介绍一种不加盖玻片的核酸原位杂交改良法

核酸原位杂交程序中探针和靶基因的加热变性和杂交为整个程序中最重要的环节，目前国内外最常用的方法是在切片上滴加DNA探针溶液后用盖玻片复盖组织，并加胶泥或其他封固剂封闭玻片四周，变性杂交后需拆除盖玻片，这一操作过程易损坏组织切片或出现于片、脱片。作针对上述情况，对传统的核酸原位杂交方法中的部分程序加强改良，采用不加盖玻片直接在蒸汽中变性方法，经多次实验证明此方法稳定、可靠、简便，结果满意。     

胶原酶分离及低速离心结合筛网过滤法纯化子宫内膜细胞的研究

目的:探索分离子宫内膜细胞以及纯化子宫内膜腺上皮细胞与间质细胞的最佳方法。方法:采用Ⅰ型胶原酶、胰酶、Ⅰ型胶原酶混合胰酶以及机械研磨等4种方法处理大鼠子宫,比较细胞数和活细胞率,从而获得分离子宫内膜组织的最佳方法。用获得的最佳方法分离人类子宫内膜组织,比较采用2次筛网过滤(筛网法)和低速离心结合筛网过滤(结合法)进一步纯化子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞获得的细胞数和纯化效率,从而获得较好的纯化方法。结果:Ⅰ型胶原酶、胰酶、Ⅰ型胶原酶混合胰酶和机械研磨处理大鼠子宫组织所得的细胞数分别为6.43±3.55×105/ml、4.59±2.35×105/ml、4.25±1.06×105/ml、3.57±1.15×105/ml,差异有统计学意义(P0.05);活细胞率分别为98.90±0.74%、96.63±1.84%、97.97±2.02%、97.20±4.41%,差异无统计学意义(P0.05)。筛网法和结合法纯化分离所获得的腺上皮细胞数为0.43±0.21×105/ml、8.27±2.46×105/ml;间质细胞纯度为92.94±2.89%和99.19±0.24%,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:Ⅰ型胶原酶是分离子宫内膜细胞的最佳方法,而采用低速离心结合筛网过滤法是较理想的纯化分离后的子宫内膜细胞的方法。     

幼龄成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合中不同类型一氧化氮合酶的动态表达

目的：追踪观察移植细胞在骨折愈合不同时间点的神经型一氧化氮合酶、诱导型一氧化氮合酶与内皮型一氧化氮合酶动态表达的生物学意义。方法：实验于1999-01／2004-02在中山大学动物试验中心、中山大学病理教研室完成、中山大学肿瘤防治中心完成。选择SD清洁级大鼠96只，按配对原则分为实验组48只，对照组48只；SD清洁级乳鼠20只进行成骨细胞原代培养。建立SD大鼠老龄骨质疏松骨折的动物模型，实验组将SD乳鼠颅骨体外培养的成骨细胞移植到SD雌性大鼠骨质疏松性骨折部位，对照组注入等量无血清培养液。手术后3，7，10，14，21，28，56，84d处死，每组每个时间点6只。用免疫组化检测骨折愈合不同时相的标本诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶和神经元型一氧化氮合酶的动态表达情况。结果：96只大鼠均进入结果分析。实验组：诱导型一氧化氮合酶在3d左右可见较多阳性表达的细胞，7d有表达高峰。内皮型一氧化氮合酶在3d左右可见少量阳性细胞，14d有表达高峰：神经元型一氧化氮合酶在10d左右可见少量阳性细胞，14-21d表达稍有增高，整个实验过程中神经元型一氧化氮合酶表达较弱，表达高峰不明显。而对照组诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶均有较弱表达，表达峰低平，而神经元型一氧化氮合酶表达很弱，未见明显表达高峰。结论：诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶在成骨细胞移植促进老年骨质疏松性骨折愈合的表达具有时效性，且表达的定位细胞不同，表达的量有差别，提示骨折部位一氧化氮合酶的释放可能对促进骨质疏松性骨折愈合有意义。神经元型一氧化氮合酶在成骨细胞移植促进老年骨质疏松性骨折愈合过程中的作用不明显。     

消除黑色素在免疫组化染色中对黑色素瘤诊断的影响

在免疫组化染色过程中,常见到组织中存在各种不同类型的色素。黑色素是其中的一种,多见于眼、皮肤的黑色素细胞。在机体疾病中产生的异常黑色素,如恶性黑色素瘤,在免疫组化染色后,色素能清楚的显现出来与阳性细胞容易混淆,影响了诊断结果的判断。我们在免疫组化染色前先采用高锰酸钾或铬酸的方法去除黑色素,使切片的染色结果更具真实和可靠。     

p53蛋白表达及端粒酶活性与骨组织恶性肿瘤关系的研究

目的 探讨端粒酶活性表达及p53基因蛋白产物在骨组织恶性肿瘤发生、发展中的作用。方法 采用非放射性同位素TRAP-银染方法对37例骨组织恶性肿瘤及13例同一病人的肿瘤旁对照组织中端粒酶活性进行检测,p53蛋白表达的检测是运用微波处理的LSAB免疫组化法。结果 37例骨组织恶性肿瘤端粒酶活性检出率为83.8％(31/37);同时检测的13例同一病人的肿瘤旁对照组织均未检测到端粒酶活性;p53蛋白表达检测结果为51.3％(19/37),正常对照组织无1例阳性。其中p53蛋白表达阳性的19例中16例端粒酶活性有表达。结论 端粒酶活性表达可能是骨肿瘤恶性的一种潜在生化标志物,并且可能和p53基因一起参与骨肿瘤的发生、发展过程,并具有协同作用。     

