ERR1突变体I240R对其转录活化功能的影响

目的　分析ERR1突变体I240R对ERR1转录活化功能的影响。方法　用重叠延伸PCR构建ERR1的缺失突 变体ERR1 I240R到真核表达质粒pSG5上,通过荧光素酶报告基因表达系统检测ERR1 I240R对ERR1转录活化功能的影 响。结果　测序证实成功构建了ERR1的突变体pSG5 ERR1 I240R。报告基因表达系统检测显示ERR1 I240R激活的荧光 素酶报告基因活性明显高于野生型的ERR1。结论　ERR1突变体ERR1 I240R转录活化功能明显高于野生型的ERR1,为 进一步研究ERR1的结构与功能打下了基础。     

PNRC多肽通过干扰核受体途径抑制BT474细胞的增殖

目的:运用核受体辅活化子PNRC的抗Ras PTD融合多肽(PTD-PARP)研究其在乳腺癌细胞BT474中的分布、对核受体信号传导途径的影响及其抗肿瘤细胞增殖活性.方法:用多肽合成仪合成PTD-PARP、单独的PARP和PTD多肽以及FTFC标记的PTD-PARP、PARP.HPLC分析和纯化后,荧光显微镜结合流式细胞仪检测PTD-PARP、PARP在BT474细胞中的分布.虫荧光素酶报告基因检测PTD-PARP对野生型PNRC辅活化ER反式激活功能的影响.MTS、软琼脂克隆形成实验检测PTD-PARP对BT474细胞的抗增殖活性.结果:PTD-PARP能进入BT474细胞,抑制野生型PNRC辅活化ER的反式激活功能并抑制BT474细胞的增殖.结论:PNRC抗RasP DT融合多肽可通过干扰核受体途径抑制乳腺癌细胞的增殖.     

PNRC肽通过影响Ras信号途径抑制BT-474细胞的增殖

背景与目的:根据富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白(proline-rich nuclear receptor coregulatory protein,PNRC)与Grb2相互作用位点资料和其他基于干扰Grb2/SH3与SOS的相互作用的富含脯氨酸短肽的设计原则,我们设计、合成了基于PNRC的抗Ras、PTD融合多肽(PTD-PARP),研究该多肽在BT474乳腺癌细胞中对Ras信号途径的影响及其抗肿瘤增殖活性.方法:用多肽合成仪合成PNRC的抗Ras PTD融合多肽PTD-PARP和其单独的PTD多肽.以PTD多肽为对照,将增加浓度的PTD-PARP与分离的、EGF刺激的BT474细胞裂解物共温育,采用免疫共沉淀结合Western blot检测Grb2免疫共沉淀复合物中SOS和PNRC的含量情况.用PTD-PARP-琼脂糖凝胶4B活化偶联磁珠免疫共沉淀BT474细胞裂解物,采用P13K,Nck和Grb2的抗体检测沉淀复合物中这些含SH3结构域的蛋白与PTD-PARP的结合能力.Western blot检测PTD-PARP对EGF刺激的BT474细胞内Ras和MAPK活化的影响.采用软琼脂克隆形成实验考察PTD-PARP对BT474细胞体外增殖的影响.结果:PTD-PARP能以剂量依赖方式抑制SOS、PNRC与Grb2的结合,它与Grb2的结合具有特异性,PTD-PARP能降低BT474细胞中EGF刺激的Ras和MAKP活化,并能显著抑制BT474细胞的体外软琼脂克隆形成.结论:PNRC抗Ras PTD融合多肽可通过影响Ras信号途径抑制乳腺癌细胞的增殖.     

利用酵母双杂合系统筛选与hERRα1相互作用的蛋白质

目的 利用酵母双杂合系统筛选乳腺组织中与人雌激素受体相关受体α1(Human estrogen receptor relatedreceptorα1，hERRα1)相互作用的蛋白质，特别是新的核受体辅助活化因子，以进一步研究核受体辅助活化因子在乳腺癌发生、发展中如何参与ERRl调控基因的表达。方法 以质粒pGBT9-hERrα1／LBD为“诱饵”，筛选人乳腺组织cDNA文库。结果 筛得有阳性相互作用的克隆共17个。除3种为已知核受体辅助调节因子外，其他为功能已经明确的蛋白，其中有3种与hERRα1有明显相互作用。结论核受体辅助活化因子SRc-1，RIP140，TRIP及数种已知蛋白能与孤儿核受体hERRα1在乳腺组织中相互作用。     

