采用PCR-SSP方法检测强直性脊柱炎患者HLA-B27亚型

目的 建立序列特异性引物-聚合酶链方法(PCR-SSP)检测湖北地区人白细胞抗原B27(Human leueocyte antigen-B27，HLA-B27)阳性强直性脊柱炎患者的HLA-B27亚型组成。方法 盐析法提取100例HLA-B27阳性的强直性脊柱炎患者外周血基因组DNA，采用PCR-SSP技术分别进行HLA-B位点基因型检测和HLA-B27基因亚型分析。结果 100例标本PCR-SSF，扩增均获成功，历时3h。共检出4种亚型：HLA-B*2704、HLA-B*2711、HLA-B*2715、HLA-B*2’722。其中HLA-B*2704纯合子25例、HLA-B*2704杂合子63例；HLA-B*2711杂合子5例；HLA-B*2715杂合子6例；HLA-B*2722杂合子l例。四种亚型所占构成比分别为90．4％、4％、4．8％和0．8％。结论 PCR-SSP方法进行HLA-B27亚型分析，快速、经济、简单；HLA-B*2704是湖北地区强直性脊柱炎患者HLA-B27基因主要亚型。     

器官系统课程体系改革中基础与临床桥梁课程的设置和实践

器官系统课程改革是目前临床医学专业课程改革的主要方向,基础与临床桥梁课程是器官系统课程改革中的一门关键课程。本文就该课程的内容、组织和实施、教学方法、教学效果评价、课程的作用和地位,以及课程改革存在的问题进行总结和分析。     

中国人C4Qo表型的C4DNA限制性片段长度多态现象：静息基因的机制初探

对１７例中国人Ｃ４Ａ／Ｃ４Ｂ表型中含有Ｑ０的个体的基因组ＤＮＡ进行了ＨｉｎｄⅢＲＦＬＰ的检测。从五型Ｃ４Ａ／Ｃ４Ｂ（３，０／１，１；３；０／２．１；３．３／１．０：３．２／１．０；３．０／１．０）中共检出５种ＲＦＬＰ片段组合Ａ：３２－２５－１５ｋｂ；Ｂ：３２－１５ｋｂ；Ｃ：２５－１５ｋｂ；Ｄ：３２－１５－８．５ｋｂ；Ｅ：２５－１５－８．５ｋｂ）。根据代表Ｃ４Ａ基因缺失的８．５ｋｂ片段的有无，测出大约５０％的Ｃ４ＡＱ０是由基因缺失造成的。此外，本文还对Ｃ４ＡＱ０时Ｃ４Ｂ长、短基因的分配，Ｃ４ＢＱ０时Ｃ４基因的变动情况等进行了分析与讨论。     

针刺结合运动平板改善免疫抑制大鼠的免疫功能

目的针刺结合运动平板改善免疫抑制大鼠的免疫功能。方法实验采用清洁级健康3月龄雄性Wstar大鼠100只,将其分为五组(空白组,模型组,治疗I组、治疗Ⅱ组、治疗Ⅲ组),空白组不作任何处理,其他各组均采用注射环磷酰胺溶液作为建模方法,制造免疫功能低下模型。模型组不作特殊处理,其中治疗组分别采用运动平板、针刺(分别为治疗Ⅰ组、治疗Ⅱ组)和综合二种手段(治疗Ⅲ组)进行治疗,针刺三里、关元、三阴交,运动平板采用运动平板进行。通过对一般状况的观察,模型体重的变化,脾脏指数的测定,体液免疫指标(血清IgA、IgG、IgM的含量)和细胞免疫指标(CD_3~+、CD_4~+T细胞的数量)的检测,研究针刺,康复锻炼以及综合针刺及康复锻炼对免疫抑制大鼠免疫功能的影响。结果治疗Ⅲ组对免疫抑制大鼠一般情况的改善优于模型组和其他治疗组;上述各治疗组的免疫抑制大鼠体重增加明显优于建模组;三种治疗方法都能改善免疫抑制大鼠的脾脏指数,但治疗Ⅲ组对免疫抑制大鼠脾脏效果的明显,作用效果优于治疗Ⅱ组和治疗Ⅰ组;治疗Ⅲ组的免疫抑制大鼠IgA,IgG,IgM均提高显著,且效果更尤于两种方法的单一应用;三种治疗方法均能提高免疫抑制大鼠CD_3~+、CD_4~+T细胞的数量,治疗Ⅲ组最为明显。结论针刺结合运动平板显著提高免疫抑制大鼠的免疫功能,效果明显优于应用单一治疗方法。实验积极探讨有利于利用针刺和运动平板来改善免疫功能低下机体的免疫功能,为其运用于临床治疗起到指导作用。     

实验教学精品课程建设

精品课程建设是全国高等学校教学质量与教学改革工程的重要组成部分,如何提高实验教学水平,不仅是课程体系建设和发展的需要,还是关乎素质教育成效的关键环节。在现有资源的基础上,开展实验精品课程建设,是提升实力、培养创新性人才和课程可持续发展的必然。     

