诃子及其混淆品RAPD分析

目的：对不同品种的诃子进行ＤＮＡ指纹图的鉴别研究,并对ＲＡＰＤ在中药材鉴别中存在的一些问题进行研究。方法：应用ＲＡＰＤ技术对诃子及其常见混淆品进行ＤＮＡ指纹图多态性的比较。结果：ＤＮＡ指纹图显示,各样品间具有不同的遗传关系,根据这些差别可进行鉴别,同时对存在的若干问题提出了解决的方法。结论：ＲＡＰＤ可以有效地鉴别诃子及其混淆品。     

转基因技术在药用植物中的应用

药用植物是我国中药宝库的重要组成部分,应用植物转基因技术提高植株抗病性,优化中药植物种质资源,培育药效成分量高的新型转基因药材,或以基因工程细胞生产药用价值高、来源有限的中药活性成分,对中药现代化和可持续性发展具有重要意义.结合转基因植物的历史发展与植物转基因技术现状,论述了基因工程技术在传统中药材中的应用和发展前景.     

农杆菌介导鱼腥草遗传转化的主要影响因素

目的：研究鱼腥草遗传转化的影响因素,以提高转化效率,获得转基因植株。方法：通过分析GUS报告基因的瞬时表达和外植体愈伤分化情况比较菌株质粒组合、菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养时间、抗生素种类和浓度等因素对转化的影响,应用PCR和Southern blot技术鉴定转基因植株基因组中的外源基因。结果：菌液浓度A600为0.3、26℃侵染15min条件下侵染,添加乙酰丁香酮有利于转化,适宜的预培养时间和共培养时间与菌株/质粒组合有关,农杆菌LBA4404/pBI121优于EHA105/pCAMBIA1305.2组合。经条件优化,转化外植体的GUS染色阳性率在60%～80%之间,经鉴定外源基因已整合到转基因鱼腥草基因组中。结论：通过影响因素的优化研究,获得了鱼腥草转基因植株,为培育鱼腥草基因工程新品种奠定了基础。     

大黄牡丹汤提取液对结肠炎小鼠的治疗及作用机制研究

目的 研究大黄牡丹汤提取液对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的结肠炎小鼠的治疗作用。方法 TNBS/乙醇溶液一次性灌肠建立结肠炎小鼠模型,大黄牡丹汤提取液低剂量(0.5 g·L-1)、中剂量(1 g·L-1)、高剂量(2 g·L-1)3个不同剂量灌胃治疗6 d,通过观察小鼠一般情况及结肠病理学变化,检测大黄牡丹汤提取液对结肠炎小鼠的治疗作用。用流式细胞术检测外周血、派氏结、肠系膜淋巴结中Treg细胞的变化,ELISA检测小鼠外周血白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子(TGF-β)的变化。结果 与模型组比较,大黄牡丹汤提取液各组小鼠疾病活动指数(DAI)评分、大体评分、病理学评分都有降低趋势。中剂量组小鼠大体评分、病理学评分都明显降低(2.29±0.76,2.86±0.69 VS 5.86±0.90,5.86±1.07,P ＜ 0.05),外周血、肠系膜淋巴结、派氏结Treg细胞,外周血IL-10、TGF-β升高,差异有统计学意义(P ＜ 0.05)。结论 大黄牡丹汤提取液各剂量组对结肠炎小鼠均有一定的治疗作用,治疗的机制可能与提高Treg细胞水平有关。     

加味四君子汤对脾虚小鼠心钠素水平的影响

心钠素(ANF)是一种多肽类激素,对机体许多生理过程起着重要的调节作用。本文采用利血平所致脾虚小鼠模型,发现其血浆ANF水平较正常显著降低(P<0.001),而脾组织ANF水平升高显著(P<0.001),加味四君子汤对这种变化有明显的纠正作用,提示ANF与脾虚发病机理和加味四君子汤药理作用机理有一定关系。实验还表明,加味四君子汤使脾虚小鼠一般情况改善,并对脾虚模型小鼠体重及胸腺、脾脏、睾丸和子宫的湿重减轻有显著的保护作用。     

