RNase P对人巨细胞病毒mRNA的体外靶定切割研究

目的探讨棱酶P对HCMV UL97 mRNA的体外切割能力.方法以人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)磷酸转移酶mRNA序列为靶设计extemal guide sequences(EGS),共价结合到大肠杆菌来源M1 RNA中,构建成M1GS-T5核酶.对其进行UL97基因亚克隆片段转录产物的体外切割实验.结果该核酶在一定离子浓度下具对UL 97mRNA片段产生特异切割能力.结论新构建得到的核酶MIGS-T5具特异性切割活性,可发展为一种抗病毒试剂.     

DNA芯片及其在医学上的应用

ＤＮＡ芯片又称ＤＮＡ微阵列 (ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ)、基因芯片 ,是近几年发展起来的一项前沿生物技术———生物芯片中的一种。可广泛应用在测定未知基因序列、定位与疾病有关基因、阐明基因疾病分子机制、发展基因诊断和基因治疗、药物筛选等领域。ＤＮＡ芯片技术虽然尚在起步阶段 ,但已展示出它的广阔应用前景 ,在制作技术和技术应用上进展迅速 ,本文简要综述ＤＮＡ芯片基本原理和在医学应用上的进展。1　ＤＮＡ芯片制作基本原理ＤＮＡ芯片技术是在Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ的基础上发展起来的 ,它利用核酸杂交原理检测未知分子 ,将核酸…     

应用巢式PCR方法诊断微小隐孢子虫感染的实验研究

目的应用巢式PCR扩增方法诊断微小隐孢子虫感染。方法用昆明种小鼠通过免疫抑制方法建立动物模型，通过不连续蔗糖密度梯度离心法分离、纯化隐孢子虫卵囊。抽提DNA后，用巢式PCR扩增隐孢子虫的18S核糖体DNA，电泳、割胶回收后测序。结果成功建立隐孢子虫的小鼠免疫抑制动物模型，纯化后的隐孢子虫卵囊形状均一，呈圆形或椭圆形，大小在3-6um左右。经巢式PCR扩增，在840bp左右有一条特异性条带。通过测序和生物信息学分析，证实该基因序列与微小隐孢子虫18S具有高度同源性。结论巢式PCR方法扩增18S基因是诊断微小隐孢子虫感染的敏感方法。     

MlRNA及其在基因治疗上的研究进展

MlRNA是E.coli体内一种具有催化活性的RNA分子,能特异性的切割靶RNA分子,可用来抑制基因的表达.由MlRNA发展而来的MlGS是一种潜在的基因治疗药物,在病毒性疾病和肿瘤治疗上有着广阔的应用前景.     

光固定化藻蓝蛋白对内皮细胞生长的影响

从钝顶螺旋藻中提取、纯化藻蓝蛋白，并采用光固定法固定藻蓝蛋白到组织培养聚苯乙烯膜上，合成表面活性修饰材料；研究材料对内皮细胞生长的影响。     

稳定表达人巨细胞病毒pUL49蛋白人胚肺成纤维细胞系的建立

目的 用逆转录病毒载体介导的基因转移方法,建立稳定表达人巨细胞病毒(HCMV)UL49基因的HELF细胞系.方法 首先应用KT-PCR从感染HCMV的HELF细胞RNA中扩增UIA9基因,克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-N1上,以此构建重组逆转录病毒栽体pLEGFP-N1-FLAG-uL49,并转染AmphoPackTM-293细胞,收集逆转录病毒,感染HELF细胞,经G418抗性筛选出阳性细胞.结果 经IFA、KT-PCK及Wcstem blot检测到UIA9基因在稳定细胞系中表达.结论 HELF-PLEGFP-N1-FLAG-UL49稳定细胞系构建成功.此细胞系为进一步研究HCMV pUL49蛋白的功能提供了一个有力工具.     

