异体输血缓解强直性脊柱炎的髋关节疼痛

背景：疼痛一直为强直性脊柱炎的主要临床表现,目前治疗多以口服非类固醇抗炎药为主,效果有限且毒副作用大,目前尚没有一种经济、有效治疗强直性脊柱炎疼痛症状的方案。目的：探讨强直性脊柱炎患者术后关节疼痛缓解与异体输血的相互关系及其机制。方法：回顾分析了88例因强直性脊柱炎驼背行单节段后凸截骨矫形合并髋关节疼痛患者的临床资料,对比术中新鲜异体全血输注、自体与异体全血混合输注、自体全血回输3组患者髋关节疼痛目测类比评分、白细胞计数、淋巴细胞计数及免疫球蛋白浓度的变化,并利用流式细胞技术分析外周血中与自身免疫性疾病密切相关的Th17及Treg细胞亚群的数量与比例变化。结果与结论：新鲜异体全血输注、自体与异体全血混合输注者术后髋关节疼痛症状明显改善,其白细胞数量、淋巴细胞数量及免疫球蛋白浓度无明显变化,但流式细胞技术检测显示强直性脊柱炎患者外周血中与自身免疫性疾病密切相关的Th17／Treg比例明显升高。结果可见异体全血输注可能通过纠正Th17／Treg平衡进而改善患者的免疫状态,减轻其关节疼痛。     

再生障碍性贫血儿童TCR Vβ亚家族T细胞克隆性增殖及其与HLA—DRB1＊15的关系

【目的】探讨再生障碍性贫血（再障）儿童TCR Vβ24个亚家族T细胞克隆性及其与HLA—DRB1＊15的关系。【方法】再障儿童17例（SAA14例，MAA3例），采用RT—PCR和基因扫描分析外周血或骨髓TCR Vβ24个亚家族基因的表达和克隆性，SSP—PCR检测HLA—DR。【结果】再障儿童外周血T细胞仅表达4—22个Vβ亚家族，而正常儿童外周血T细胞几乎表达所有Vβ亚家族。12例（包括初诊SAA4例，CR4例，复发1例和MAA3例）再障儿童存在不同程度T细胞克隆性增殖，但个体间差异较大，正常外周血和骨髓均为多克隆性T细胞。5例HLA—DRB1＊15（＋）患儿中4例（80％）有寡克隆T细胞，而12例HLA—DRB1＊15（-）患儿中仅3例（25％）见寡克隆T细胞，两组比较差异具有显著意义（P〈0．05）。伴寡克隆T细胞的6例S从儿童经免疫抑制治疗后达CR；不伴寡克隆T细胞的5例SAA儿童接受免疫抑制治疗，其中CRI例，PR2例、无效1例，死亡1例。【结论】大多数再障儿童存在T细胞克隆性增殖，寡克隆T细胞多见于SAA，尤其是HLA—DRB1＊15（＋）的SAA儿童。TCR VβT细胞克隆的检测对进一步了解再障免疫功能状态、预测免疫抑制治疗效果具有一定的参考价值。     

人嗅鞘细胞的免疫学特性研究

目的 探讨人嗅鞘细胞的免疫学特征。方法 应用流式细胞仪分析人嗅鞘细胞的相应标记抗原的阳性表达率，用单向混合淋巴细胞反应测定人嗅鞘细胞的组织相容性和免疫耐受性。并与骨髓间充质干细胞对比。结果 人嗅鞘细胞与骨髓间充质干细胞表面与移植免疫排斥发生密切相关的标志：HLA-DR、B7-1（CD80）、B7-2（CD86）、CD40和CD40L均为阴性。单向混合淋巴细胞反应显示人嗅鞘细胞、骨髓间充质干细胞均对混合淋巴细胞反应无明显的刺激作用。结论 人嗅鞘细胞可能是一种免疫缺陷细胞，在体外有诱导细胞移植免疫耐受性的作用。     

移植脊髓中嗅鞘细胞的生物学特性

背景嗅鞘细胞被证明有修复损伤脊髓的作用,但对其移植后的生物学特性了解不多.目的观察移植的嗅鞘细胞在损伤脊髓中的迁移方式.设计随机对照实验.材料2个月雄性SD大鼠38只,体质量(350±20)g.方法实验于2004-02/05在中山大学北校区动物实验中心进行.①取SD大鼠2只用于嗅鞘细胞提取,将嗅鞘细胞用双苯亚甲胺染色.②取SD大鼠36只,随机分为3组,近端组,远端组和对照组,每组12只.近端、远端组建立大鼠胸髓损伤模型.分别于脊髓损伤近端、远端注入嗅鞘细胞悬液;对照组不损伤胸髓,仅注射嗅鞘细胞悬液.主要观察指标术后1,2,4,6周荧光显微镜下观察脊髓中嗅鞘细胞的分布.结果36只大鼠,分为3组,术后近端组死亡1只;远端、对照组各死亡2只.进入结果分析29只.各组大鼠脊髓中嗅鞘细胞分布术后2,4,6周,近端组和远端组的嗅鞘细胞进一步沿着脊髓长轴纵向迁移,最远达8 mm,能够穿过瘢痕,到达断端对侧的细胞数量很少;对照组嗅鞘细胞只是局部的扩散,没有迁移.结论嗅鞘细胞的迁移主要沿着轴突进行,向头端和尾端迁移的数量和速度都没有明显区别,嗅鞘细胞只在损伤的脊髓中进行迁移.     

