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61.
采用PCR-SSP方法检测强直性脊柱炎患者HLA-B27亚型 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 建立序列特异性引物-聚合酶链方法(PCR-SSP)检测湖北地区人白细胞抗原B27(Human leueocyte antigen-B27,HLA-B27)阳性强直性脊柱炎患者的HLA-B27亚型组成。方法 盐析法提取100例HLA-B27阳性的强直性脊柱炎患者外周血基因组DNA,采用PCR-SSP技术分别进行HLA-B位点基因型检测和HLA-B27基因亚型分析。结果 100例标本PCR-SSF,扩增均获成功,历时3h。共检出4种亚型:HLA-B*2704、HLA-B*2711、HLA-B*2715、HLA-B*2’722。其中HLA-B*2704纯合子25例、HLA-B*2704杂合子63例;HLA-B*2711杂合子5例;HLA-B*2715杂合子6例;HLA-B*2722杂合子l例。四种亚型所占构成比分别为90.4%、4%、4.8%和0.8%。结论 PCR-SSP方法进行HLA-B27亚型分析,快速、经济、简单;HLA-B*2704是湖北地区强直性脊柱炎患者HLA-B27基因主要亚型。 相似文献
62.
63.
目的 观察原核表达、制备小鼠可溶性Fas用于抑制活化诱导的脾细胞凋亡的效果.方法 通过RT-PCR从小鼠胸腺中扩增可溶性Fas基因,克隆至原核表达载体pET-28a( ),构建pET-sFas重组质粒,转化大肠杆菌BL21,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得高表达的可溶性Fas.经镍柱亲和层析纯化后用于抑制刀豆素A(ConA)刺激下的脾细胞活化诱导凋亡.结果 基因测序、Western-blot鉴定证实为可溶性Fas的原核表达蛋白,该蛋白能抑制小鼠脾细胞在ConA刺激下发生的凋亡[对照组凋亡率(70.3±4.9)%和实验组凋亡率(8.5±0.4.35)%有极显著差异(P<0.01)].结论 原核表达的可溶性Fas能够抑制小鼠脾细胞在ConA刺激下发生凋亡,为进一步抑制活化的T淋巴细胞凋亡及体外大量制备抗原特异性T细胞提供思路. 相似文献
64.
用琼脂糖-淀粉混合凝胶电泳技术及碘染色法对70份寻常型银屑病、74份全身性红斑狼疮、31份胰岛素依赖性糖尿病患者红细胞标本的乙二醛酶1(GLO)遗传多态性进行了检测,结果表明,上述3种疾病忠者GLO~1的频率分别为0.1214、0.0811、0.0484,与我们所测203例正常人红细胞GLO基因频率(GLO~1为0.1429)比较,差异均无显著意义。 相似文献
65.
66.
用表面等离子体谐振(SPR)技术测试抗原抗体结合反应 总被引:5,自引:0,他引:5
利用自行初步设计的SPR传感仪,对抗原抗体结合反应进行测试,分析研究结合反应中两者的适宜比例。实验表明,所得曲线与理论基本相符。 相似文献
67.
目的用种类数目不同的肽段加载T2(表达空载HLA-A2分子)细胞与HLA-A2阴性个体的PBL混合培养,探讨同种反应性CIL前体的频率与同种抗原表位种类多少的关系。方法通过人工合成HLA-A2限制性单一病毒抗原肽、10种细胞正常成分的肽段以及冻融酸处理法制备细胞混合肽。加载T2细胞,经丝裂霉素灭活后作为刺激细胞,与PKH67预染HLA-A2阴性个体PBL进行混合淋巴细胞培养,PKH67荧光强度随细胞增殖而递减,通过流式细胞仪增殖软件(ModFit)分析同种T细胞前体频率。结果单独PBL增殖不明显;空载T2细胞刺激同种反应性CTL前体的频率为0.052819;加载单一表位肽的T2细胞刺激时,前体的频率为0.030429;10种HLA-A2自身限制性的混合抗原肽负载时,前体的频率为0.144942;混合多肽负载时,前体的频率为0.203649。结论本研究结果显示了同种T细胞前体的频率随着同种抗原表位种类的增多而增高,与同种抗原的密度不相关;支持了强烈的同种反应的主要原因是同种细胞表面表达极其繁多的T细胞识别表位(即pMHC)。 相似文献
68.
69.
为系统研究HLA-G1分子的生物学功能,采用RT-PCR技术,从人流的胎盘绒毛组织中提取总RNA,经过逆转录合成HLA-G1的全长cDNA,插入到真核表达载体pcDNA3中,构建重组表达质粒pcDNA3-HLA-G1;转化大肠杆菌DH5α,筛选其阳性克隆株,经酶切、PCR及测序鉴定,证实HLA-G1分子的重组真核表达载体已构建成功。 相似文献
70.
为建立一种有效诱导及克隆人类白细胞抗原(HLA)-抗原肽复合物特异性细胞毒性T细胞(CTL)的方法,用EB病毒转化的B淋巴母样细胞系细胞作为刺激细胞,采用长期混合淋巴细胞培养法诱导自身外周血T细胞库中抗原肽-HLA复合物特异性CTL增殖、分化,并用有限稀释法对之进行克隆。通过细胞毒实验证实获得的CD3^ 、CD8^ T细胞克隆具有高度抗原特异性并受某些HLA型别的限制。 相似文献