利用微滴数字PCR进行CpG岛甲基化表型结直肠癌分子分型

目的：利用微滴数字PCR(droplet digital PCR, DD-PCR)技术进行CpG岛甲基化表型(CpG island methylation phenotype, CIMP)结直肠癌分型, 并探讨以血浆游离DNA进行CIMP分型的可行性。方法：收集2008到2012年在长海医院行结直肠癌手术的患者216例,抽提肿瘤组织DNA和血浆游离DNA, 重亚硫酸盐处理后,利用DD-PCR进行CIMP分型。CIMP分型选用CACNA1G、IGF2、NEUROG1、RUNX3、SOCS1五个基因的甲基化位点,利用免疫组织化学技术（IHC）检测P53突变情况, 以巢式PCR测序方法检测K-RAS 和BRAF突变。结果：216例肿瘤中17例(7.9%)存在BRAF突变, 96例(444%) 存在K-RAS 突变和112例 (51.9%) P53-IHC(+)。31.5%(68/216)的结直肠癌为CIMP（+）(5个基因位点中高甲基化位点数目≥3),823%(14/17)的BRAF突变属于CIMP(+), 而只有9.4% (9/96)的K-RAS 突变和7.1% (8/112) 的P53突变属于CIMP(+)。除了K-RAS ,BRAF和P53突变外,同CIMP（-）结直肠癌相比,CIMP（+）肿瘤还具有独特的临床病理特征：肿瘤更易发生在结直肠的近端位置,黏液性癌比例偏高,分化程度较高,CIMP(+) 患者生存时间显著短于CIMP (-)患者。利用血浆游离DNA进行分型和利用肿瘤组织进行分型的一致性为93.4%、灵敏度为872%、特异性为100%。结论：CIMP（+）结直肠癌具有独特的临床病理特征, 且预后较差;在缺乏肿瘤组织的情况下, 利用DD-PCR对血浆游离DNA进行CIMP分型是可行的。     

可注射、组织黏附性PVA/淀粉水凝胶对力学失稳条件下关节软骨退变抑制作用的研究

目的 制备一种仿生正常关节滑液流变学特征的组织黏附性可注射水凝胶,并研究该水凝胶抑制膝关节创伤后软骨退变的效果及其可能的机制。方法 以聚乙烯醇溶液（PVA）、淀粉和氯化钠为主要原料制备可注射、组织黏附性水凝胶（PWN）。通过流变学测试、注射器推出实验、体外降解实验、CCK-8实验、活/死细胞染色、细菌黏附实验、组织黏附实验分别对其流变学性能、可注射性、降解性能、细胞相容性、抗细菌黏附性能和组织黏附性能进行表征。构建大鼠膝关节力学失稳模型,并分为正常组、PWN组、透明质酸组（HA组）与未治疗组,其中PWN组、HA组术后1周时注射PWN与HA进行治疗。治疗4周后取大鼠膝关节标本进行Micro-CT分析和组织学染色分析,对比评估PWN对关节软骨退变的抑制作用。结果 PWN具有良好的细胞相容性和可注射性。此外,相比于HA,PWN的流变学特征更接近正常关节滑液,并且PWN具有缓慢降解的特性、更高的组织黏附性能和抗细菌黏附的能力。动物实验Micro-CT分析结果显示,PWN组软骨下骨的骨密度和骨体积/组织体积均显著高于未治疗组和HA组（P<0.05）。同时,番红快绿染色结果显示,相比于HA组...     

氨溴索支气管肺泡灌洗治疗支气管扩张合并感染的临床效果

目的 浅析支气管肺泡灌洗治疗支气管扩张并感染应用氨溴索对肺功能的影响。方法 选取2019年10月—2021年2月荣成市人民医院支气管扩张并感染患者72例,随机分为观察组（氨溴索支气管肺泡灌洗）和对照组（常规治疗）,各36例,比较两组患者的临床疗效、肺功能及炎性因子水平。结果 观察组患者治疗有效率为94.44%,高于对照组的77.78%(P<0.05)。观察组患者的呼气峰值流速（peak expiratory flow,PEF）及用力肺活量（forced vital capacity,FVC）、第1秒用力呼气容积（forced expiratory volume in one second,FEV1）等各项指标分别为（4.69±0.72）L/s、（2.59±0.38）L以及（1.72±0.31）L明显高于对照组（4.21±1.29）L/s、（2.09±0.58）L以及（1.49±0.18）L(P<0.05)。同时观察组可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体（soluble urokinase plasminogen activator receptor,suPAR）、可溶性髓系细胞...     

锁定加压钢板治疗高龄患者股骨粗隆间骨折

目的 探讨锁定加压钢板(locking compression plate,LCP)治疗高龄患者股骨粗隆间骨折的应用方法. 方法 自2008年2月～2010年3月,我院采用股骨近端锁定加压钢板治疗高龄老年股骨粗隆问骨折48例.其中男性20例,女性28例,平均年龄72.4(61 ～89)岁;按Evans-Jensen骨折分型[1]:Ⅰ型10例,Ⅱ型12例,Ⅲ型10例,Ⅳ型14例,V型2例. 结果 经术后平均11.5(6 ～18)月随访,骨折愈合平均时间6.3(4 ～7)个月.畸形愈合l例,因髋关节功能良好,未予以特殊处理;发生髋内翻2例,予以手术切开复位,DHS内固定,15个月后愈合良好;肢体短缩2例,短缩均在2 cm内,不影响下肢功能;内固定松动、失效2例,予再次手术后切开复位,DHS内固定,术后8个月时复查见骨折线模糊,内置物位置良好.术后6月,参照Harris髋关节功能评分标准评价术后髋关节功能,其中优26例,良17例,差5例,髋关节功能恢复优良率达89.6％. 结论 股骨近端锁定钢板具有操作简单,固定牢固,并发症少,早期行功能活动锻炼等优点,是治疗老年股骨转子间骨折的良好内固定方法.     

