人食管癌荷瘤裸鼠光动力效应机制的初步研究

目的 探讨光动力治疗(photodynamictherapy,PDT)对人食管癌细胞Eca-109荷瘤裸鼠的作用机制.方法 通过皮下接种Eca-109细胞建立人食管鳞癌荷瘤裸鼠模型,并将其随机分为血卟啉衍生物(Hematoporphyrin derivative,HpD)光动力治疗组(给予HpD及光照),单纯照光组(仅给予光照),单纯光敏剂组(仅给予HpD)及空白对照组.腹腔注射HpD24h后前两组行光照(光能量密度为120J/cm~2),3d后处死所有裸鼠并检测瘤组织丙二醛(MDA)含量,免疫组化检测caspase-3并HE染色观察.结果 HpD-PDT组与空白对照组.单纯照光组,单纯光敏剂组的MDA含量相比均显著增高(P<0.01),而后3组之问MDA含量均无明显差异(P>0.05).HpD-PDT组与空白对照组闻caspase-3蛋白阳性率无明显差异(P>0.05).光镜下,HE染色仅HpD-PDT组可见大片均质红染的坏死物.结论 HpD-PDT对人食管癌荷瘤裸鼠的作用机制主要是通过光照产生单态氧直接损伤肿瘤细胞并在过氧化反应中产生MDA.其凋亡途径中caspase-3可能未激活,即其凋亡途径可能是不依赖caspase-3通路的.

Abstract：

Objective To investigate the mechanism of photodynamic therapy (PDT) in nude mice bearing human esophageal cancer cell line Eca-109 xenografts. Methods A nude mouse model bearing human esophageal carcinoma was established by subcutaneous transplantation of Eca-109 cells. The mice were then randomized into 4 groups, namely hematoporphyrin derivative (HpD)-PDT group (given HpD and laser irradiation), exclusive laser irradiation group, exclusive HpD group and blank control group. In HpD-PDT group, the mice were exposed to irradiation at the light energy density of 120 J/cm~2 delivered via a DIOMED 630 PDT system 24 h after intraperitoneal HpD injection, and the mice in exclusive laser irradiation group received only laser irradiation. Three days later, all the nude mice were sacrificed for determination of malondialdehyde (MDA) production, immunohistochemistry for caspase-3 protein and HE staining of the tumor tissue. Results The MDA level was significantly higher in HpD-PDT group than in the other 3 groups (P<0.01), and comparable between the latter 3 groups. Expression of caspase-3 protein was similar between HpD-PDT group and the blank control group (P>0.05). Under light microscope, HE staining visualized massive tissue necrosis in HpD-PDT group with homogeneous red staining. Conclusion In human esophageal carcinoma xenografts in nude mice, HpD-PDT generates singlet oxygen to result in direct tumor cell damage and cause MDA production. Caspase-3 may not be activated in the apoptotic pathway, suggesting that this pathway may not be caspase-3-dependent.     

5-氨基乙酰丙酸光动力杀伤人鼻咽癌细胞株的实验研究

目的 探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)光动力学效应(PDT)杀伤人鼻咽癌细胞株CNE2的可能性.方法 对培养的CNE2分别加入不同浓度的5-ALA(0.01、0.05、0.10、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mmol/L)孵育4h,予波长630nm的半导体激光照射,照射能量密度分别为20、10、5、2J/cm2,继续孵育6、12、24h,用四唑盐比色法分别测定细胞存活率.结果 5-ALA-PDT能有效杀伤人鼻咽癌CNE2细胞,其杀伤程度与照射后孵育时间、5-ALA浓度和激光剂量呈正相关(P＜0.01).激光照射后12h,激光能量为20J/cm2,5-ALA浓度为0.5mmol/L时,其杀伤作用最明显.结论 体外培养CNE2细胞对5-ALA介导的PDT敏感.     

胃粘膜HBV感染及其对消化性溃疡愈合的影响

目的:观察乙型肝炎病毒(HBV)胃粘膜感染及其对消化性溃疡(PU)愈合的影响。方法:用聚合酶链反应(PCR) 技术检测62 例PU病人胃粘膜组织的HBVDNA及幽门螺杆菌(HP) ,用雷尼替丁、果胶铋、四环素、甲硝唑四联药物治疗4 周。结果:PU 病人胃粘膜HBVDNA 检出17 例(27.41 %) ,HP 检出35 例(56 .45 %) 。HBV感染组PU 治愈率47 .06 %(8/17) ,无HBV感染组PU治愈率82.22% (37/45),两组疗效比较(χ2 检验)P< 0.05。结论:HBV可侵犯胃粘膜,对PU 的愈合有影响     

615名中老年人红细胞参数分析

近年来，实验医学技术的飞速发展，电子血球计数仪的普及应用，将血液形态学检测方法提高到了更新的水早。许多准确的细胞参数客观地为疾病的诊断提供了重要依据。目前国内中老年人红细胞多个参数的报道尚少见，本文对615名中老年人在体检中未发现重大异常者，进行了红细胞多项数检测，结果如下。数检测，结果如下。数检测，结果如下。     

人树突状细胞SOCS1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建人树突状细胞(hDCs)信号传导通路抑制因子1(SOCS1)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体。方法根据人树突状细胞SOCS1基因(NM-0037),筛选出一个靶序列,设计并合成包含正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamH和Xho酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(含U6启动子和EGFP)连接产生pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取系列稀释法测定慢病毒滴度。然后转染hDCs,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR和Westernblot检测干扰组、阴性对照组、空白对照组SOCS1的表达情况。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。荧光实时定量PCR及Westernblot检测显示慢病毒重组质粒感染hDCs后,与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA组mRNA和SOCS1蛋白的表达量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论构建的pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒载体可有效地抑制hDCs的SOCS1的表达,为进一步研究DCs增强抗肿瘤免疫应答效应奠定基础。     