川芎嗪对3T3-L1增殖分化及分泌Leptin、PAI-1的影响

目的:研究川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)对小鼠前脂肪细胞3T3-L1增殖分化和分泌瘦素(Leptin)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的影响。方法:培养3T3-L1细胞,并分别用川芎嗪5μg/m L、50μg/m L、100μg/m L 3个浓度进行干预,四甲基偶氮唑盐(MTT)测定3T3-L1的增殖;油红O进行染色以及染色比色法测定细胞分化程度;酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养上清中Leptin、PAI-1含量。结果:川芎嗪100μg/m L浓度组能明显抑制3T3-L1细胞的增殖,差异有统计学意义(P0.01);3个浓度组对细胞分化均无明显影响;TMP 3个浓度组对Leptin的分泌和50μg/m L、100μg/m L浓度组对PAI-1的分泌均有明显抑制作用,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:川芎嗪对脂肪细胞的调节作用以影响其分泌功能为主。     

儿茶素对变应性鼻炎小鼠Th17/Treg表达的影响

目的观察儿茶素(Catechin)对变应性鼻炎小鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)表达的影响。方法将48只雌性Balb/c小鼠随机分为6组,即正常对照组,模型组,儿茶素低、中、高剂量组(75,150,300 mg·kg~(-1))和氯雷他定组(2.05 mg·kg~(-1)),每组8只。采用卵清蛋白(OVA)致敏和激发构建变应性鼻炎小鼠模型。记录小鼠打喷嚏、挠鼻等鼻部症状积分;采用HE染色观察鼻黏膜组织病理改变;采用流式细胞微球芯片捕获技术(Cytometric Bead Array,CBA)检测肺组织匀浆液中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、调节正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)的含量;采用q PCR法检测鼻黏膜中Th17、Treg特异性转录因子维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、Forkhead家族转录因子3(Foxp3)m RNA表达水平。结果与正常对照组比较,模型组小鼠挠鼻、打喷嚏次数明显增加(P0.05),MCP-1、RANTES及RORγt m RNA表达量明显升高(P0.05),Foxp3 m RNA表达量明显降低(P0.05)。与模型组比较,儿茶素高剂量组可显著减少挠鼻次数,降低RANTES表达量(P0.05);儿茶素各剂量组均可明显减少打喷嚏次数和降低MCP-1表达量(P0.05);儿茶素中、高剂量组可显著降低鼻黏膜RORγt m RNA表达水平(P0.05),提高Foxp3 m RNA表达水平(P0.05)。结论儿茶素可有效缓解变应性鼻炎小鼠鼻黏膜炎性症状,可能与恢复Th17/Treg平衡有关。     

苦瓜水提物对免疫抑制小鼠肠道黏膜免疫功能的影响

目的 研究苦瓜水提物(Momordica Charantia Aqueous Extract, MCAE)对环磷酰胺(Cyclophosphamide,Cy)致免疫抑制小鼠的肠道黏膜免疫功能的影响。方法 通过CCK-8法检测肠系膜淋巴结(mesenteric lymph nodes,MLN)和派氏结(Peyer’s Patches,PPs)淋巴细胞转化增殖;流式细胞术检测MLN及PPs中B淋巴细胞的比例和活化水平;ELISA试剂盒检测肠道sIgA的分泌水平。结果 与Cy诱导的免疫抑制模型组比较,MCAE中、高剂量(200,400 mg·kg-1)分别对Cy抑制的小鼠MLN和PPs淋巴细胞转化增殖能力有一定的上调作用(P ＜ 0.05);MCAE中剂量对MLN和PPs中B淋巴细胞比例及活化水平的降低同样具有一定的上调作用(P ＜ 0.05,P ＜ 0.01)。结论 苦瓜水提物对Cy诱导的肠道黏膜免疫功能低下有一定的上调作用,其作用机制可能与MLN和PPs中B淋巴细胞的增殖、活化有关。     