针刺阳陵泉对中风偏瘫后运动区之间脑功能连接度的影响

目的：基于功能性磁共振成像技术(fMRI)观察不同程度运动功能损伤后背侧运动前区(PMd)、腹侧运动前区(PMv)与初级运动区(M1)之间脑功能连接度(FC)的变化,探究中风偏瘫后针刺脑效应机制和位点,为针刺促进脑功能重塑提供影像学证据。方法：选取2014年9月至2019年9月北京中医药大学东直门医院收治的中风后左侧偏瘫患者26例作为研究对象,根据Fugl-Meyer运动功能评分(FMA)分为轻中度组(50～99分)18例、重度组(0～49分)8例,进行临床量表评价及fMRI扫描。选取双侧PMd、PMv、M1为种子点,比较这15对种子点对间FC的变化及与FMA的相关性。结果：全组在针刺态下健侧PMd-病灶侧M1、双侧PMv、PMd间FC高于静息态(P<0.05)。2组内,针刺态下轻中度组健侧PMd-病灶侧M1、病灶侧PMd-M1、双侧M1间FC高于静息态(P<0.05);针刺态下重度组病灶侧PMv-M1间FC低于静息态(P<0.05)。在静息态,重度组病灶侧PMv-健侧M1、病灶侧PMv-M1间FC高于轻中度组(P<0.05)。在重度组中,静息态时FMA与健侧P...     

经皮椎体成形术治疗胸腰椎骨质疏松性压缩性骨折

目的 探讨经皮椎体成形术（percutaneous vertebroplasty,PVP）治疗胸腰椎骨质疏松性椎体压缩骨折的临床效果。方法 经单侧椎弓根入路向椎体内穿针并注入骨水泥（聚甲基丙烯酸甲酯）,手术前后疼痛程度应用视觉模拟分级法（visual analog scale,VAS）评分。结果 30例38个椎体PVP均获成功,手术时间20～120 min,平均50 min。术后2周VAS（2.7±0.2）分,与术前（8.0±0.2）分相比有显著性差异（t=21.92,P=0.00）。27例术后随访4～32个月,平均24.3月,胸腰背疼痛无再发或加重,椎体高度无明显变化,相邻椎体未见骨折。结论 PVP能迅速缓解疼痛,增加椎体强度和脊柱稳定性,适用于骨质疏松性脊柱骨折尤其多发性者。     

人抗黏病毒蛋白-MxA基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的克隆人抗黏病毒蛋白-MxA基因,构建其原核表达载体并进行表达、纯化、活性鉴定,为深入开展该蛋白功能的研究奠定基础。方法从IFN-β诱导的A549细胞系中提取总RNA,通过RT-PCR技术扩增出MxA全长cDNA,克隆于pUC119载体,酶切鉴定后并经测序证实序列正确,再克隆于pET-32a（＋）载体上构建表达载体pET-32a（＋）-MxA,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达并优化诱导条件,通过NTA-Agarose亲和层析和割胶电洗脱法获取纯化MxA蛋白,用SDS-PAGE电泳分析表达产物,并通过对病毒VSV的抑制作用鉴定其活性。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示RT-PCR扩增出两条片段,大小同预计片段相符,并经测序证实与公布的MxA基因序列一致;重组载体转化菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳初步鉴定,目的蛋白约占总菌体蛋白的25%,与预计的分子量91kd相一致。用NTA-Agarose亲和层析法可获得纯度〉95%的目的蛋白,割胶电洗脱回收法可获得纯度〉90%的目的蛋白。结论克隆了人抗黏病毒蛋白-MxA基因,克隆基因在大肠杆菌中获得了较高水平的表达,并通过两种方法获得了该蛋白的纯化物。     

紫癜性肾炎患儿尿中血管紧张素原及丙二醛水平的测定及其临床意义分析研究

[目的]观察紫癜性肾炎(HSPN)患儿尿中血管紧张素原(AGT)及丙二醛(MDA)的表达水平,分析尿中AGT、MDA与尿检肾损伤各项指标之间的关系.[方法]选取2014年1月至2016年2月来本院就诊的46例hSPN患儿为研究对象(观察组),选取同期45例正常儿童作为对照组.分别检测两组受试儿童肾损伤指标及hSPN患儿治疗前后24h尿蛋白含量及AGT、MDA水平,并分析AGT、MDA与hSPN患儿肾损伤指标之间的相关性.[结果]治疗前,与对照组比较,HSPN患儿除尿β2微球蛋白/肌酐浓度外,其他各项肾损伤指标均有显著升高,24h尿蛋白及AGT、MDA含量均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后,HSPN患儿24h尿蛋白及AGT、MDA含量均较治疗前明显降低(P<0.01),表明hSPN患儿肾损伤得到一定程度改善.在HSPN发病过程中,AGT、MDA与肾小管及肾小球损伤的各项指标均有相关性.[结论]尿中AGT、MDA水平与HSPN患儿肾损伤程度具有相关性,说明肾素-血管紧张素系统及氧化应激反应参与了HSPN肾脏损伤过程.