组学时代医学检验专业教学的探索与实践

人类基因组计划完成后,生命科学研究进入到＂组学＂的研究时代,这给临床医学的发展带来了无限的希望,这些新技术、新理念、新思维被引入医学检验领域,为其提供了广大的发展空间,在此契机下,我们医学检验教育也围绕组学教育方向从办学模式、课程和实验教学体系改革、师资队伍建设和搭建产学研平台等方面进行了探索与实践。     

细脚拟青霉总多糖对人外周血单核细胞TNF-α水平及增殖活性的影响

目的提取分离细脚拟青霉总多糖 (PtPs) ,探讨其对人外周血单核细胞 (PBMC)的调节作用。方法采用水提醇沉淀法提取PtPs成分 ;用不同浓度的PtPs单独或协同脂多糖 (LPS)在体外刺激PBMC ,酶联免疫法测定TNF α的水平 ,溴化四唑蓝法测定增殖活性。结果所得PtPs制品的纯度为 76 .1% ;适当剂量的PtPs (10 0～ 5 0 0 μg/ml)能够单独或协同LPS提高PBMC对TNF α的分泌 ;还可剂量依赖性地促进PBMC的增殖活性。结论PtPs对体外培养的PBMC具有激活作用 ,可能是发挥免疫药理作用的主要活性成分。     

TEM-116型ESBL天然酶与重组酶的动力学特性研究

目的 研究TEM-116型ESBL天然酶与重组酶的动力学特性，并比较它们的差异。方法 采用紫外分光光度法检测酶促抗生素水解反应，以Lee-Wilson改良双倒数方程数据处理法进行数据处理，测定天然酶与重组酶的Km、Vmax及kcat，观察温度和pH对酶促反应的影响。结果 以Lee-Wilson改良双倒数方程数据处理法进行数据处理方便而准确地测定了天然酶与重组酶的Km与Vmax并计算出kcat,温度和pH对天然酶与重组酶酶促反应效应相似。天然酶与重组酶最优先的底物均为头孢哌酮，其次是头孢氨苄；对氨苄西林、阿莫西林、青霉素和哌拉西林有最高的催化效率。结论 天然酶与重组酶的动力学参数无显著差异。     

蜂花粉水提取液对实验性胃粘膜损伤的保护作用

目的研究蜂花粉水提取液对胃粘膜的保护作用。方法分别用无水乙醇、０．６ｍｏｌ／ＬＨＣｌ对小鼠灌胃复制实验性胃粘膜损伤的动物模型，用福尔马林固定后观察并记录胃粘膜损伤程度，并与事先用蜂花粉水提取液灌胃的小鼠进行比较分析。结果无水乙醇、０．６ｍｏｌ／ＬＨＣｌ对小鼠胃粘膜均可导致小鼠胃粘膜出血及溃疡性损伤，但事先用蜂花粉水提取液灌胃，可显著减轻无水乙醇、０．６ｍｏｌ／ＬＨＣｌ所致的小鼠实验性胃粘膜损伤的程度，主要表现为胃粘膜出血点减少、溃疡面积缩小。结论蜂花粉水提取液对胃粘膜具有保护作用。     

人工肝支持系统对肝衰竭患者细胞因子影响的研究

目的观察人工肝支持系统对肝衰竭患者血清IL-6、TNF-α、IL-12p70和INF-γ的清除效果,进一步探讨人工肝支持系统在肝衰竭治疗中的意义。方法采用CBA法检测63例肝衰竭患者(29例为人工肝结合内科治疗组,34例为内科治疗组)治疗前后细胞因子水平,比较它们在治疗前后的变化。结果肝衰竭患者细胞因子水平治疗前、后均高于健康对照组(均P<0.05),有效组治疗后,IL-6、TNF-α水平均较治疗前下降明显(均P<0.05),且人工肝有效组下降的更明显,IL-12p70和IFN-γ有一定水平的上升,人工肝组IL-12p70水平治疗前与治疗后差异有统计学意义(P<0.05),IFN-γ水平差异无统计学意义(P>0.05),内科有效组虽有上升,但差异无统计学意义(均P>0.05);无效组治疗后,IL-6、TNF-α水平保持较高水平,治疗前后差异无统计学意义(均P>0.05),IL-12p70和IFN-γ治疗后水平下降,但前后差异无统计学意义(均P>0.05)。结论人工肝治疗后对IL-6、TNF-α均有不同程度的清除作用,而IL-12p70和IFN-γ却有一定程度的升高,从而减轻免疫反应对肝细胞的损害,有助于改善肝衰竭患者的预后。     

