HGPRT缺陷型T淋巴瘤细胞系的建立与鉴定

目的通过突变诱导次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型的T淋巴瘤细胞系,为制备T细胞杂交瘤提供利于筛选的亲代细胞。方法通过乙基甲磺酸对Jurkat细胞进行突变,逐步提高培养液中6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的浓度,筛选出对6-TG具有稳定抗性的单克隆细胞株Jur16-TG细胞。比较Jurkat细胞与Jur16-TG细胞在含6-TG培养液和HAT培养液中的生长情况。结果在含20μg/ml 6-TG的培养液中,Jur16-TG细胞能够稳定生长,而Jurkat细胞在培养1周后基本死亡。在HAT培养液中氨基喋呤的浓度为4×10-8mol/L或8×10-8mol/L时,Jur16-TG细胞4 d内基本死亡,而Jurkat细胞至少能存活7~10 d。Jur16-TG细胞与正常外周血淋巴细胞(PBL)的融合实验显示,35%的Jur16-TG细胞与PBL融合。结论突变筛选出的单克隆细胞株Jur16-TG具有6-TG抗性和在HAT培养液中不能生长的特性,证实该细胞为HGPRT缺陷型细胞株,并且该细胞株可有效地与原代淋巴细胞融合,从而为T细胞杂交瘤的制备提供了利于筛选的亲代永生化的T细胞。     

家族性进行性色素过度沉着症一家系B淋巴细胞系建立及意义

目的为保证对一个汉族家族性进行性色素过度沉着症(FPH)家系致病基因研究的顺利实施,对该家系成员进行B淋巴细胞转化并建立永生化细胞系。方法采用EBV转化外周血B淋巴细胞并加用环孢霉素A。结果成功建立该家系成员永生化细胞系15个;B淋巴母细胞系(B-LCL)成功转化后其体积增大,形态多样,伸出伪足,增生的淋巴细胞多聚集成团。结论该家系成员B-LCL建系成功,为后续定位克隆FPH基因并进行皮肤色素代谢障碍的分子机制研究提供了长期的研究材料。     

猫抓病的临床诊断与病理（附3例报告）

目的 总结猫抓病（CSD）的流行病学与临床特点，以提高对该病的认识，减少误诊。方法 复习文献，结合我院近4年收治的3个病例的发病、临床特点、病理特征进行分析。结果 CSD患者均有猫接触史，局限性的淋巴结肿大，HE光镜下病理特点为淋巴结内微脓肿形成。结论 CSD是一种自限性疾病，根据病史、临床特点和淋巴结活检有助于诊断。     

武汉市美沙酮门诊治疗者丙型肝炎病毒基因分型

目的 探讨武汉市美沙酮门诊治疗者丙型肝炎病毒(HCV)及不同基因型感染状况.方法 用酶标记免疫(ELISA)法检测抗-HCV抗体,在86份抗-HCV抗体阳性的血清标本中,分别提取HCV RNA,通过逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)扩增C基因的羧基至E1基因的氨基端长度为474 bp的片段,测定其核苷酸序列,与GenBank中已知的HCV序列进行系谱分析,确定HCV基因型.结果 武汉市美沙酮门诊332名治疗者中抗-HCV IgG阳性率为94.3%;其中86份血清的HCV序列通过系谱显示6a型71例,占82.5%;3b 7例,占8.2%;1a 5例,占5.8%;1b 3例,占3.5%.结论 武汉市美沙酮门诊入组的吸毒者HCV感染以6a型为优势株,其次为3b,吸毒者中HCV感染率较高,且基因亚型呈现多样性.     

sHLA-A*0201-抗原肽四聚体的构建与功能检测

目的：构建有功能的sHLA-A＊0201-抗原肽四聚体，建立一套HLA Ⅰ类分子／抗原肽的四聚体制备技术。方法：利用基因工程及体外折叠技术构建sHLA-A＊0201-LMP2A426-434复合物分子，并在BirA酶的作用下生物素化。与荧光标记的亲和素衍生物以分子数4：1结合而形成HLA-A＊0201-LMP2A426-434四聚体。获得的四聚体对长期混合淋巴细胞培养中增殖的抗原特异性CTL进行检测，同时用细胞毒实验验证。结果：荧光标记的亲和素与生物素化的HLA-A＊0201-抗原肽复合物分子正确结合，制备的四聚体能够与长期混合淋巴细胞培养出的特异性T细胞结合。结论：从结构与功能上证实成功地获得有功能的HLA-A＊0201-抗原肽复合物四聚体。为进一步研究T细胞识别机制与功能奠定了基础，也为过程复杂的HLA-抗原肽四聚体制备提供了可行的免疫学监控方法。     

