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61.
目的 构建HLA-B54/IgG1真核表达载体,稳定转染至721.221细胞中,获得HLA-B54/IgG1Fc二聚体融合蛋白.方法 通过RT-RCR我们获得了HLA-B54的胞外段与人IgG1的CH1-CH2-CH3的cDNA,将HLA-B54与IgG1重链的恒定区插入到质粒pcDNA3.1(+)中形成pcDNA3.1(+)-HLA-B54/IgG1Fc重组基因.为了获得稳定转染,用电穿孔法将质粒pcDNA3.1(+)-HLA-B54/IgG1Fc转染到721.221细胞中,大量收集通过G418筛选的721.221阳性克隆株的无血清的上清,通过PEG20000浓缩得到可溶性HLA-B54/IgG1Fc二聚体融合蛋白,双抗体夹心ELISA和Western-blot(利用MHCⅠ类特异性抗体、人IgG的Fc段特异性抗体)来鉴定融合蛋白.结果 限制性内切酶酶切鉴定及序列测定等证实了成功构建了pcDNA3.1+[HLA-B54/IgG1Fc]重组质粒.ELISA和Western-blot结果表明:HLA-B54/IgG1Fc融合基因能够在721.221细胞中表达.融合蛋白由预期的HLA-B54的胞外段与IgG1的Fc段两个部分组成.结论 二聚体融合蛋白HLA-B54/IgG1的构建有助于理解HLA-B54限制性的T细胞反应. 相似文献
62.
采用PCR-SSP方法检测强直性脊柱炎患者HLA-B27亚型 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 建立序列特异性引物-聚合酶链方法(PCR-SSP)检测湖北地区人白细胞抗原B27(Human leueocyte antigen-B27,HLA-B27)阳性强直性脊柱炎患者的HLA-B27亚型组成。方法 盐析法提取100例HLA-B27阳性的强直性脊柱炎患者外周血基因组DNA,采用PCR-SSP技术分别进行HLA-B位点基因型检测和HLA-B27基因亚型分析。结果 100例标本PCR-SSF,扩增均获成功,历时3h。共检出4种亚型:HLA-B*2704、HLA-B*2711、HLA-B*2715、HLA-B*2’722。其中HLA-B*2704纯合子25例、HLA-B*2704杂合子63例;HLA-B*2711杂合子5例;HLA-B*2715杂合子6例;HLA-B*2722杂合子l例。四种亚型所占构成比分别为90.4%、4%、4.8%和0.8%。结论 PCR-SSP方法进行HLA-B27亚型分析,快速、经济、简单;HLA-B*2704是湖北地区强直性脊柱炎患者HLA-B27基因主要亚型。 相似文献
63.
64.
用琼脂糖-淀粉混合凝胶电泳技术及碘染色法对70份寻常型银屑病、74份全身性红斑狼疮、31份胰岛素依赖性糖尿病患者红细胞标本的乙二醛酶1(GLO)遗传多态性进行了检测,结果表明,上述3种疾病忠者GLO~1的频率分别为0.1214、0.0811、0.0484,与我们所测203例正常人红细胞GLO基因频率(GLO~1为0.1429)比较,差异均无显著意义。 相似文献
65.
66.
用表面等离子体谐振(SPR)技术测试抗原抗体结合反应 总被引:5,自引:0,他引:5
利用自行初步设计的SPR传感仪,对抗原抗体结合反应进行测试,分析研究结合反应中两者的适宜比例。实验表明,所得曲线与理论基本相符。 相似文献
67.
目的用种类数目不同的肽段加载T2(表达空载HLA-A2分子)细胞与HLA-A2阴性个体的PBL混合培养,探讨同种反应性CIL前体的频率与同种抗原表位种类多少的关系。方法通过人工合成HLA-A2限制性单一病毒抗原肽、10种细胞正常成分的肽段以及冻融酸处理法制备细胞混合肽。加载T2细胞,经丝裂霉素灭活后作为刺激细胞,与PKH67预染HLA-A2阴性个体PBL进行混合淋巴细胞培养,PKH67荧光强度随细胞增殖而递减,通过流式细胞仪增殖软件(ModFit)分析同种T细胞前体频率。结果单独PBL增殖不明显;空载T2细胞刺激同种反应性CTL前体的频率为0.052819;加载单一表位肽的T2细胞刺激时,前体的频率为0.030429;10种HLA-A2自身限制性的混合抗原肽负载时,前体的频率为0.144942;混合多肽负载时,前体的频率为0.203649。结论本研究结果显示了同种T细胞前体的频率随着同种抗原表位种类的增多而增高,与同种抗原的密度不相关;支持了强烈的同种反应的主要原因是同种细胞表面表达极其繁多的T细胞识别表位(即pMHC)。 相似文献
68.
69.
为系统研究HLA-G1分子的生物学功能,采用RT-PCR技术,从人流的胎盘绒毛组织中提取总RNA,经过逆转录合成HLA-G1的全长cDNA,插入到真核表达载体pcDNA3中,构建重组表达质粒pcDNA3-HLA-G1;转化大肠杆菌DH5α,筛选其阳性克隆株,经酶切、PCR及测序鉴定,证实HLA-G1分子的重组真核表达载体已构建成功。 相似文献
70.
目的 制备生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物。方法 将原核高效表达的sHLA-A*2402-BSP融合蛋白及β2m和HLA-A*2402限制性抗原肽EB病毒BRLF1蛋白中的九肽NH2-TYPVLEEMF-COOH进行稀释、复性、折叠,形成HLA—A*2402-抗原肽复合物单体,并在BirA酶作用下进行生物素化,使生物素结合到HLA-A*2402-抗原肽复合物中H链C端的BSP序列上形成生物素化的sHLA—A*2402-抗原肽复合物单体。利用特异性单克隆克体(W6/32和兔抗人β2微球蛋白抗体)及链霉亲合素进行ELISA和Westem blot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果 折叠复合物中,主要含有HLA—A*2402-肽复合物单体及β2两种成分,其中HLA-A*2402-肽复合物单体可生物素化。结论 成功制备出生物素化的HLA—A*2402-抗原肽复合物单体,为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础。 相似文献