应用实时荧光聚合酶链反应检测婴幼儿腹泻标本中的腺病毒

目的 建立实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测腺病毒,并分析浙江省温州地区散发性婴幼儿腹泻患者不同型别腺病毒的感染情况.方法 根据GenBank中腺病毒六邻体基因序列设计一对通用引物,建立Real-time PCR方法检测婴幼儿腹泻标本中腺病毒DNA,并与免疫层析法比较;同时对Real-time PCR方法 检测阳性的标本进行PCR产物测序和病毒分离培养及酶切鉴定.结果 建立快速、特异检测婴幼儿腹泻标本中腺病毒DNA的Real-time PCR技术.157份婴幼儿腹泻标本中免疫层析法检测阳性3份,阳性率为1.91%;Real-time PCR检测阳性5份,阳性琦率为3.18%(5/157);154份免疫层析法检测阴性标本中,有2份Real-time PCR法检测为阳性.5份Real-time PCR检测阳性标本经测序鉴定,Ad3型占1.91%(3/157),Ad7型占1.27%(2/157);经病毒分离培养检出阳性2例,酶切鉴定为Ad3型.结论 Real-rime PCR技术结合PCR产物直接测序分析具有敏感、特异等优点,适用于腹泻标本中腺病毒的检测及分型.2008年2-4月浙江省温州地区散发性婴幼儿腹泻的腺病毒主要为Ad3型和Ad7型.     

我国HIV-1 CRF07_BC流行重组毒株Tat蛋白第一外显子CTL表位预测

目的 通过测定和分析我国HIV-1 CRF07_BC毒株Tat蛋白第一外显子的基因序列预测其CTL表位的分布情况.方法 236份来自第3次全国HIV分子流行病学调查中感染CRF07_BC毒株的患者的血浆样本,应用巢式聚合酶链反应(nested-PeR)扩增tat基因第一外显子基因区并测序,使用BIMAS HLA Peptide Binding Predictions在线软件和统计学软件对CTL表位进行预测分析.结果 236份CRF07_BC毒株来自16个省份,主要为静脉吸毒传播(58.9%),其次为性传播(25.0%).236条CRF07_BC Tat蛋白第一外显子区共分布有12种CTL表位,主要分布于脯氨酸富集区、半胱氨酸富集区和疏水核心区,碱性区和谷氨酰胺富集区没有发现已知的CTL表位分布,这些表位主要受5种HLA基因型(A * 2501、A * 2902、B * 15、B * 5301和Cw * 1203)以及6种HLA血清型(B53、B58、B57、A3、A68和Cw12)限制,其中5种表位的单氨基酸变异频率大于50%.结论 我国HIV-1 CRF07_BC毒株Tat蛋白第一外显子CTL表位分布于不同功能区,并且存在氨基酸变异.     

肝细胞生长因子抑制肿瘤细胞凋亡作用研究

 目的 探讨肝细胞生长因子（HGF）抑制凋亡诱导剂依托泊苷（etoposide,VP-16）诱导5种肿瘤细胞（B细胞淋巴瘤细胞系Raji、人急性粒细胞白血病细胞系HL-60、宫颈癌细胞系HeLa、前列腺癌细胞系PC-3、非小细胞肺癌细胞系A549）凋亡的作用及其分子机制的研究。方法 实验设正常对照组、药物组及肝细胞生长因子保护组,通过CCK-8法观察依托泊苷对5种肿瘤细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞术,吖啶橙(AO)荧光染色,瑞氏染色（HE）,透射电镜定性及定量观察5种肿瘤细胞的凋亡情况,并进行相关分析。结果 CCK-8法显示依托泊苷可明显抑制Raji、HL-60、PC-3、HeLa、A549等5种细胞增殖的药物浓度分别是100、1、400、200、200 μg·mL^-1;透射电镜下可观察到典型的凋亡细胞。流式细胞仪检测结果表明,5种细胞的药物组凋亡率均明显高于对照组(P<0.01,P<0.05),其中肝细胞生长因子保护组凋亡率明显低于药物组(P<0.01,P<0.05);吖啶橙染色和HE染色结果表明,正常组细胞形态完好,药物组及肝细胞生长因子保护组凋亡率明显增高(P<0.01,P<0.05),其中肝细胞生长因子保护组凋亡率明显低于给药组(P<0.01,P<0.05)。结论 肝细胞生长因子可明显抑制依托泊苷诱导的5种肿瘤细胞凋亡,其作用机制有待进一步研究证实。     

实时定量PCR检测细菌中blaCYX-M-14基因

目的 探索实时定量PCR检测临床、环境细菌中blaCYX-M-14基因流行情况.方法 将收集的65份标本先用ESBL表型确认试验及其KB琼脂扩散法初筛,然后通过菌落平板计数,实时定量PCR方法测出细菌blaCYX-M-14基因C(t)值,最终计算得到平均每个待测细菌中的blaCYX-M-14基因的单个拷贝数.结果 从65份标本中分离得到4株产ESBLs的大肠埃希菌,实时定量PCR检测后得到四株细菌的blaCYX-M-14基因C(t)值依次为11.08,11.63,11.80,13.46,拷贝数分别为6.92×107copies/μl菌液,4.67×107copies/μl菌液,4.22×107copies/μl菌液,1.35×107copies/菌液,即1.05copies/细菌,1.90copies/细菌,2.92copies/细菌,1.10copies/细菌.结论 细菌blaCYX-M-14基因拷贝数的高低与细菌多重耐药现象正相关,建立的实时定量PCR检测细菌中blaCYX-M-14基因的方法具有直观,快捷的优点,有助于检测临床及其环境中耐药菌blaCYX-M-14基因流行情况.