Influence of cryopreserved olfactory ensheathing cells transplantation on axonal regeneration in spinal cord ofadult rats

Objective: To observe the effects of cryopreserved olfactory ensheathing cells (OECs) transplantation on axonal regeneration and functional recovery following spinal cord injury in adult rats. Methods : Twenty-four rats were divided into experimental and control groups, each group having 12 rats. The spinal cord injury was established by transecting the spinal cord at T10 level with microsurgery scissors. OECs were purified from SD rat olfactory bulb and cultured in DMEM ( Dulbecco‘s minimum essential medium) and cryopreserved (-120~C) for two weeks. OECs suspension I (1-1.4) x 105/ul ] was transplanted into transected spinal cord, while the DMEM solution was injected instead in the control group. At 6 and 12 weeks after transplantation, the rats were evaluated with climbing test and MEP ( moter evoked potentials) monitoring. The samples of spinal cord were procured and studied with histological and immunohisto chemical stainings. Results: At 6 weeks after transplantation, all of the rats in both transplanted and control groups were paraplegic, and MEPs could not be recorded. Morphologyof transplanted OECs was normal, and OECs wereinterfused with host well. Axons could regrow into gap tissue between the spinal cords. Both OECs and regrown axons were immunoreactive for MBP. No regrown axons were found in the control group. At 12 weeks after transplantation, 2 rats (2/7) had lower extremities muscle contraction, 2 rats (2/7) had hip and/or knee active movement, and MEP of 5 rats (5/7) could be recorded in the calf in the transplantation group. None of the rats (7/7) in the control group had functional improvement, and none had MEPs recorded. In the transplanted group,histological and immunohistochemical methods showed the number of transplanted OECs reduced and some regrown axons had reached the end of transected spinal cord. However, no regrown axons could be seen except scar formation in the control group. Conclusions: Cryopreserved OECs could integrated with the host and promote regrowing axons across the transected spinal cord ends.     

地中海贫血患儿血清特异性群体反应性抗体对脐血造血干细胞增殖、分化能力的影响

背景：已有报道证实群体反应性抗体在实体器官移植受者排斥反应中起着重要作用，并且与植入物功能衰竭呈正相关。 目的：实验拟观察反复输血地中海贫血患儿血清中特异性群体反应性抗体对脐血造血干/祖细胞增殖、分化能力的影响。 设计、时间及地点：体外细胞学实验，于2006-01/2007-08在中山大学附属第二医院医学研究中心完成。 材料：5份健康足月产妇脐带血，每份80~ 100 mL。反复输血地中海贫血患儿的群体反应性抗体血清样本。5份健康儿童AB分型血清样本。6份阳性抗凝静脉血样本10 mL。 方法：采用聚蔗糖-泛影葡胺梯度离心法分离脐带血单个核细胞。将1×105脐血单个核细胞与分别与健康儿童AB血清50μL、0,50,100 μL 不同浓度群体反应性抗体血清混合后，再将上述细胞混合物与兔补体共同孵育进行半固体集落培养。 主要观察指标：倒置显微镜下观察并计数共培养第7，14天总集落数和各种集落数。 结果：脐血造血干/祖细胞受群体反应性抗体血清作用后，其半固体集落培养的总集落数以及各种集落数均有不同程度的下降，其中总集落数和粒单系集落形成单位的下降数，经统计学处理差异具有显著性意义（P < 0.01）；群体反应性抗体血清量与总集落、粒单系集落形成单位、粒红单核巨核系集落形成单位、红系爆式集落形成单位、巨核系爆式集落形成单位、巨核系集落形成单位之间的肯德尔相关分析呈负相关，经统计学处理差异有显著性意义（P < 0.05）。 结论：特异性群体反应性抗体对脐血造血干/祖细胞的增殖、分化能力具有抑制作用，并且抑制作用与群体反应性抗体剂量相关：群体反应性抗体剂量越大，抑制作用越强。     

食品包装材料样品预处理探索

食品包装材料包括直接接触食品的纸张、塑料、橡胶、搪瓷、陶瓷、玻璃、不锈钢、铝等制品。我国食品卫生法明确规定，对食品用包装材料、容器等都必须进行卫生检测。对食品包装材料检测，很少直接进行成分分析，一般是对各种食品包装材料中有害物质向食品中移行的可能性进...     