Ⅳ期结直肠癌患者血清中VEGF水平的临床意义

目的 探讨血清中血管内皮生长因子(VEGF)水平在Ⅳ期结直肠癌诊疗中的意义.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测45例Ⅳ期结直肠癌患者血清VEGF水平,20例健康体检者作为正常对照.结果 Ⅳ期患者姑息术后第7天血清中VEGF水平较术前显著降低(P<0.01).能从bevacizumab治疗中获益的患者与未能从中获益的患者相比,其治疗前VEGF水平无统计学差异(P=0.554).结论 Ⅳ期结直肠癌患者血清中VEGF水平随肿瘤负荷减小而降低.Ⅳ期结直肠癌患者治疗前血清中VEGF水平的高低似乎不能预测其能否从含bevacizumab的治疗方案中获益.     

广东地区汉族人MBL基因GGC54GAC点突变的初步筛查

目的对广东地区汉族人群的甘露聚糖结合凝集素结构基因第一外显子第54位密码点突变(GGC54GAC)进行初步筛查.方法提取外周血白细胞DNA进行相应片段的PCR扩增,再对产物进行单链构象多态性分析.结果在166人中查出野生型纯合子147例,占88.55%,GGC54GAC突变杂合子19例,占11.45%,未发现GGC54GAC突变纯合子.结论广东地区汉族人群MBL基因GGC54GAC突变频率为0.057.     

中国白族人群MBL基因SNP及其单倍型与基因型的研究

目的：研究中国云南白族人甘露聚糖结合凝集素（MBL）基因单核苷酸多态性（SNP）及其单倍型与基因型。方法：对MBL基因启动子区SNP位点-550G／C（称H／L等位基因）、-221C／G（X／Y）、＋4C／T（P／Q）已明确的白族DNA样本，采用序列特异性引物．多聚酶链反应技术检测结构基因第一外显子点突变CGT52TGT、CCC54GAC和CCA57CAA（分别称为D、B、C等位基因，野生型即A），并分析MBL基因的单倍型与基因型。结果：只检出GGC54GAC点突变，其频率为0．100；检出的5种单倍型及其频率是：HYPA0．250、LXPA0．107、LYQA0．407、LYPA0．135、LYPB0．100；各基因型及其频率为：LYPA／LYPA0．043、LXPA／LYQA0．143、LYPA／LYPB0．014、HYPA／LYQA0．086、LYPA／LYQA0．157、HYPA／LYPA0．014、LYPB／LYQA0．143、HYPA／LYPB0．043、LXPA／LXPA0．014、HYPA／LXPA0．043、LYQA／LYQA0．143、HYPA／HYPA0．157。结论：中国白族人群MBL基因存在GGC54GAC点突变，单倍型以LYQA和HYPA为主，基因型则多见LYPA／LYQA、HYPA／HYPA、LX—PA／LYQA、LYPB／LYQA和LYQA／LYQA。     

中国蒙古族人MBL基因启动子区SNP的研究

目的 研究中国蒙古族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因启动子区单核苷酸多态性(SNP)。方法 抽提人外周血白细胞基因组DNA，建立SSP-PCR及分子灯塔实时荧光PCR技术，检测MBL基因启动子区SNP位点-550(G／C，称H/L等位基因)、-220(G／C，X／Y等位基因)和 4(C／T，P／Q等位基因)，分析其单倍型及基因型频率。结果 从82人中检出等位基因型LYP／LYP4例(4．9％)，HYP／LYQ5例(6．1％)，LYP／LYQ35例(42．9％)，LXP／LXP1例(1．2％)，LYQ／LYQ11例(13．4％)，LXP／LYQ14例(17．1％)，HYP／LYP2例(2．4％)，HYP／LXP1例(1．2％)，HYP／HYP9例(11．0％)。结论 中国蒙古族人群MBL基因启动子区SNP等位基因型以LYP／LYQ、LXP／LYQ、LYQ／LYQ和HYP／HYP为主。     

肝硬化、肝癌患者临床分期与血浆中D—二聚体检测及临床意义

目的：通过检测肝硬化,肝癌不同临床分期患者血浆中D－二聚体含量,探讨其鉴别诊断意义及肝病凝血功能紊乱的机制。方法：采用美国DENLY自动酶标中冲洗仪及全自动多功能酶标仪,用ELISA试剂盒测出样本含量（不同临床分期的41例肝硬化及肝癌38例,健康对照组25例,结果：肝硬化组代偿期及失代偿期组,肝癌I,II期及Ⅲ期组患者血浆中D－二聚体含量明显高于对照组（P＜0．01）,肝硬化,肝癌各临床分期组间比较有明显差异（P＜0．01）,肝硬化代偿期组与肝癌Ⅰ,Ⅱ期组,肝硬化失代偿与肝癌Ⅲ期之间的D－二聚体相互比较无明显差异（P＞0．05）,结论：血浆D－二聚体含量在肝硬化,肝癌各临床分期患者明显增高,病情及肝功能损害程度越重血浆二聚体含量越高,肝硬化与肝癌患者比较无明显差异（P＞0．05）,故对肝硬化与肝癌的鉴别诊断意义不大。