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41.
42.
目的:建立TaqMan-MGB技术实时定量检测人IL-6 mRNA的方法,并用于检测人外周血单个核细胞在牛膝多糖诱导下IL-6 mRNA的表达。方法:(1)抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,PCR扩增IL-6后纯化PCR产物,与pMD 18-T载体进行连接,转化宿主菌DH-5α。提取重组质粒DNA,作为实时荧光定量检测的标准品。建立TaqMan-MGB技术实时定量检测IL-6 mRNA的方法。(2)终浓度分别为0、100、200、400、800和1 600 mg/L的牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞,定量检测IL-6 mRNA的表达。结果:(1)酶切分析、PCR扩增以及测序结果均证实IL-6 cDNA成功重组到pMD 18-T载体上。(2)TaqMan-MGB技术检测IL-6 mRNA线性范围广;灵敏度高;特异性好;重复性好。(3)牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞后IL-6 mRNA表达增高。结论:TaqMan-MGB技术能较为精确地定量IL-6 mRNA。 相似文献
43.
目的探讨狼疮肾炎(LN)小鼠肾脏和正常小鼠肾脏蛋白质组的差异。方法应用双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离肾组织总蛋白质,凝胶用银染显色,扫描仪获取凝胶图像并对其进行软件分析。结果同组实验重复3次,其中正常对照组3张图找到蛋白质点平均573±52个,匹配率为83%;LN组找到蛋白质点平均658±43个,匹配率为87%。经软件分析,LN组和对照组比较表达增加大于2倍的点有119个;降低大于0.5倍的点有140个。结论LN小鼠肾脏蛋白质表达发生了显著变化,这可能和LN的发生发展有着密切关系。 相似文献
44.
我院1999年1月以来应用肝炎灵联合甘利欣治疗慢性乙型肝炎42例,疗效显著,现报告如下. 相似文献
45.
人EGF受体干扰序列-IL18融合基因构建及其表达产物结构预测 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:构建带有EGF受体干扰序列的人IL-18融合基因并预测其表达产物的二级结构。方法:利用分子生物学技术,将人IL-18的成熟肤序列cDNA与EGF受体干扰序列cDNA融合,构建重组体EGF-IL18。应用蛋白质分析软件对融合基因翻译后在二级结构水平上的一些生物学特性加以预测。结果:测序表明融合基因序列与设计一致。其相应的氨基酸序列经软件分析,并与人IL-18的成熟肤单独的分析结果相比较,发现在二级结构水平几乎没有变化,融合过程未影响IL-18的活性。结论:该融合基因可进一步用于导向多肽EGF-IL18的基因工程。 相似文献
46.
目的 建立并应用检测儿童下呼吸道感染WU多瘤病毒(WU polyomavirus)的实时荧光定量PCR( real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)方法.方法 选择WU多瘤病毒的VP2基因作为检测的目标基因,设计FQ-PCR引物和检测探针,以重组质粒为标准品建立标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价;应用该方法对温州医学院附属温岭医院收集的临床下呼吸道感染患儿的痰液、咽拭子846份及血清标本846份进行定量检测.结果 本研究建立FQ-PCR检测方法,质粒标准曲线的方差系数为0.998,灵敏度可达到50拷贝;应用该方法检测700份痰液标本,检测到7例阳性标本,146份咽试子标本中未检测到阳性标本,总阳性率为1.00% (7/700),846份血清标本未检测到阳性标本.结论 本研究建立的FQ-PCR方法可以特异、快速、灵敏地对儿童下呼吸道感染的WU多瘤病毒进行定量检测;痰液标本较咽拭子或血清标本更适用于WU多瘤病毒感染的核酸检测. 相似文献
47.
Objective To evaluate the effect of mitochondrial DNA(mtDNA) secondary mutations,haplotypes,GJB2 gene mutations on phenotype of 1494C > T mutation,and to study the molecular pathogenic mechanism of ma... 相似文献
48.
目的: 利用杆状病毒表面展示系统对丙型肝炎病毒(HCV)进行早期检测。方法: 利用杆状病毒表面展示(baculovirus surface display) 技术,构建展示HCV结构蛋白的重组杆状病毒vAc-Flag-HCV C-GP64、vAc-Flag-HCV E-GP64和vAc-Flag-CE-GP64。结果: (1)Western blotting 分析结果表明重组杆状病毒表达了C(HCV核心蛋白)、E(HCV包膜蛋白)和CE蛋白。(2)激光共聚焦显微镜检测结果表明,重组杆状病毒感染昆虫细胞Sf9后在昆虫细胞膜上表达了C、E和CE蛋白。(3)免疫金电子显微镜观察表明重组蛋白展示在杆状病毒囊膜上。(4)重组病毒进行浓缩纯化后,利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术对HCV样本进行检测,vAc-Flag-CE-GP64的检测阳性率可达80.2%。结论: vAc-Flag-CE-GP64可用于对HCV进行早期检测。 相似文献
49.
目的了解hMAM、NF-κB、CA153、OPN和MMP-13 5种血清指标诊断乳腺癌的临床价值。方法 ELISA法检测hMAM、NF-κB、OPN和MMP-13,雅培i2000全自动发光仪检测CA153,比较乳腺癌组(59例)和正常对照组(35例)外周血中5种指标的表达特点,验证其临床价值。结果与正常对照组比较,hMAM、NF-κB、CA153和OPN在乳腺癌中高表达,且差异有统计学意义;对乳腺癌的诊断价值,从高到低分别为:hMAM、NF-κB、CA153和OPN。不同病理分期中,CA153和OPN在乳腺癌晚期显著升高。结论 hMAM、NF-κB、CA153和OPN对乳腺癌诊断具有一定的价值,其中hMAM更好;当CA153和OPN明显升高,可能提示乳腺已进入中晚期。 相似文献
50.
氨基糖苷类抗生素在治疗感染性疾病中起着重要作用,尤其是革兰阴性菌引起的严重感染,但是随着临床上耐药菌株的出现较大地限制了此类抗生素的应用,因此,在对细菌耐药机制研究的基础上如何控制细菌的耐药性成为一项迫切需要解决的任务。针对细菌对氨基糖苷类抗生素产生抗性的机制不同,目前采用的措施主要有3种:1)对原有氨基糖苷类抗生素进行改造;2)开发氨基糖苷类抗生素修饰酶抑制剂;3)设计双功能氨基糖苷类抗生素。 相似文献