中药注射剂所含吐温-80与过敏反应关系的研究

目的：观察不同浓度吐温-80溶液、吐温-80含量不同的中药注射剂对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,探讨中药注射剂所含吐温-80与过敏反应的关系。方法：体外培养RBL-2H3细胞,加入不同浓度（40、20、10、2、1、0.2、0.1、0.05mg/mL）的吐温-80溶液,之后加中性红染液,计数不同浓度吐温-80溶液各组及对照组的脱颗粒细胞,并计算其百分率,同时检测细胞上清液中β-氨基己糖苷酶及组胺的释放量;测定穿琥宁注射液和香丹注射液中吐温-80的含量,2种中药注射剂对RBL-2H3细胞的半数抑制浓度（IC50）以及加入2种注射液各组细胞释放组胺的量。结果：中性红染色实验显示吐温-80可导致RBL-2H3细胞脱颗粒,表现为肥大细胞体积变大,内有空泡产生;浓度为40、20、10、2、1、0.2、0.1mg/mL的吐温-80溶液各组和RPMI1640对照组导致细胞的脱颗粒百分率分别为（57.38±0.47）、（32.54±2.33）、（21.74±0.72）、（16.96±0.26）、（11.40±1.70）、（9.71±0.26）、（7.22±0.15）和（1.51±1.39）%,2组相比差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）;浓度为40、20、2、1、0.2mg/mL的吐温-80溶液各组和RPMI1640对照组致细胞β-氨基己糖苷酶的释放率分别为（52.44±1.53）、（18.91±0.77）、（7.50±1.82）、（6.65±0.20）、（6.15±0.27）和（0.35±0.06）%,2组相比差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）;不同浓度吐温-80溶液引起RBL-2H3细胞释放组胺的量也不同;当吐温-80溶液浓度为20～0.1mg/mL时,RBL-2H3细胞脱颗粒百分率、β-氨基己糖苷酶的释放率及其释放组胺的量均与吐温-80溶液的浓度呈线性关系（r=0.9862,r=0.9849,r=0.9740）。穿琥宁注射液和香丹注射液中吐温-80的含量分别为（0.086±0.004）和（0.070±0.008）mg/mL,2种注射液对RBL-2H3细胞的IC50分别为（57.4±1.2）、（1.0±0.2）μL/mL,穿琥宁注射液和香丹注射液组组胺释放量分别为（2.39±0.01）和（1.87±0.00）ng/mL。结论：吐温-80可引起RBL-2H3细胞脱颗粒释放炎症介质;RBL-2H3细胞组胺的释放量与中药注射剂中吐温-80的含量有关;中药注射剂中所含的吐温-80可能与过敏反应的发生有关。     

乙型肝炎表面抗原无症状携带者血清检测结果分析

[目的]进一步了解HBsAg无症状携带者(ASC)的感染特点,探讨HBsAg滴度与HBeAg、抗-HBe和抗-HBc检出的相关性,为制订ASC的管理措施和消除乙肝传染源提供依据。[方法]1201份HBsAg阳性血清来源于2001年1～12月到我站预防医学门诊进行健康体检的饮食及公共场所从业人员中筛选出的ASC。HBsAg、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc,检测利用ELASA法。[结果]HBeAg、抗-HBe、抗-HBc阳性率分别为39.13％、37.46％、67.44％,HBsAg滴度与HBeAg、抗-HBe、抗-HBc关系密切,HBeAg以高滴度为主,抗-HBe则多分布在低滴度者中,而HBsAg滴度的高低与抗-HBc检出关系不大;30岁以下青年人中HBeAg检出明显高于30岁以上中壮年,男女之间无显著性差异。[结论]HBsAg滴度高低与HBV传染性强弱密切相关。