基质金属蛋白酶-2,9及其抑制剂在骨肉瘤中表达的意义

[目的]探讨基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)及其特异性抑制剂TIMP-2,1在骨肉瘤中的表达情况及其与骨肉瘤侵袭、转移、复发的关系。[方法]采用免疫组织化学链酶菌抗生物紊一过氧化酶(SP)法检测了62例骨肉瘤(初发性骨肉瘤51例、复发性骨肉瘤11例,确诊时即伴有肺转移者9例、不伴有肺转移者53例)和正常对照组织中MMP-9、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的表达,并根据阳性瘤细胞占肿瘤细胞总数的比率进行半定量量化分析和非参数检验。[结果]MMP-9、TIMP-1在骨肉瘤中的阳性表达率分别为76％、18％,与二者在正常对照组织中的阳性率相比,MMP-9表达明显升高,TIMP-1表达明显降低(P均<0.01)。MMP-2、TIMP-2在骨肉瘤中的阳性表达率分别为69％、52％,与二者在正常对照组织中的阳性率相比差异无显著性(P均>0.05)。MMP-9在肿瘤细胞的胞浆及胞膜中均有表达,且在肿瘤的侵袭边缘阳性细胞数目较多,染色强度较高。MMP-2,9及TIMP-1,2在初发性和复发性骨肉瘤之间以及在伴有肺转移和不伴有肺转移的骨肉瘤之间的表达差异无显著性。Spearman相关分析表明骨肉瘤中MMP-9与MMP-2、MMP-2与TIMP-2以及TIMP-1与TIMP-2之间的表达均显著性相关。[结论]骨肉瘤组织中MMP-9表达升高、TIMP-1表达降低,二者协同促进肿瘤细胞的生长和局部的侵袭破坏。骨肉瘤     

卵巢原发性恶性黑色素瘤1例

患者 ,女 ,36岁。无诱因腹胀月余 ,腹部膨隆 1周。外院B超示盆腔液性包块。体检腹部膨隆如孕 8月 ,叩诊上腹鼓音 ,中下腹浊音 ,移动性浊音 (+) ;子宫左后触及囊性质硬固定肿块 ,约 10cm× 8cm。血清免疫学CA12 5 2 5 8 7ku/L(正常值 (35ku/L)升高 ,CA19- 9,CEA ,AFP ,PHCG正常。CT扫描示盆腔囊实性肿块 ,考虑为左卵巢癌并子宫受累 ,腹水。手术所见 :腹腔内大量血性液体 ,约 4 5 0 0ml,腹膜、网膜、肠壁、子宫、双附件满布黑色颗粒状组织 ,肝脏无病灶。行卵巢癌肿瘤减压术 +大网膜切除术。术后行PVB化疗 1疗程 ,患者放弃 ,6个月后因…     

成骨细胞移植促进老龄鼠骨质疏松性骨折愈合过程中VEGF的动态变化

目的：动态观察在幼龄成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合过程中，VEGF在不同时相的表达及其生物学意义。方法：通过建立老龄骨质疏松SD大鼠骨折的动物模型，并将体外培养的SD雄性乳鼠成骨细胞移动到SD雌性鼠老年骨质疏松性骨缺损部位，利用免疫组化及原位杂交检测骨折愈合过程中不同时间相的移植标本VEGF、VEGFmRNA的表达，并作图像分析、绘出其动态变化图。结果：实验组VEGF、VEGFmRNA均在7d左右可见有阳性表达的细胞，14d有分泌,高峰其中以软骨细胞中阳性最强，21 d分泌量开始下降，56d后基本消失。而对照且未见明显分泌高峰。结论；成骨细胞细胞促进老龄鼠骨质疏松性骨折愈合，其机制可能是通过促进VEGF的转录和表达，从而促进骨折部位建立良好的血液循环，加速骨形成。     

胸腹腔积液脱落细胞的石蜡切片和免疫组化检查

胸腹腔积液脱落细胞的常规涂片检查,对胸腹腔肿瘤与非肿瘤性疾病的鉴别诊断颇为重要。但常规胸腹水细胞涂片中的细胞结构尤其是核的结构不够清晰,常常给诊断带来一定困难。常规细胞涂片的方法也不便于作免疫组化及一般组化检查。为了提高胸腹水脱落细胞中癌细胞的检出率并确定其来源,我们试将脱落细胞作石蜡切片,常规H、E染色并作免疫组化检查,其结果与常规细胞涂片检查比较,癌细胞的检出率较高,有助于进一步确定肿瘤的细胞来源。 材料与方法 本文收集胸水20例,腹水3例。 取新鲜胸、腹水50～300ml,置离心机内离心(2,000转×15分钟),弃去上清液加入10％中性福尔马林液固定30分钟～2小时,离心后(2,000转×15分钟)弃去上清液,加入5％明胶蛋清粘附剂与细胞混合,再     

在石蜡切片中检测ER、PR的体会

检测组织切片上某些肿瘤细胞的雌激素受体（ＥＲ）、孕激素受体（ＰＲ），对指导临床内分泌治疗及推测肿瘤预后有重要意义。如何成功地检测肿瘤细胞内的ＥＲ、ＰＲ受体，是广大病理工作者最为关心的问题。一些医院由于种种原因，致使在染色过程中达不到理想的结果。针对存...