人BMPR2基因5′侧翼序列生物信息学分析及克隆

目的 分析人BMPR2基因5′侧翼序列的特征,预测其潜在的启动子区段,克隆5′侧翼大片断.方法 提取人BMPR2基因的5′侧翼序列,用CpG岛预测软件、重复序列分析软件、启动子预测软件对其进行生物信息学分析,用分段克隆再拼接的方法 克隆其5′侧翼近5.5K的大片断.结果 人BMPR2基因属于典型的CpG岛相关基因;有4个可能参与转录调控的Alu序列;有多个潜在的启动子区段.成功构建了重组质粒pGL3-Basic-5.5K,其插入片断包含人BMPR2基因5′侧翼近5.5 K的序列. 结论 人BMPR2基因5′侧翼大片段的成功克隆及生物信息学预测将为通过实验手段研究该基因的表达调控奠定坚实的基础.     

内皮素—1基因内含子4Taq I片段多态性的研究

根据EDN1第4内含子设计相应引物,建立检测EDN1第4内含子TaqI多态性PCR＋RFLP技术。利用该技术,扩增到具有特异性的PCR产物,长为358bp。经限制性核酸内切酶TaqI酶酶切检测中国汉族人群该片段多态性状况。实验显示中国汉人群中存在该位点的多态性。基因T1的频率为0．664;T2基因型频率为0．336;T1T1基因型频率为0．418;T1T2基因型频率为0．492;T2T2基因型频率为0．090。该位点可作为遗传标记探讨中国人群中与EDN1相关遗传病的关系。     

BMPR-Ⅱ基因及其研究进展

骨形成蛋白受体-Ⅱ（bone　morphogenetic protein　re-ceptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ）基因编码一个跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体,在骨形成蛋白（BMP）信号传递中起重要作用。近年来,在BMPH—Ⅱ作用机制,及其与遗传病、骨的形成与再生、哺乳动物的发育、肿瘤的转移恶化、早期神经系统的分化等关系的研究中,取得了一些重要的进展,本文就BMPR-Ⅱ基因与肺动脉高压及在肿瘤细胞中的表达方面进行了综述。     

小鼠巨细胞病毒开放阅读框M43突变株体内效应研究

小鼠巨细胞病毒RvM4 3突变株的M4 3开放阅读框中插入Tn -gpt序列。突变株和野生型RqM4 3分别通过唾液腺注射感染免疫缺陷型小鼠CM17SCID ,在感染后不同的时间内分别取出小鼠的唾液腺 ,脾 ,肝 ,肺和肾脏 ,测定M4 3突变株的滴度。实验显示RvM4 3在唾液腺 ,脾 ,和肝中的滴度与野生型无显著性差异 ,但在感染 2 1天后 ,肾脏和肺中的病毒滴度有显著性差异。突变型和野生型感染后影响的死亡时间也存在着显著性差异。结果证实M4 3突变不影响体外细胞的复制 ,但对体内不同器官病毒的生长有不同的影响 ,同时有较弱的降低毒性的作用。研究为探索巨细胞病毒的致病机制提供了新的资料。     

叶酸缺乏孕鼠子代脑组织超微结构的变化

目的:观察叶酸缺乏孕鼠子代胎鼠脑组织超微结构的改变,为叶酸缺乏造成脑发育障碍提供细胞水平的依据。方法:雌性SD大鼠实验组30只、对照组20只,分别饲以不合叶酸和含叶酸2 mg/kg的纯合饲料,2 w后与雄鼠交配,于怀孕第20 d将孕鼠剖腹取胎。用透射电镜观察胎鼠额区皮层超微结构的改变。结果:实验组胎鼠额区皮层神经元出现核切迹、局灶性核周腔扩张、异染色质减少、胞质内细胞器肿胀、核糖体减少;某些胶质细胞亦见类似改变;神经毡膜性结构不完整。结论:母体叶酸缺乏能造成其子代胎鼠皮层脑组织超微结构的变化,可能导致神经元功能的紊乱和丧失,以致防碍脑结构和功能的正常发育。     

叶酸缺乏孕鼠子代血细胞形态学改变及脑额区皮层超微结构表现

探讨叶酸缺乏对胎鼠宫内脑发育的影响、研究叶酸缺乏孕鼠子代胎鼠脑组织超微结构的改变及为叶酸缺乏造成脑发育障碍提供细胞水平的依据，及采用雌性SD大鼠实验组30只、对照组20只，分别饲以不含叶酸和含2mg叶酸/kg的纯合饲料，两周后与雄鼠交配，于怀孕第20天对孕鼠剖腹取胎，对模型进行评价并观察叶酸缺乏对胎鼠发育的影响，应用途射电镜观察胎鼠额区皮层超微结构的改变。结果显示：1．实验组孕鼠交配前及妊娠晚期末血清叶酸均明显低于对照组，外周血出现多分叶核粒细胞。实验组胎鼠血清叶酸也明显低于对照组，出现巨幼红细胞，RBC和HB均低于对照组，且伴有宫内生长限制。2．实验组胎鼠额区皮层超微结构观察示：神经元出现核切迹、局灶性核周腔扩张、异染色质减少、胞质内细胞器肿胀、核糖体减少；某些胶质细胞亦见类似改变；神经毡膜性结构不完整。结论：1．交配前两周开始限食叶酸直至妊娠期结束，所建立的叶酸缺乏孕鼠动物模型处于叶酸缺乏第三阶段，其胎鼠宫内生长限制，红细胞出现巨幼变，但没有产生神经管闭合的异常。这是较理想的妊娠中晚期叶酸缺乏的孕鼠动物模型。2．母体叶酸缺乏能造成胎鼠皮层脑组织超微结构的改变，可能导致神经无功能的紊乱和丧失，以致防碍脑结构和脑功能的正常发育。3．受孕前后增补叶酸宜延长至妊娠结束，以减少不良妊娠结局的危险。     

