人Man2c1转基因小鼠模型的建立

目的 为在体内研究MAN2C1的生物学意义而建立转hMan2c1基因的小鼠。方法 构建pIRKS2-EGFP-hMan2c1重组表达载体，经体外转染实验鉴定转染的基因能在COS-7细胞表达后，注射人ICR小鼠受精卵，以制备转基因小鼠。用基因组PCR鉴定目的基因在宿主基因组DNA的整合。用RT-PCR和Westernblot分析hMan2c1在转基因小鼠的表达。结果 在116只原代小鼠中，有7只hMan2c1基因组PCR阳性。在所检测的20只F1代小鼠中，有9只hMan2c1基因组PCR阳性。在所检测的21只F2代小鼠中，有16只基因组PCR阳性。用鼠尾组织RT-PCR和Western blot检测hMan2c1基因表达，确定基因组PCR阳性的7个系中有4个系阳性。结论 建立了4个稳定表达hMan2c1的转基因小鼠系，为深入研究MAN2C1的生物学意义打下了基础。     

6A8α-甘露糖苷酶表达抑制使Jurkat细胞间的黏附性增强

目的　探讨 6A8α 甘露糖苷酶表达抑制对人T淋巴母细胞Jurkat生物学行为的影响。方法　采用反义核酸技术抑制细胞中 6A8α 甘露糖苷酶的表达。用PCR检测转导基因在基因组中的整合。用单抗 6A8作探针 ,Western印迹和免疫荧光染色流式细胞术检测细胞中 6A8α 甘露糖苷酶的表达状况。用ConA结合试验检测细胞蛋白质的糖基化改变。普通光学显微镜观察细胞的形态。用DNA芯片技术分析AS细胞和M细胞mRNA表达的差异。用RT PCR和免疫荧光染色流式细胞术验证基因芯片结果的可靠性。结果　制备了 6A8α 甘露糖苷酶表达抑制的Jurkat细胞 (AS)。与对照细胞 (野生型细胞W和转导空载体的细胞M)相比 ,AS细胞在培养中黏附成大团块。DNA芯片分析见与M细胞相比 ,AS细胞中有 19个基因的表达上调 ,2 0个基因的表达下调。上调的基因中有一些与细胞间黏附相关 ,如CD5 4、CD11a、CD2 4、CD82、整合素αX、整合素α7、整合素αE、IL 1R、IL 2Rγ和TNFSF9。RT PCR肯定了DNA芯片分析的可靠性。免疫荧光染色流式细胞术进一步肯定了CD5 4和CD11a在AS细胞表达的上调。结论　 6A8α 甘露糖苷酶表达抑制使Jurkat细胞间黏附增强 ,CD5 4和CD11a等黏附分子表达的增高可能与此相关。     

结核分枝杆菌感染小鼠的脾脏和肺脏组织荷菌量与病理变化

目的分析结核急性感染小鼠脾脏和肺脏的组织荷菌量以及病理的动态变化。方法以3×105CFU结核分枝杆菌标准株H37Rv尾静脉途径感染雌性C57BL/6J小鼠,测定感染后1 d、1周、2周、3周、4周、6周和8周肺脏及脾脏组织的荷菌量,脾脏和肺脏组织经HE染色分析病理变化。结果感染动物的脾脏荷菌量在前3周逐步提高,在4～8周脾脏荷菌量维持稳定,肺脏组织在2～8周组织荷菌量逐步升高。病理分析显示动物感染3周后肺脏和脾脏出现肉芽肿,在6～8周病理损伤加重。结论小鼠经尾静脉感染高剂量结核分枝杆菌在8周前表现为急性感染状态,适用于抗结核药物的体内药效学评价。     

结核分枝杆菌低剂量感染小鼠模型的建立与分析

目的 建立结核分枝杆菌低剂量感染的小鼠模型,分析感染小鼠组织荷菌量、组织病理随感染时间的动态变化。 方法 以100 菌落形成单位(CFU)的结核分枝杆菌标准株H37Rv经尾静脉途径感染雌性C57BL/6J小鼠40只,于感染后1、3、5、8、12、16、20、24周取材,每个时间点5只小鼠,脾、肺组织匀浆培养检测脾脏组织的荷菌量,脾脏、肺脏及肝脏组织经HE染色分析病理变化。 结果 小鼠感染后3周脾脏荷菌量达到（4.97±0.19）lg CFU,在感染后5周下降至（3.64±0.22）lg CFU,至感染后8周降到最低的（2.75±0.23）lg CFU;感染后3周肝、脾、肺等脏器出现病理改变,感染5周时病变加重,感染8周时病变自然减轻。 结论 成功建立了结核分枝杆菌低剂量感染小鼠模型,为结核分枝杆菌慢性持续感染或潜伏感染的研究可提供有用的工具。     