可溶性HLA-A2-肽复合物的体外折叠与生物素化

目的 :可溶性HLA A2 抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化。方法 :原核高效表达的HLAH链及 β2m,在抗原肽 (EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2 CLGGLLTMV COOH残基 )的存在下 ,通过稀释复性折叠成HLA A2 抗原肽复合物 ,并在BirA酶的作用下进行生物素化 ,使生物素结合到HLA A2 抗原肽复合物中的H链C端。利用特异性抗体 (mAbW6 / 32和兔抗人 β2m抗体 )及链霉亲合素进行ELISA和Westernblot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果 :折叠复合物中 ,主要含有HLAH链聚合体、HLA A2 肽复合物单体及 β2m3种成分 ,其中H链聚合体与HLA A2单体可生物素化。结论 :成功地获得生物素化的HLA A2 抗原肽复合物单体 ,为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础 ,也为过程复杂的HLA 抗原肽四聚体的制备提供了可行的免疫学监控方法     

人补体C4短基因分布频率在我国南北人群中存在的差异

采用限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）方法对北京（６０例）和湖北（５８例）地区随机人群的补体Ｃ４基因的长度进行检测。结果：湖北人群Ｃ４短基因的分布频率较北京人群高,其表型频率分别为 ７９． ３１％、６１．４４％,基因频率分别为５１．７２％、３７．５０％,差异均有显著意义（均为Ｐ＜０．０５）,而且Ｃ４短基因在上述二个人群中的分布均符合Ｈａｒｄｇ－Ｗｅｎｂｅｒｇ平衡。结果表明,湖北人群Ｃ４短基因的频率高于北京人群。这种由于逆转录病毒序列的插入所致的Ｃ４基因长度的变化为研究某些疾病的遗传易感性提供了线索。     

鼓室置管联合鼻内镜下腺样体切除术治疗分泌性中耳炎的疗效观察

目的探讨鼓室置管术加腺样体切除术治疗儿童分泌性中耳炎的疗效。方法将保守治疗无效的75例(96耳)分泌性中耳炎患儿随机分为两组:治疗组39例(51耳),行鼓室置管术加鼻内镜下腺样体切除术;对照组36例(45耳),单纯行鼓室置管术。结果治疗组患儿术后咽鼓管功能、鼓膜形态、中耳积液吸收。鼓室压图峰压值改善情况明显优于对照组(P<0.05)。结论鼓室置管术联合鼻内镜下腺样体吸切除术治疗儿童SOM有较好的疗效,并且避免了传统的腺样体刮除术的缺点。     

表达HLA—G1的K562细胞抵抗外周血NK细胞杀伤作用的研究

目的 研究HLA－G1分子对NK细胞杀伤活性的影响。方法 供助脂质体介导的DNA转染技术,将本室构建的真核南闰pcDNA3-HLA-G1转染人K562细胞;通过G418筛选,获得克隆化细胞株K562－G1;应用RT－PCR及流式细胞术分别在RNA水平和蛋白质水平检测HLA－G1的表达;最后,应用MTT比色法检测转染细胞对不同个体外周血NK细胞杀伤活性的抑制效应。结果 与转染了空质粒的对照组相比,外周血NK细胞对K562－G1的杀伤率降低32.43%（P＜0.01）。结论 靶细胞表达HLA－G2分子可明显抑制NK细胞的杀伤效应。     

湖北汉族人群对乙肝疫苗免疫应答能力与HLA-DRB1等位基因相关性的研究

目的分析HLA-DRB1等位基因型别与个体乙肝疫苗免疫应答水平的相关性。方法对37名湖北汉族健康自愿者进行HBV血源型疫苗标准全程接种,共3次(0,1,6月),末次接种后8周用酶免疫法(EIA)检测血清抗-HBs抗体水平(S/N≥2.1为应答者,S/N<2.1为无应答者);同时,对全部受试者进行HLA-DRB1基因分型。结果37名个体中无应答者7名(19%),应答者30名(81%),无应答与HLA-DRB*1001等位基因具有显著相关性,RR=21.75,X2=5.55,P<0.05。结论在湖北汉族人群中,携带HLA-DRB*1001等位基因个体对乙肝疫苗的免疫应答水平明显低于其他个体