利用PCR-ASO技术分析MR基因多态性及与妊高征相关性研究

目的 探讨中国人群中盐皮质激素受体基因(MR)外显子3上C944T多态性与妊高征的相关性。方法 通过聚合酶链式反应—等位特异性寡核苷酸杂交(PCR—ASO)方法测定MR外显子3上C944T多态性频率并通过统计学方法探讨这些多态性与妊高征的相关性。结果 MR外显子3上C944T多态性位点中C等位基因和T等位基因在正常孕妇组中分别为58．00％与42．00％，在妊高征组中分别为53.45％与46．55％，在随机人群组中分别为55．15％与44.85％。结论 中国人群中MR基因外显子3上存在C944T多态性，该多态性与妊高征不存在相关性。     

自制人骨形态发生蛋白2复合骨修复材料诱导骨再生***

摘要 背景：骨形态发生蛋白是目前发现的一类惟一可独立诱导骨再生的细胞因子,临床应用前景广阔。但它们价格昂贵,限制了在中国的应用。 目的：探讨自主生产的重组人骨形态发生蛋白2的骨诱导活性及对骨缺损的修复作用。 方法：通过电泳及质谱的方法检测其复性后重组人骨形态发生蛋白2的纯度,通过C2C12细胞在重组人骨形态发生蛋白2诱导下向成骨细胞分化检测其骨诱导活性。将重组人骨形态发生蛋白2与以动物骨为原料加工制成的新型骨修复材料复合,植入新西兰兔桡骨缺损实验模型观察其对骨缺损的修复作用。 结果与结论：自主生产的重组人骨形态发生蛋白2纯度≥95%,能明显诱导C2C12细胞向成骨细胞分化,分化早期大量表达碱性磷酸酶,分化末期形成大量的矿化小节,诱骨活性良好。在兔桡骨修复试验中,X射线影像学及苏木精-伊红染色组织学检查结果表明,重组人骨形态发生蛋白2复合材料组在2个月时形成大量骨痂,4~6个月时载体与自体骨融合,材料大量降解,修复效果良好;单纯骨填充材料组4~6个月时只有少量新生骨桥与自体骨连接,降解量极少;空白对照组损伤部位为纤维化组织所填充。结果提示自主生产的重组人骨形态发生蛋白2促进骨修复作用明显,适合应用于临床。 关键词：自主生产;人骨形态发生蛋白;生物型骨填充材料;桡骨缺损;骨修复 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.21.002     

白细胞介素4受体α链基因多态性与支气管哮喘的相关性研究

目的 检测白细胞介素4受体α链（IL-4Rα）基因Ile50Val位点的多态性在汉族人群中的分布频率，探讨Ile50Val位点多态性与支气管哮喘（简称哮喘）的相关性。方法 对2002至2004年间暨南大学附属第一医院呼吸科门诊及住院患者和体检者，利用扩增阻滞突变系统-聚合酶链反应（ARMS-PCR）对103例哮喘患者（哮喘组）的IL-4Rα链基因的Ile50Val位点多态性进行检测，并与62名健康人（对照组）进行对照。结果 Ile50Val位点在汉族人群中存在3种（Ile50／Ile50、Ile50／Val50、Val50／Val50）基因型，103例哮喘组的分布频率分别为32．0％（33／103）、35．0％（36／103）、33．0％（34／103）；62名对照组的分布频率分别为29．0％（18／62）、37．1％（23／62）、33．9％（21／62）；各基因型分布频率哮喘组与对照组比较差异无统计学意义（χ^2=0．172，P〉0．05）。哮喘组与对照组的Ile50、Val50等位基因频率分别为49．5％、47．6％、50．5％和52．4％；哮喘组与对照组Ile50及Val50等位基因频率比较差异无统计学意义（χ^2=0．116，P〉0．05）。结论 IL-4Rα链基因Ile50Val位点在汉族人群中存在多态性（Ile50／Ile50、Ile50／Val50、Val50／Val50）；Ile50Val位点的多态性与哮喘不存在相关性。