MICA第5外显子微卫星多态性与食管癌相关性研究北大核心CSCD

目的:研究MICA第5外显子微卫星多态性与食管癌相关性。方法:采用PCR-STR微卫星基因分型技术检测103例食管癌患者和84例正常对照MICA基因5外显子多态性。构建食管癌标本中高频率出现的MICA等位基因的真核表达载体,转染293T细胞株,LDH法检测NK细胞对不同MICA等位基因转染的293T细胞的杀伤作用,效靶比20∶1。ELISA法检测转染的293T细胞上清中s MICA含量。结果:食管癌患者第5外显子检测到5种等位基因,频率分别为:MICA-A4(9.71%),MICA-A5(22.3%),MICA-A5.1(40.8%),MICA-A6(15.5%),MICA-A9(11.7%),其中MICA-A5.1与对照组对比差异有统计学意义(P<0.05)。MICA等位基因转染293T细胞株后,相对于其他第5外显子A5.1组对NK杀伤的敏感性较低[(30.4±6.3)%,P<0.05],上清可溶性MICA分泌增加(135.7±6.2)pg/ml。结论:食管癌与MICA第5外显子多态性A5.1显著性相关,其危险性高于其他等位基因。     

原发性肝癌和癌旁组织中NK细胞受体表达及意义

目的:通过研究原发性肝癌和癌旁组织中NK细胞表面受体活化性及抑制性受体的表达,分析探讨这两种受体含量变化在原发性肝癌发生发展中的关系及其临床价值。方法:通过流式细胞术及免疫组织化学方法检测52例原发性肝癌组织及其癌旁组织中NK细胞数及其活化性、抑制性受体的表达,并结合临床相关因素进行统计学分析。结果:原发性肝癌的NK细胞数量明显低于癌旁对照组(P<0.01),原发性肝癌组织活化性受体NKG2D、NKP44明显低于癌旁组织(P<0.05),而抑制性受体CD158b、CD159a明显高于癌旁组织(P<0.05)。NKG2D、NKP30、NKP44的表达与肝癌临床分期负相关,即在早中期的患者含量较高,越晚期患者肝癌组织中NKG2D、NKP30、NKP44含量越低(P<0.05),NK细胞中抑制性受体CD158b、CD159a的含量在越晚期患者肝癌组织中含量越高(P<0.05)且与AFP高低有关及HBsAg的感染有联系。而NK受体的表达在是否有远处转移、肿瘤分化程度之间以及不同的病灶大小之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:原发性肝癌发病可能与NK细胞减低及NK细胞活化性受体表达降低、抑制性受体表达升高有关。     

MICA分子在NK细胞杀伤乳腺癌中的作用

目的 观察乳腺肿瘤细胞膜MHC Ⅰ链相关分子A(MHC class Ⅰ chain-related gene A,MICA)及血清中可溶性MICA表达,探讨MICA在NK细胞杀伤乳腺癌中的作用.方法 流式细胞术检测膜型MICA(mMICA)及NK细胞表面NKG2D表达,观察膜型MICA、可溶性MICA(sMIcA)对NKG2D表达的影响;免疫组织化学检测膜型MICA及可溶性MICA的表达及分布;抗体封闭法观察膜型MICA与NKG2D相互作用.结果 乳腺细胞膜型MICA在正常组织不表达,在良性肿瘤表达量为(38.5±7.5)%,恶性肿瘤表达量为(53.2±5.6)%.可溶性MICA含量在健康成年人为阴性,在乳腺良性肿瘤患者血清中含量(76.8±22.3)pg/mL,在恶性肿瘤患者中含量(205.36±71.27)pg/mL.经NKG2D或MICA抗体封闭后,NK细胞的杀瘤活性显著减弱.含可溶性MICA的血清可明显下调NKG2D的表达.结论 大部分乳腺肿瘤细胞膜都有MICA的表达,可作为乳腺肿瘤相关性抗原.膜型MICA与NKG2D的相互识别在介导NK细胞抗乳腺癌中起重要作用,而可溶性MICA通过下调NKG2D表达介导肿瘤免疫逃逸.     

探讨地西他滨短时刺激对RAK细胞免疫表型及抗癌活性的影响北大核心CSCD

目的:探讨地西他滨(DAC)对重组人纤维连接蛋白活化杀伤细胞(RAK)增殖、免疫表型及抗肝癌效应的影响。方法:采用RetroNectin、CD3单抗及rhIL-2诱导外周血单个核细胞以培养RAK细胞,培养第1天加入不同浓度的DAC(0、50、500、1 000、2 000、3 000 nmol/L)刺激24 h后,全量换液。培养第4、7、10、12天,采用血球计数仪进行细胞计数,CFSE检测细胞增殖水平;流式细胞术检测不同培养时间各浓度DAC刺激的RAK细胞的免疫表型;Annexin-Ⅴ/PI检测细胞凋亡水平;以CD107a、IFN-γ、穿孔素、颗粒酶-B表达水平评估各组RAK细胞的抗肝癌效应。结果:随着培养时间延长,DAC浓度越高,细胞增殖抑制越明显(P<0.05)。与对照组相比,DAC短时刺激的RAK细胞在培养10 d后,高浓度DAC组(≥1 000 nmol/L)RAK细胞CD4比例显著增加,CD8比例及CD4+和CD8+的中央记忆细胞(TCM)比例呈下降趋势(P<0.05)。培养第12天NKT水平显著升高(P<0.05),随着DAC浓度增高细胞凋亡水平显著升高(P<0.05)。与其他DAC浓度组相比,1 000 nmol/L DAC刺激组CD107a、IFN-γ、穿孔素表达显著升高(P<0.05)。结论:RAK细胞经1 000 nmol/L DAC短时刺激后,可提高CD4、CD4+TCM及NKT比例,增强对肝癌细胞的细胞毒效应。     

MICA基因多态性与乳腺癌细胞对NK细胞杀伤的敏感性

目的：探讨MHC-Ⅰ类链相关分子A（MHC class I chain-related molecule A,MICA）多态性与乳腺癌细胞对NK细胞杀伤敏感性的关系。方法：测序分析乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S和SK-BR-3 的MICA等位基因,用Western blotting 和流式细胞术检测MICA 重组表达载体转染293T 细胞（分别命名为pMCFA5.1、pMCFA4、p231A5R、p231A9 和p435A5P）MICA蛋白的表达水平,用LDH法检测NK细胞对转染MICA的293T细胞的杀伤活性,酶联免疫斑点法检测NK细胞穿孔素、颗粒酶B分泌水平。结果：MCF-7 细胞表达MICA*008/A5.1 和MICA*001/A4,MDA-MB-231 和SK-BR-3 细胞均表达MICA*019/A5 和MICA*002/A9,MDA-MB-435S 细胞表达MICA*010/A5。转染MICA 后,pMCFA5.1 组293T 细胞MICA蛋白的表达水平最低（P<0.05）,p435A5P组次之（P<0.05）,pMCFA4 组、p231A5R组和p231A9 组表达水平较高（均P<0.05）。NK细胞对转染MICA的293T细胞杀伤活性及穿孔素、颗粒酶B分泌：p435A5P组对NK细胞杀伤的敏感性最低（P<0.05）,穿孔素、颗粒酶B分泌水平最低（均P<0.05）;pMCFA5.1、pMCFA4、p231A5R和p231A9 各组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：MICA基因多态性与乳腺癌细胞对NK细胞杀伤的敏感性密切相关。