荧光RAA检测小鼠微小病毒的研究和应用

目的 病毒培养、组织学、免疫学及普通PCR方法等在小鼠微小病毒(minute virus of mice, MVM)的检测方面都存在一定的不足,不能满足目前实验动物饲养机构现场检测MVM病毒的需要,因此探索开发一种新的、简单易用,便于现场检测MVM的检测方法具有重要的意义。方法 根据Genbank公布的MVM序列,对MVM高度保守序列区域Ns1基因设计荧光重组酶介导链替换核酸扩增的引物和探针,建立了一种MVM荧光法重组酶介导链替换核酸扩增技术(Real-time RAA)检测方法,对其特异性、室温储存稳定性、灵敏度及临床样本验证方面与qPCR法进行对比分析。结果 荧光RAA法在39℃20 min内即可检测到MVM病毒特异性扩增曲线;其灵敏度为10 copies/μL;与Reo-3、MHV-1、MHV-3、MHV-A59、MHV-JHM病毒均无交叉反应;检测试剂室温储存20 d无明显的扩增性能下降;分别对15份阳性模拟样品进行荧光RAA法与qPCR法的检测比对,结果显示两种方法的符合率为15/15;对两种方法的相关性进行统计学分析,结果显示相关系数R²=0.85,两...     

助力战疫不添乱

正一粒种子,遇不到合适的土壤,便不会生长;而一种病毒,找不到它的宿主,它还能怎样?病毒是一种不能独立生存的生物,它必须侵入其他生物的细胞才能繁殖。如果把肆虐的病毒当作一粒种子,那么我们人体的细胞就是这种子的土壤。传染病的发生有三个条件。一个是传染源,就是病毒本身。一个是传播途径,不同的病毒传     

小鼠仙台病毒ELISA抗体检测规范化试剂盒的研制与应用

目的按照实验动物国家标准和农业部对于兽医诊断制品的要求研制小鼠仙台病毒抗体检测试剂盒,并在临床检测中分析其适用性。方法建立仙台病毒的种子批和BHK-21细胞的细胞库;标化仙台病毒生产工艺、抗原蛋白纯化工艺;优化ELISA反应板体系;标化质控血清。使用规范化的ELISA试剂盒对我单位672份送检血清样品进行检测,使用IFA和Western blot方法进行复检。结果病毒的种子批检验表明在-80℃保存半年以上毒力稳定;病毒生产和抗原纯化工艺的标准化提高了抗原生产的稳定性;对照体系的设定降低了环境等变量对于结果判定的影响。在对临床样本的检测过程中发现3种方法的灵敏度ELISA高于Western blot高于IFA。结论规范化的小鼠仙台病毒ELISA抗体检测试剂盒能对小鼠仙台病毒感染状况作出准确判断,具有一定的稳定性和结果可重复性。     

实验用狨猴微卫星引物筛选及遗传多样性分析

目的筛选、优化狨猴微卫星DNA引物,用以对中国医学科学院医学实验动物研究所引进的实验用狨猴种群进行遗传学分析及评估。方法用筛选的20对狨猴微卫星引物,对随机抽取的30只狨猴血液样本进行基因组DNA提取及PCR扩增,扩增产物经电泳鉴定后进行STR扫描检测,用Popgene1.32软件对STR扫描结果进行数据处理和分析。结果 20对微卫星引物均呈现出遗传多样性,共检测147个等位基因,观察等位基因数5~10个,平均7.35个;有效等位基因数2.2500~6.3830个,平均4.0402个;观察杂合度0.000~0.4667,平均0.1533;期望杂合度0.1424~0.4350,平均0.2506;香隆指数1.2242~2.0324,平均1.5949;多态信息含量0.5366~0.8254,平均0.7053。结论本文筛选的20对狨猴微卫星引物具有高度遗传多样性,均处于Hardy-Weinberg平衡状态。     

负压屏障设施动物饲养笼具的选择及其感染风险的识别

目的生物安全实验室的感染性动物实验大部分经空气传播的致病因子可利用安全隔离装置有效控制,啮齿类动物饲养笼具作为一种常用设备对其要求仍不明确。本研究将测试本实验室(负压屏障设施)模拟感染动物实验在使用开放和密闭2种啮齿类动物笼具的病原暴露风险,并评价本设施的硬件条件和管理措施对于风险控制的水平。方法使用具有卡那霉素抗性的大肠杆菌(Kan~+,E.coli,DH5α)作为指示微生物,测试开放笼盒饲养、密闭笼盒(与外界无压力梯度)饲养、生物安全柜动物换笼等操作的暴露风险,并对负压设施内外的指示微生物进行监测。结果动物在负压屏障设施中使用开放笼具饲养存在病原暴露风险,负压屏障设施一定程度上可以控制病原的播散;动物在无压力梯度的密闭笼盒的饲养环节未能检测到指示菌;密闭笼盒使用生物安全柜设备进行换笼操作可有效控制病原暴露风险。结论在负压屏障设施内使用密闭笼盒,在笼盒与外界无压力梯度的情况下亦可保障生物安全风险的有效控制。     

实验动物国家标准中大小鼠微生物检测项目的考量

本文对我国现行实验动物微生物国家标准中小鼠和大鼠涉及的微生物进行了回顾性分析,考量病原微生物的感染谱,病原对实验动物自身的危害,病原对科学研究的影响水平以及国内外病原微生物的流行情况,以期为我国实验动物国家标准的修订提供一些参考。