可溶性HLA-B54/IgG1Fc二聚体融合蛋白的构建表达及功能鉴定

目的 构建HLA-B54/IgG1真核表达载体,稳定转染至721.221细胞中,获得HLA-B54/IgG1Fc二聚体融合蛋白.方法 通过RT-RCR我们获得了HLA-B54的胞外段与人IgG1的CH1-CH2-CH3的cDNA,将HLA-B54与IgG1重链的恒定区插入到质粒pcDNA3.1（＋）中形成pcDNA3.1（＋）-HLA-B54/IgG1Fc重组基因.为了获得稳定转染,用电穿孔法将质粒pcDNA3.1（＋）-HLA-B54/IgG1Fc转染到721.221细胞中,大量收集通过G418筛选的721.221阳性克隆株的无血清的上清,通过PEG20000浓缩得到可溶性HLA-B54/IgG1Fc二聚体融合蛋白,双抗体夹心ELISA和Western-blot（利用MHCⅠ类特异性抗体、人IgG的Fc段特异性抗体）来鉴定融合蛋白.结果 限制性内切酶酶切鉴定及序列测定等证实了成功构建了pcDNA3.1＋[HLA-B54/IgG1Fc]重组质粒.ELISA和Western-blot结果表明：HLA-B54/IgG1Fc融合基因能够在721.221细胞中表达.融合蛋白由预期的HLA-B54的胞外段与IgG1的Fc段两个部分组成.结论 二聚体融合蛋白HLA-B54/IgG1的构建有助于理解HLA-B54限制性的T细胞反应.     

体外诱导扩增大鼠树突状细胞及其特性鉴定

目的: 体外诱导和扩增大鼠骨髓树突状细胞 (DC)的方法, 并进行生物学特性鉴定。方法: 将大鼠骨髓细胞培养 48h后, 去除悬浮细胞, 加入IL- 4和GM- CSF培养 2wk。在光镜和透射电镜下观察培养的DC的形态学特征。应用流式细胞仪检测DC表面分子MHC-Ⅱ类分子、B7 -1、B7- 2的表达水平。将DC与同种异体T细胞混合培养, 采用MTT比色法测定不同细胞密度的DC刺激同种T细胞增殖的能力。结果: 培养的DC胞浆突起大而长, 呈树突状, 具有DC的典型形态。培养 2wk的DC表面MHC -Ⅱ类分子表达的阳性率为 74. 2%, B7- 1、B7 -2分别为 81%、76%。培养的DC具有明显刺激同种异体T细胞增殖的能力。结论: 将大鼠骨髓细胞经贴壁去除悬浮的细胞, 加入IL -4和GM -CSF培养, 可获得足量、较高纯度的DC, 为研究DC的功能奠定了基础。     

常温下酒精保存中耳移植材料的电镜观察及其临床应用

寻找简化中耳移植材料的保存方法。方法 采用常温下７０％－７５％酒精贮存彭膜，听骨等移植材料，对１３５耳鼓膜穿孔患者进行治疗，并进行组织学和电镜观察。结果 常温下酒精保存的脑膜，软骨，听骨可保存其基质数年不变，其中硬脑膜胶质纤维的结构保存良好。     

预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外折叠

目的: 提高可溶性HLA -A2 肽复合物体外折叠效率。方法: 在变性非还原条件下提取原核表达的HLA重链(HC)。通过离子交换及硫酸铵沉淀初步纯化后, 在β2微球蛋白(β2m)及特异性抗原肽 (Try369-377 )存在的情况下, 于pH6. 6的折叠缓冲体系中稀释复性。利用Westernblot及ELISA检测折叠产物。结果: 折叠复合物中主要含有HLA-A2 抗原肽复合物和β2m, 较少含有HC聚合体; 折叠效率较传统方法提高 2. 5倍。结论: 通过与传统方法作比较, 证实此法折叠效率比传统方法高, 为进一步HLA 肽四聚体及人工抗原提呈细胞的制备可提供足够可溶性的HLA -A2 肽单体。     

湖北地区汉族人群甘露糖结合凝集素基因多态性与冠心病易感性关系研究

目的探讨湖北地区汉族人群甘露糖结合凝集素(MBL)基因外显子1区多态性的特点及其与冠心病易感性的关系。方法应用多聚酶链反应异源双链杂交技术(PCRUHG)检测145例湖北地区汉族人(健康对照组79例,冠心病组66例)的MBL外显子1区基因型,分析两组间突变基因型频率的差异。结果①B等位基因是湖北地区汉族人群MBL基因外显子1区的主要变异体,其突变位点位于54位密码子(GGC→GAC),未检出C、D变异体。②健康对照组与冠心病组MBL突变等位基因(B等位基因)频率分别为12.0%和12.9%,两者差异无统计学意义。③急性冠状动脉综合征亚组与健康对照组突变型等位基因分别为15.9%和12.0%,差异无统计学意义。结论MBL基因突变可能不是湖北地区汉族人群冠心病发病的遗传学危险因素。