF-1a蛋白表达情况,转染后第2周利用超声灌注成像评价缺血下肢血流情况,免疫荧光染色检测微血管密度。结果 WesternBlot显示人HIF-1a蛋白的表达在A组显著高于B组,差异有统计学意义(P<0.05),两者均较C组显著增加。血流灌注成像显示转染后第2周中A组缺血下肢的血流量达到对侧非缺血下肢血流量的79.3%±6.4%,显著高于B组60.0%±4.2%和C组52.3%±3.8%,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色显示A组的毛细血管密度和小动脉密度均显著高于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论超声介导的载人三突变型HIF-1a基因微泡可实现向小鼠缺血下肢的靶向传输,并产生促血管新生效应。     

急性冠状动脉综合征与血浆基质金属蛋白酶1、3及组织型基质金属蛋白酶抑制物2关系的临床研究

目的:探讨基质金属蛋白酶(MMP)1、3及组织型基质金属蛋白酶抑制物2(TIMP2)水平改变与急性冠状动脉综合征(ACS)及非ACS之间的关系,为临床早期诊治ACS提供客观指标。方法:230例于2008-01至2011-06行冠状动脉(冠脉)造影的心内科住院患者,依临床及冠脉造影分组:ACS组98例,包括不稳定型心绞痛亚组61例、急性心肌梗死亚组37例;非ACS组81例,包括稳定型心绞痛亚组49例、冠脉慢性完全闭塞亚组32例;对照组51例(正常冠脉)。于冠脉造影后抽动脉血检测血浆MMP1、MMP3、TIMP2水平。结果:与对照组比较,MMP1在ACS组及非ACS组均明显增高(P均<0.001);MMP3在ACS组显著增高(P<0.01),非ACS组无明显增高(P>0.05);TIMP2在非ACS组中显著增高(P均<0.01)。与非ACS组比较,ACS组MMP1、MMP3增高及TIMP2降低差异均有统计学意义(P均<0.05)。亚组分析中,与对照组相比,各亚组MMP1水平增高(P<0.05～0.001);MMP3在不稳定型心绞痛亚组及急性心肌梗死亚组均显著增高,TIMP2在稳定型心绞痛亚组及冠脉慢性完全闭塞亚组均显著性增高(P均<0.001),差异均有统计学意义。结论:ACS及非ACS患者血浆MMP1水平增高提示MMP1可能与冠心病发生有关;MMP3水平仅于ACS患者中增高提示MMP3可能为ACS发生的重要影响因素;TIMP2水平增高只出现于非ACS患者提示TIMP2增高可能有益于斑块的稳定性。     

Antisense oligodeoxynucleotides downregulated c sis mRNA expression to inhibit proliferation of vascular smooth muscle cells 1

目的：研究ｃｓｉｓ反义寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对ｃｓｉｓ表达及血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖抑制效应．方法：用合成ｃｓｉｓ正、反义ＯＤＮ培养ＶＳＭＣ;用液闪测定［３Ｈ］ＴｄＲ掺入并细胞计数,观察细胞增殖;用逆转录ＰＣＲ,评价ｃｓｉｓ表达．结果：ｃｓｉｓ反义ＯＤＮ２,４,６,８,１０μｍｏｌ·Ｌ－１抑制ＶＳＭＣ（１０３％±０７％,２２６％±０９％,３１０％±１１％,３５４％±０９％,４３３％±１２％）和降低［３Ｈ］ＴｄＲ掺入（６８％±０３％,９７％±０７％,２９０％±０６％,３２０％±０７％,５０６％±１３％）呈有剂量依赖性．反义ＯＤＮ１０μｍｏｌ·Ｌ－１培养细胞４ｄ,最大抑制率达６０３％±１０％,［３Ｈ］ＴｄＲ掺入降低５６３％±０９％,ｃｓｉｓｍＲＮＡ表达明显降低;而正义ｃｓｉｓＯＤＮ对ＶＳＭＣ无抑制,细胞数和［３Ｈ］ＴｄＲ掺入及ｃｓｉｓｍＲＮＡ水平与对照无差异．结论：ｃｓｉｓ反义ＯＤＮ明显下调ｃｓｉｓｍＲＮＡ表达,显著抑制ＶＳＭＣ增殖     

高效液相色谱法测定C-sis硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸血清浓度

目的建立C-sis硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸(C-sis PS-AODN)血清浓度测定的HPLC法.方法采用醋酸缓冲液-乙腈-水(3988)流动相,氰基色谱柱,采用乙腈沉淀的样品处理方法.结果C-sis PS-AODN在19.6～314.0μg@mL-1血清浓度范围内线性良好,r=0.9998,回收率为(97.9±3.3)%,日内和日间变异系数均在1.4%～8.2%范围内.结论本方法适用于C-sis PS-AODN体内、外血清浓度分析和药代动力学研究.     

β_3肾上腺素能受体基因多态性与高血压病相关性研究

目的:研究中国人群β3肾上腺素能受体(β3-AR)基因Trp64Arg突变频率以及该突变对高血压病患者临床特征的影响。方法:应用PCR/RFLP技术检测186例中国人(健康体检者58例,高血压病患者128例)的β3-AR基因Trp64Arg突变基因型,并比较两组的临床特征。结果:(1)高血压病组与对照组β3-AR基因Trp64Arg突变频率分别为13.3%与11.2%,两者差异无显著性(P>0.05)。β3-AR基因Trp64Arg突变者的体重指数显著高于正常基因型(P<0.05)。(2)突变与否间的临床特征差异无显著性(P>0.05)。结论:β3-AR基因突变杂合子型(Trp/Arg)可能不是高血压病发生的决定因素。但Trp/Arg杂合子与Trp/Trp纯合子人群间体重指数差异有显著性,该基因变异被证实可能与肥胖等表现存在相关。     

三突变型低氧诱导因子－1α基因对老年小鼠缺血下肢血管的新生效应

目的探讨三突变型低氧诱导因子－1α（ HIF－1α）基因对老年鼠缺血下肢的血管新生效应。方法24只老年小鼠结扎一侧下肢股动脉制备下肢缺血模型并随机等分为3组,分别经肌肉注射生理盐水（ NS）、腺病毒包裹的β－半乳糖苷酶基因（ Ad－LacZ）、腺病毒包裹的Pro402、Pro564、Asn803三位点突变型HIF－1α基因（ Ad－TM）。术前、术后0、7、14、21、28 d分别对小鼠双侧下肢骨骼肌行对比超声灌注成像评价缺血下肢骨骼肌的血流情况（用缺血下肢血流量／对侧非缺血下肢血流量表示）。术后28 d处死小鼠取下肢骨骼肌行免疫荧光染色标记Bandeira simplificifolia－1凝集素（ BS－1 lectin）评价微血管密度（用微血管／骨骼肌纤维表示）。结果对比超声灌注成像显示：术前双下肢血流量基本相等,术后0 d 3组的血流量均下降至15％左右,3组之间差异无统计学意义（ P＞0.05）。随着时间的推移,3组的血流均有所恢复,其中,Ad－TM组的血流恢复快于其他两组,术后28 d,Ad－TM组中缺血下肢的血流量达到对侧非缺血下肢血流量的（66.6±8.9）％,较NS组的（34.2±6.3）％和Ad－LacZ组的（35.7±5.4）％显著增加,差异有统计学意义（P＜0.01）。免疫荧光染色显示：Ad－TM组的微血管密度1.06±0.10显著高于NS组0.36±0.04和Ad－LacZ组0.35±0.04,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论三突变型HIF－1α基因可有效促进老年鼠缺血下肢血管新生。