重组腺病毒载体Ad-LMP-1的构建及其转染 MSC后成骨活性

 【目的】 快速构建大鼠LIM矿化蛋白-1基因重组腺病毒载体,转染MSC,探讨LMP-1基因对MSC成骨分化和成骨活性的影响&#65377; 【方法】 从大鼠成骨细胞内提取总RNA,并设计LMP-1特异性引物进行RT-PCR,获取LMP-1基因后利用Invitrogen公司的TOPO定向克隆技术创建入门克隆pENTR/D-LMP-1&#65377;转化TOP10细菌后,挑取阳性克隆摇菌提取质粒,入门克隆再与表达载体pAD/CMV/V5-DEST进行同源重组反应得到病毒载体pAD/CMV/V5-LMP-1,转化细菌后挑选阳性克隆摇菌提取重组病毒质粒,用PacI内切酶线性化后用转染293A细胞后得到重组腺病毒载体&#65377;以腺病毒为载体,将大鼠LMP-1基因体外转染于3代大鼠MSC细胞内,检测LMP-1基因在MSC细胞的表达,分别观察转染后实验组与对照组I型胶原&#65380;碱性磷酸酶&#65380;骨钙素表达变化以及骨钙结节的形成情况,评价LMP-1基因的成骨能力&#65377;【结果】 成功获取大鼠LMP-1基因,入门质粒与病毒表达质粒经过酶切鉴定以及测序验证&#65377;LMP-1基因能在MSC中高效表达,转然后MSC的I型胶原,碱性磷酸酶&#65380;骨钙素的表达明显增强,骨钙结节形成增多&#65377; 【结论】 利用Gateway 技术构建LMP-1重组腺病毒载体相对简单,可快捷获得的pAd-LMP-1&#65377;pAd-LMP-1转染MSC后,LMP-1基因能促进MSC向成骨细胞分化,增强其成骨作用&#65377;     

健康及血液肿瘤儿童中FcγRⅢa基因多态性分布

由于FcγRⅢa的基因多态性可导致NK细胞上Fcγ受体（Fclreceptor,FcγR）与抗肿瘤单克隆抗体（monoclonal antibody,MAb）Fc段结合的亲和力不同,从而影响NK细胞以抗体依赖细胞介导的细胞毒性（antibodydependent cell—mediated cytotoxicity,ADCC）对肿瘤细胞的杀伤能力。本研究通过巢式PCR（nest—PCR）扩增43例健康儿童及20例血液肿瘤患儿的FcγRⅢa基因,NlaⅢ酶切PCR扩增产物,酶切后产物经15％PAGE电泳分离DNA片段,银染显色鉴定FcγRⅢa基因多态性;检测健康儿童及血液肿瘤患儿中FcγRⅢa的基因多态性的分布,了解血液肿瘤患儿对MAb可能的疗效反应。结果表明：两组均以FcγRⅢa 158V／F型最多,而FcγRⅢa-158V／V型次之,FcγRⅢa-158F／F型最少,FcγRⅢa的不同基因型及等位基因频率在健康儿童及血液肿瘤患儿中的分布比例基本一致,无明显差异,两组基因型及等位基因频率卡方检验的P值分别为0．809及0．875,均大于0．05。结论：FcγRⅢa-158基因多态性以FcγRⅢa-158V／F型为主,而FcγRⅢa-158V／V型次之;在健康儿童及血液肿瘤患儿中分布无明显差异。     

健骨二仙丸对成骨细胞分化及IGF-ImRNA表达的影响

目的:在临床研究和动物实验的基础上,进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响及其作用机制.方法:分离、培养人的原代成骨细胞,采用PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量RT-PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结节形成和I型前胶原mRNA的表达,从而了解健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响.定量RT-PCR和Northern印迹杂交等方法交观察成骨细胞胰岛素样生长因子(insulin-likegrowth factor-I)IGF-I mRNA的表达.结果:健骨二仙丸中、高剂量能显著增加碱性磷酸酶的活性,及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素的释放(P＜0.01,P＜0.05),与雌激素(倍美力)组比较差异无显著性.显著增加成骨细胞Ⅰ型前胶原mRNA和IGF-I mRNA的表达.结论:健骨二仙丸促进成骨细胞IGF-I mR-NA的表达,从而进一步促进成骨细胞的增殖、分化,改善成骨细胞功能,调节骨重建偶联.表明健骨二仙丸不仅能增加成骨细胞胶原蛋白地合成,而且能促进非胶原蛋白地表达.促进骨的形成是健骨二仙丸作用的主要机制.