微量酶联夹心杂交法定量检测TNF-α mRNA

目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微板酶联夹心杂交技术, 对人单核细胞分泌的TNF-α mRNA进行定量检测。方法:设计两条特异探针, 其中一条为捕获探针, 5'端带有氨基修饰, 可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合, 而且是"竖直"地包被在微孔内, 另一个为检测探针, 3'端带有生物素标记。提取人单个核细胞总RNA, RT-PCR后的扩增产物经变性后加入已包被好捕获探针的微孔板中, 加入检测探针与已杂交的产物结合, 最后加入亲和素-辣根过氧化物酶(avidin－HRP)显色系统催化底物显色, 450 nm波长下检测吸光度进行定量。结果:该方法检测TNF-αmRNA的灵敏度, 明显高于琼脂糖凝胶电泳, 而且具有良好的重复性, 等量PCR产物作10个复孔, 吸光度的CV值为7.2%, 批间的CV值为9.1%。在本实验中, 我们首次尝试着用客观的数据来表示正常人中1×10⁶个PBMCs中TNF－αmRNA的平均表达量, 发现该表示方法直观明了, 结果稳定, 而且简便可行, 不需要特殊的仪器及昂贵的试剂。结论:本方法具有高灵敏度、高特异性、精确、简单易操作, 结果数据化等优点, 适合于微量细胞因子mRNA的定量检测。     

线粒体基因组np16181～16193区基因变异与2型糖尿病的关联研究

目的 探讨线粒体基因组np16181～16193区基因变异与2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)之间的关联.方法 随机收集199例浙江地区2型糖尿病患者和205名正常对照,采用聚合酶链反应、基因直接测序检测该区域基因,同时分析变异与2型糖尿病及主要临床指标间的关联.结果 发现np16181～16193区域为高度变异区,存在多种变异形式,考虑为基因多态性位点;在该区域发现有4种变异碱基排列形式仅存在于T2DM中;在np16181～16193区域中变异组餐后1 h血糖明显高于未变异组(P<0.05),而其余各生化指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 线粒体基因组np16181～16193区域引起的变异尚不能视为2型糖尿病的易感因素.     

中医药治疗泌尿系结石临床研究进展

泌尿系结石是泌尿系统中晶体物质和有机物异常积聚形成的产物,是一种世界范围的常见病、多发病,其发病率呈上升趋势[1]。泌尿系结石属中医学中的砂淋、石淋,其发生原因历代书籍记载颇详,《诸病源候论》云：＂诸淋者,由肾虚而膀胱热故也。＂《中藏经》云：＂虚伤真气,邪热渐强,结聚而成砂。又如以水煮盐,火大水少,     

转化检验医学教育的思考与实践

人类基因组计划将生命科学的研究推到组学时代,各种组学技术使现代临床医学朝转化医学方向发展,这些新技术和新理念被引入检验医学领域,为转化检验医学的发展提供了广大的空间,以此为契机,文章重点围绕转化检验医学教育的课程改革和设置等各方面进行了的思考与实践.     

动力髋螺钉与防旋股骨近端螺钉治疗高龄股骨转子间骨折的疗效

目的 探讨动力髋螺钉(DHS)和防旋股骨近端髓内钉(PFNA)治疗高龄股骨转子间骨折疗效.方法 对102例高龄股骨转子间骨折患者采用DHS治疗54例,PFNA治疗48例,并比较两种方式治疗效果.结果 手术时间、术中出血量、术后卧床时间、内固定并发症两组比较差异均有统计学意义(P<0.05),PFNA组优于DHS组;髋关节功能恢复两组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 DHS和PFNA都是治疗高龄股骨转子间骨折的有效方法,但PFNA较DHS有优势,临床应用中可作为优先考虑的方法.     

乌蔹莓配合饲料喂养对大鼠体重,脏器和血液生化指标的影响

用乌蔹莓配合饲料喂养的SD大白鼠,四周后体重增长比对照组大白鼠快(P<0.05)。喂食15%乌蔹莓配合饲料的大白鼠血清高密度脂蛋白,高于对照组(P<0.01)。表明乌蔹莓配合饲料有促进SD大白鼠生长的作用,而且未见不良反应。     

中美联合培养眼视光学博士研究生的探索与启示

温州医学院与美国新英格兰视光学院联合培养眼视光学博士项目实施以来,已经取得了良好的成效.这个项目的成功源于合作双方始终贯彻了优势互补的办学思路,并在学制体系的优势互补、课程体系的优势互补、师资与办学条件的互补等方面进行了有益的探索.     

脂多糖对人单个核细胞白细胞介素-6基因表达的影响

目的：探讨脂多糖(LPS)对人单个核细胞表达白细胞介素-6(IL-6)mRNA的影响。方法：抽取人外周静脉血，经EDTA抗凝，LPS刺激培养，分离单个核细胞并提取总RNA，将总RNA逆转录为cDNA，然后用IL-6引物进行热启动PCR扩增。扩增产物热变性后与IL-6检测探针、捕获探针进行夹心杂交，最后加入亲和素-辣根过氧化物酶及其底物，显色检测杂交信号。IL-6引物及探针用Primer Premier 5．0软件设计。结果：LPS可在转录水平上诱导IL-6 mRNA表达，其作用强度与LPS剂量呈正相关；IL-6 mRNA表达丰度有时间效应，刺激4h后，IL-6 mRNA的表达最高。结论：LPS能显著增强人单个核细胞表达IL-6 mRNA。     

蝉拟青霉减轻环磷酰胺所致免疫抑制效应的实验研究

目的：探讨蝉拟青霉对正常及免疫抑制大鼠的免疫调节作用。方法：各组大鼠连续皮下注射相应药物26d后，测定脾脏和胸腺的重量及其系数；用生化方法测定血清，肝，脾，肾胸腺组织细胞中酸性磷酸酶（ACP）和乳酸脱氢酶（LDH）的活力；在电子显微镜下观察脾脏巨噬细胞（Mφ）的形态结构。结果：蝉拟青霉使正常大鼠脾重（脾系数）显增加（P＜0．001或P＜0．01），抑制环磷酰胺所致免疫抑制大鼠的免疫器官（脾脏，胸腺）萎缩（P＜0．05或P＜0．01）；使正常大鼠肾组织中ACP活力，胸腺组织内LDH活力明显升高（P＜0．05），并能阻遏环磷胺的致免疫抑制大鼠肝，脾，肾，胸腺细胞内ACP，LDH活力的降低（P＜0．05）或P＜0．01或P＜0．001）；电镜观察发现，单以便肝霉使正常大鼠脾Mφ体积增大，胞质内溶酶体增多，细胞表面可见粗而短的突起。结论：蝉拟青霉对机体具有免疫激活活性，并能拮抗环磷酰胺的免疫抑制作用。     

细脚拟青霉总多糖对人单核细胞激活的实验研究

目的：探讨细脚拟青霉总多糖对人单核细胞免疫功能的调节作用。方法：用0．125、0．250和0．500mg/ml三种不同浓度的细胞拟青霉总多糖在37℃体外培养人血单核细胞24h后，用全自动生化分别仪测定其中乳酸脱氢酶与酸性磷酸酶活性，并进行中性红吞噬试验。结果：细脚拟青霉总多糖使人血单核细胞内乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶的活性均升高（P＜0．001或P＜0．01),对中性红摄取能力也起增强作用（P＜0．01或P＜0．001），且对体外培养人血单核细胞的调节作用具有剂量效应。结论：细脚拟青霉总多糖对体外培养的人血单核细胞具有激活作用，能增强人血单核细胞的免疫能力。