ICU嗜麦芽窄食单胞菌致下呼吸道感染的危险因素及耐药性分析

目的了解ICU嗜麦芽窄食单胞菌（Xan）致下呼吸道感染的危险因素有其耐药特征,为临床治疗提供实验依据。方法常规的方法对2004年1月至2007年12月ICU患者的下呼吸道标本进行培养分离,VITEK.TWO全自动微生物鉴定仪进行鉴定,K-B法进行药敏试验,用WHONET5.0进行数据统计。结果Xan对12种抗菌素的敏感率分别为氨曲南13.6%、阿米卡星21.3%、哌拉西林/三唑巴坦31.8%、替卡西林/棒酸36.4%、头孢哌酮/舒巴坦40.9%、环丙沙星47.0（31）%、头孢匹肟51.5%、氯霉素57.6%、头孢他啶60.6%、左氧氟沙星74.2%、复方新诺明75.8%及米诺环素100.0%;在感染者中所有的患者均有基础疾病且曾使用过广谱抗菌素,90.9%（60/66）接受侵入性检查或治疗。结论Xan对多种抗菌素耐药,其感染与患者的基础疾病、是否接受广谱抗菌素治疗及侵入性检查等有关。     

大鼠BDNF基因复制缺陷型重组腺病毒的构建与鉴定

【目的】构建携带大鼠脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）目的基因的复制缺陷型重组腺病毒，并初步检测其体外表达目的基因的能力。【方法】提取大鼠脑组织总RNA，使用RT—PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18-T Simple载体测序，将测序完全正确的BDNF目的基因克隆入pShuttle2中，然后利用体外连接法将BDNF目的基因克隆入Adeno—X^TM腺病毒骨架中。Lipofectamine^TM 2000法转染HEK293细胞包装携带BDNF目的基因的重组腺病毒，少量提取重组腺病毒DNA检测证实为复制缺陷型BDNF基因重组腺病毒后大量扩增。蛋白电泳及Western blot法初步检测BDNF目的基因在HEK293细胞中的表达。【结果】成功构建了携带大鼠BDNF目的基因的复制缺陷型重组腺病毒。并证实其在HEK293细胞中可高水平表达BDNF目的基因。【结论】利用体外连接法可方便、快捷地构建携带BDNF目的基因的复制缺陷型重组腺病毒，并可在体外高水平表达表达其所携带的目的基因。     

健骨二仙丸含药血清对人成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的：在临床研究和动物实验的基础上，进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞增殖和细胞周期的影响。方法：分离、培养人的原代成骨细胞，采用^3H-胸腺嘧啶掺入法和四氮唑蓝法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期。结果：健骨二仙丸中、高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组（P＜0．01，P＜0．05），与此激素组比较差异无显著性。细胞凋亡率和G0－G1期细胞比率显著低于空白对照组（P＜0．01，P＜0．05）。结论：健骨二仙丸能有效促进成骨细胞的增殖、分化，防止成骨细胞的凋亡。     

广州市四家医院铜绿假单胞菌的血清学分型的调查

目的了解广州市四家医院铜绿假单胞菌（PA）各血清型分布情况。方法按常规方法对各院各种临床标本进行细菌的培养、分离，用VITEK2全自动微生物鉴定仪对750株PA进行鉴定，采用日本生研株氏会社分型血清用玻片凝集法对PA进行血清分型。结果750株PA分型率为93．7％（703／750）；以G、B、L、F型为主，其中G型197株占26．3％、B型90株占12．0％，L型78株占10．4％，F型77株占10．2％。结论广州市四家医院的PA血清型以G、B、L、F为主，未发现有A血清型。     

Influences of olfactory ensheathing cells transplantation on axonal regeneration in spinal cord of adult rats