人β地中海贫血突变基因重组载体pcDNA3.1-LCR-β41/42的构建

目的构建人β地中海贫血突变基因β^41/42及具有调控功能的基因座控制区(LCR)重组载体,为该病基因治疗的体外细胞模型和转基因小鼠模型的建立奠定基础。方法抽提β^41/42纯合子患者的DNA,PCR扩增人β珠蛋白基因座控制区(LCR)和β^41/42基因,将其串联克隆至pcDNA3．1-中,酶切及测序鉴定重组载体。结果所构建的重组载体中含人口珠蛋白基因座控制区(LCR)和β^41/42基因,测序结果及引入方向正确。结论成功构建了含5．5kgβ珠蛋白基因座控制区(LCR)的β^41/42人重型地中海贫血基因的重组载体。     

微小隐孢子虫腺苷酸激酶基因克隆及分析

目的获得微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,Cp)南京(NJ)株的腺苷酸激酶(adenylate kinase,AK)基因的核苷酸和氨基酸序列,比对分析与其他隐孢子虫株AK基因序列的差异。方法采用昆明种小鼠建立微小隐孢子虫NJ株感染模型,根据GenBank微小隐孢子虫Iowa II株AK基因已知序列设计合成2对引物,应用巢式PCR方法从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增AK基因,并将其克隆入pMD18-T载体;对重组质粒pMD18-T-CpAK经PCR及酶切鉴定后测序,应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株AK基因与其他虫株的核苷酸和氨基酸序列差异。结果巢式PCR扩增获得特异的AK基因序列,酶切及PCR鉴定为正确的pMD18-T-CpAK重组质粒,扩增序列为903bp,含隐孢子虫AK全长基因663 bp;核苷酸序列测定及同源性分析表明,微小隐孢子虫NJ株AK基因与人隐孢子虫TU502 type 2株AK的同源性为99%,与微小隐孢子虫Iowa II株AK序列同源性为98%;进化树分析表明,微小隐孢子虫NJ株的AK基因与人隐孢子虫TU502 type 2株AK基因亲缘关系最近。结论成...     

RNase P体外靶定切割人巨细胞病毒UL54 mRNA片段研究

目的：观察大肠埃希菌RNase P催化亚基M1 RNA在细胞外水平上对人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）DNA聚合酶UL54 mRNA的切割效果,探讨核酶作为新型抗病毒制剂的应用前景。方法：针对HCMVUL54 mRNA设计特异性的外部引导序列（external guide sequences,EGSs）EGS-T6,观察其引导M1 RNA特异的细胞外切割活性。结果：在EGS-T6引导下,大肠埃希菌RNase P催化亚基M1 RNA在细胞外可特异地对靶mRNA进行有效切割。结论：EGS-T6具备引导M1 RNA对UL54 mRNA特异切割的能力,可发展成一种新型抗病毒制剂。     

叶酸缺乏孕鼠子代脑组织DNA甲基化水平的变化

目的：探讨叶酸缺乏对胎鼠宫内脑发育的影响，研究叶酸缺乏孕鼠子代脑组织基因组DNA甲基化水平的改变，为叶酸缺乏造成脑发育障碍提供分子和细胞水平的依据。方法：雄性SD大鼠实验组30只、对照组20只，分别饲以不含叶酸和含2mg叶酸/kg的纯合饲料，两周后与雄鼠交配，于怀孕第20天对孕鼠剖腹取胎。对模型进行评价并观察叶酸缺乏对胎鼠发育的影响，高效液相色谱法检测胎鼠脑组织基因组DNA甲基化水平。对孕鼠妊娠晚期末血清叶酸、胎鼠血清叶酸及胎鼠脑组织DNA甲基化水平作相关分析。结果：1．实验组孕鼠交配前及妊娠晚期末血清叶酸均明显低于对照组，外周血出现多分叶核粗细胞。实验组胎鼠血清叶酸也明显低于对照组，出现巨幼红细胞，RBC和Hb均低于对照组，且伴有宫内生长限制。2．实验组胎鼠脑组织基因组DNA甲基化水平低于对照组，这种改变与孕鼠及胎鼠本身的血清叶酸浓度呈正相关。结论：1．交配前两周开始限食叶酸直至妊娠期结束，所建立的叶酸缺乏孕鼠动物模型处于叶酸缺乏第三阶段，其胎鼠宫内生长受限制，红细胞出现巨幼变，但没有产生神经管闭合的异常。这是较理想的妊娠中晚期叶酸缺乏的大鼠动物模型。2．母体叶酸缺乏时胎鼠的脑组织基因组DNA甲基化水平降低，这种改变与孕鼠及胎鼠本身的血清叶酸浓度呈正相关，可能是母体叶酸缺乏时胎鼠脑发育障碍的机制之一。3．受孕前后增补叶酸宜延长至妊娠结束，以减少不良妊娠结局的危险。