PNRC多肽通过影响Ras信号途径抑制BT-474细胞的增殖

背景与目的：根据富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白（proline-rich nuclear receptor coregulatory protein, PNRC）与Grb2相互作用位点资料和其他基于干扰Grb2／SH3与SOS的相互作用的富含脯氨酸短肽的设计原则，我们设计、合成了基于PNRC的抗Ras、PTD融合多肽（PTD—PARP），研究该多肽在BT474乳腺癌细胞中对Ras信号途径的影响及其抗肿瘤增殖活性。方法：用多肽合成仪合成PNRC的抗Ras PTD融合多肽PTD—PARP和其单独的PTD多肽。以PTD多肽为对照，将增加浓度的PTD—PARP与分离的、EGF刺激的BT474细胞裂解物共温育，采用免疫共沉淀结合Western blot检测Grb2免疫共沉淀复合物中SOS和PNRC的含量情况。用PTD—PARP-琼脂糖凝胶4B活化偶联磁珠免疫共沉淀BT474细胞裂解物，采用PI3K，Nck和Grb2的抗体检测沉淀复合物中这些含SH3结构域的蛋白与PTD-PARP的结合能力。Western blot检测PTD—PARP对EGF刺激的BT474细胞内Ras和MAPK活化的影响。采用软琼脂克隆形成实验考察PTD—PARP对BT474细胞体外增殖的影响。结果：PTD—PAR能以剂量依赖方式抑制SOS、PNRC与Grb2的结合，它与Grb2的结合具有特异性，PTD—PAR能降低BT474细胞中EGF刺激的Ras和MAKP活化，并能显著抑制BT474细胞的体外软琼脂克隆形成。结论：PNRC抗Ras PTD融合多肽可通过影响Ras信号途径抑制乳腺癌细胞的增殖。     

将科学史教育融人医学生的生物化学教学中

通过对科学史教育融入生物化学教学的探索，总结了采用的教学手段和达到的教学效果。有利于培养素质全面的军事医学科学人才。     

ERR1与核受体辅活化子相互作用位点研究

目的分析ERR1与核受体辅活化子相互作用的位点.方法用常规PCR方法和重叠延伸PCR构建ERR1的各种突变体到表达质粒pGBT9上,通过酵母双杂交实验分析其与已知核受体辅活化子PNRC的相互作用.结果成功构建了ERR1的缺失突变体pGBT9/ERR1 1-412、pGBT9/ERR1 1-144、pGBT9/ERR1 190-412 、pGBT9/ERR1 145-423、 pGBT9/ERR1 190-423、 pGBT9/ERR1 190-423 F232A、 pGBT9/ERR1 190-423 K244A.酵母双杂交实验显示ERR1的氨基酸145-423和190-423 可分别与PNRC相互作用;ERR1 190-423 K244A与PNRC的相互作用明显低于ERR1 190-423;其它突变体与PNRC的相互作用未检测到.结论 ERR1与核受体辅活化子相互作用的位点位于ERR1的配体结合结构域(LBD,aa190-423),ERR1与核受体辅活化子相互作用依赖于其LBD的AF2结构域,AF2结构域外的其它氨基酸F232、K244也对ERR1与核受体辅活化子相互作用起关键作用.     

Grb2在MCF-7 乳腺癌细胞中的核定位研究

目的　构建Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,并观察Grb2在MCF 7乳腺癌细胞的核定位情况。方法　用PCR方法扩增Grb2cDNA ,与红色荧光蛋白表达质粒pDsRed1 C重组构建融合蛋白表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,酶切、测序鉴定后 ,瞬时转染MCF 7乳腺癌细胞株 ,用荧光显微镜观察Grb2的核定位情况。结果　pDsRed1 C/Grb2质粒有正确的阅读框 ,融合表达蛋白DsRed1 C/Grb2可定位于MCF 7乳腺癌细胞核内。结论　成功构建了Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,在MCF 7乳腺癌细胞株中 ,Grb2除存在于胞浆外 ,也可定位于细胞核内 ,可能与其参与核内基因的转录调控有关。     

PNRC多肽通过干扰核受体途径抑制BT474细胞的增殖

目的：运用核受体辅活化子PNRC的抗Ras PTD融合多肽（PTD-PARP）研究其在乳腺癌细胞BT474中的分布、对核受体信号传导途径的影响及其抗肿瘤细胞增殖活性.方法：用多肽合成仪合成PTD-PARP、单独的PARP和PTD多肽以及FTFC标记的PTD-PARP、PARP.HPLC分析和纯化后,荧光显微镜结合流式细胞仪检测PTD-PARP、PARP在BT474细胞中的分布.虫荧光素酶报告基因检测PTD-PARP对野生型PNRC辅活化ER反式激活功能的影响.MTS、软琼脂克隆形成实验检测PTD-PARP对BT474细胞的抗增殖活性.结果：PTD-PARP能进入BT474细胞,抑制野生型PNRC辅活化ER的反式激活功能并抑制BT474细胞的增殖.结论：PNRC抗RasP DT融合多肽可通过干扰核受体途径抑制乳腺癌细胞的增殖.     

γ-射线全身照射对大鼠肝、脾细胞核转录活性的影响

本实验观察了800radγ-线全身照射后24小时内大鼠肝、脾细胞核转录活性的变化,结果表明:照射后24小时内脾细胞核转录活性明显受抑制,而肝细胞核转录活性是双相变化:照后4小时内转录活性增高,照射后18小时和24小时转录活性受抑制。肝、脾细胞核中RNA聚合酶Ⅱ与RNA聚合酶Ⅰ+Ⅲ受射线的影响程度接近。