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目的研究转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞人促甲状腺激素(hTSH)受体(hTSHR)的功能。方法抽提已转染hTSHR的CHO细胞基因组DNA,PCR扩增目的条带,并对产物进行序列测定。采用受体的放射配体结合分析法,以固定量125I的牛促甲状腺激素(125I-bTSH)和浓度递增的未标记bTSH与hTSHR发生竞争结合反应分析受体的基本功能;通过TSH刺激试验测定细胞环磷酸腺苷(cAMP)含量,评价hTSHR的生物学活性。结果PCR扩增片段长度与预期相符,且序列完全正确。竞争结合反应表明,随着bTSH浓度的递增,125I-bTSH与hTSHR的结合量逐渐下降;TSH刺激试验显示,随着bTSH浓度的递增,细胞cAMP含量亦逐渐升高,当bTSH浓度为10 mIU/mL时,cAMP水平达到峰值。结论cDNA序列整合在CHO细胞基因组内并在细胞膜上表达的hTSHR,具有受体的基本功能特性和良好的生物学活性。该实验为自身免疫性甲状腺疾病患者血清甲状腺刺激性抗体(TSAb)和阻断性抗体(TSBAb)的检测奠定了基础。 相似文献
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周亚芹 《临床超声医学杂志》2011,13(11):760-760
患者男,63岁,发现左前臂肿块10年余,明显增大1个月余就诊。患者自述曾有左前臂重物撞击史,但未予治疗。体格检查:左前臂可见鹅蛋大小包块,质软,活动性较好,轻压痛。超声检查所见:左前臂包块处皮下软组织内见大小约35 mm×25 mm×19 mm混合回声区,边界欠清,内部回声不均匀,以中低回声为主,中央见蜂窝状无回声区,另见少许斑片状强回声,后方伴声影(图1、2);彩色多普勒血流成像于包块内可探及较丰富的血流信号(图3);提示:左前臂软组织内囊实性包块。 相似文献
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环状定点诱变技术在单碱基定点诱变中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的采用环状定点诱变技术将重组真核表达质粒pcDNA3.1-hTSHR中hTSHRcDNA序列上发生突变的单碱基诱变回正常的序列。方法设计1对含预期突变的完全互补的诱变引物,以环状质粒为模板进行PCR扩增,得到带缺口的突变质粒,酶消化去除模板质粒,将PCR产物转化DH5α感受态细胞进行缺口修复和克隆。结果DNA测序表明,在预期位点已成功发生诱变,且目的基因其他部位的碱基序列均未发生随机突变。结论环状定点诱变技术是一种高效、简便、快捷的诱变方法,通过该方法成功实现了目的碱基的定点诱变,为后续研究奠定了基础。 相似文献