Objective: To observe whether offactory ensheathing cells could be used to promote axonal regeneration in a slmntaneously nonregenerating system. Methods: After laminectomy at the lower thoracic level, the spinal cords of adult rats were exposed and completely transected at T10. A suspension of ensheathing cells was injected into the lesion site in 12 adult rats, and control D/F-12 (1:1 mixture of DMEM and Ham‘s F-12) was injected in 12 adult rats. Six weeks and ten weeks after cell transplantation, the rats were evaluated by climbing test and motor evoked potentials (MEPs) monitoring. The samples were procured and studied with histologiel and immounohistochemical methods. Results: At the 6th week after cell transplantation,d the rats in both the transplanted and control groups were paraplegic and the MEPs could not be recorded. At the 10th week after cell transplantation, of 7 rats in the control group, 2 rats had muscles‘ contraction of the lower extremities, 2 rats had hips and/or knees‘ active movement; and 5 rats‘ MEPs could be recorded in the hind limbs in the transplanted group ( n = 7). None of the rats in the control group had functional improvement and no MEPs recorded ( n = 7 ). Numerous regenerating axons were observed through the transplantation and continued to regenerate into the denervated host tract. Cell labelling using anti-Myelin Basic Protein (MBP) and anti-Nerve Growth Factor Receptor (anti-NGFR) indicated that the regenerated axons were derived from the appropriate neuronal source and that donor cells migrated into the denervated host tract. But axonal degeneration existed and regenerating axons were not observed within the spinalcords of the adult rats with only D/F-12 injection. Conclusions: The axonal regeneration in the transected adult rat spinal cord is possible after eusheathing cells transplantation.     

人AGM区基质细胞对脐血LTC-IC的支持作用

为探讨人主动脉-性腺-中肾(AGM)区基质细胞对脐血长期培养启动细胞(LTC-IC)的造血支持作用,建立了人AGM区基质细胞与脐血CD34+细胞体外长期共培养体系。采用免疫磁珠方法分离人脐血CD34+细胞,接种于已制备好人AGM区基质细胞(hAGMS1-S5)饲养层的24孔板中共培养,同时设无饲养层组作为对照,分别于共培养5、6、7、8周时收获细胞行造血细胞集落培养,并采用极限稀释法(LDA)检测与人AGM区基质细胞共培养后的脐血CD34+细胞的LTC-IC含量。结果表明,无饲养层的对照组培养5周后不再产生造血细胞集落,而以hAGMS1-S5作为饲养层,共培养5周后造血细胞仍具有集落形成能力。hAGMS1-S5维持LTC-IC的作用组间比较有显著性差异(P<0.05),其中以hAGMS3与S4组支持作用最强。LDA检测结果显示,hAGMS3和S4维持LTC-IC的能力无显著性差异(P>0.05);与hAGMS3和S4共培养14天后脐血CD34+细胞中的LTC-IC扩增,分别是达到(176±46)%、(187±52)%,S3和S4两组间比较无显著性差异(P>0.05)。结论:人AGM区基质细胞S1-S5对脐血LTC-IC具有维持作用,特别是hAGMS3和S4两株细胞对脐血LTC-IC具有更好的维持及扩增作用。     

延迟植入嗅鞘细胞修复成鼠的胸髓损伤

背景:脊髓损伤后在一定的微环境中有再生的能力。嗅鞘细胞兼具星形胶质细胞和许旺细胞的特性,具有促进脊髓轴突再生的能力。目的:制作成鼠胸髓损伤模型,观察嗅鞘细胞对损伤脊髓轴突再生的作用。设计:观察性实验。单位:中山大学附属第二医院。材料:实验于2001-01/2002-11在中山大学附属第二医院完成。20只成年SD雄性大鼠,体质量(380±20)g,由中山大学实验动物中心提供(机构许可证号:SYXK(粤)2004-0020)。低糖的DMEM培养液(L-DMEM,GibcoBRL公司)、胎牛血清(Hyclone公司)、MBP(髓磷脂碱性蛋白,Sigma公司)、抗神经生长因子受体抗体(Sigma公司)。应用随机数字表完全随机化分为细胞移植组和对照组,每组10只。方法:将成年SD大鼠麻醉断颈处死,无菌条件下取出完整嗅球分嗅神经。采用改良Allen法打击脊髓建立胸髓损伤模型。细胞移植组于损伤脊髓处注入10μL嗅鞘细胞悬液(2.5×1010L-1),对照组仅注入相同剂量DMEM/F12(1∶1)培养液。移植后6周通过组织学和免疫组织化学方法观察嗅鞘细胞对脊髓轴突再生的影响。主要观察指标:①抗神经生长因子受体抗体染色鉴定嗅鞘细胞。②髓磷脂碱性蛋白染色观察髓鞘的修复。③嗜银染色观察神经轴突再生。结果:细胞移植组有2只动物死亡,对照组有3只死亡,共15只大鼠进入结果分析。①细胞移植组可见损伤脊膜完整,较正常脊髓稍变细。苏木精-伊红染色见损伤区有多极细胞,且与脊髓组织有移行过度现象,说明存活的嗅鞘细胞与宿主融合良好。新生的轴突多呈束状,周围有小圆淋巴细胞浸润。嗜银染色可见再生轴突长入损伤区组织中,多与束状排列的多极细胞伴行;对照组脊髓损伤处明显变细,脊膜尚完整。苏木精-伊红染色见脊髓损伤区未见新生轴突。嗜银染色未见再生轴突。②细胞移植组可见多极细胞,多呈束状排列,胞浆内有大量抗神经生长因子受体抗体阳性颗粒存在,进一步证明嗅鞘细胞移植6周后仍然存活,且与宿主融合良好。髓磷脂碱性蛋白染色见损伤区有呈线状髓磷脂碱性蛋白阳性纤维,提示损伤区两端均有髓鞘样物质产生,且互相靠拢。同时多极细胞中也发现有髓磷脂碱性蛋白阳性物质存在,说明移植的嗅鞘细胞有产生髓鞘样物质的作用。对照组未见轴突再生。结论:嗅鞘细胞延迟植入成鼠打击伤后脊髓后,可存活并产生髓鞘样物质,促进宿主脊髓轴突再生。     

脐血与骨髓间充质干细胞的成骨细胞定向诱导及其成骨活性比较

目的:研究脐血与成人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)的定向分化为成骨细胞的条件及其成骨活性,比较两种不同MSCs定向成骨细胞诱导后的成骨活性。方法:采用标准Ficoll-Hypaque技术分离脐血和成人骨髓MSCs,以地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C为辅剂定向诱导成骨细胞,碱性磷酸酶、骨矿化结节和I型胶原作为成骨细胞鉴定与活性评价的指标。结果:两种MSCs的细胞形态和生物学特性无明显差异。定向成骨细胞诱导后,成骨细胞标志性产物碱性磷酸酶、骨钙素、上清钙、骨矿化结节和I型胶原均得到了稳定的表达,并显著高于未诱导MSCs,而且两种细胞的成骨活性差异无显著性意义。结论:脐血和成人骨髓MSCs在适当的条件下均可向成骨细胞定向转化,两种细胞均可作为骨组织工程的种子细胞。     

非血缘供者脐血移植治疗14例儿童白血病的临床研究

为探讨HLA不全相合非血缘供者脐血移植(UD—UCBT)治疗儿童白血病的疗效，我们于2000年11月至2003年12月对14例白血病患儿进行了UD—UCBT治疗，取得了较好的效果。     

嗅神经鞘细胞移植修复成鼠半横断脑髓损伤

目的：观察嗅神经鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs)移植对脊髓轴突再生及神经功能恢复的促进作用。方法：将分离、培养3W的SD大鼠OECs，移植于12只成年SD大鼠胸10水平左侧半横断脊髓两断端；12只对照动物只注入等量DMEM；移植后6月行下肢功能评价、运动诱发电位（MEP）检测、组织学和免疫组化检查。结果：实验组及对照组动物存活率均为83．4％。实验组9只（9／10）动物下动功能有不同程度的改善，其中3只可以主动攀登。上述9只动物左下肢可记录到MEP；组织学检查见宿主再生轴突长入断端间组织，周围有髓鞘碱性蛋白阳性物质存在。对照组中2只（2／10）下肢功能稍改善，并能记录到MEP；组织学检查见轴突变性，瘢痕形成，无轴突再生。结论：OECs移植后可在脊髓中产生髓鞘样物质，促进宿主脊髓轴突再生及神经功能部分恢复。