三种小鼠RNA病毒样品储运条件对核酸检测的影响

目的分析实验动物小鼠三种肠道病毒MHV、Reo-3、MNV生物样品的储运条件对病原核酸检测结果的影响。方法将MHV、Reo-3、MNV三种RNA病毒与小鼠盲肠内容物混合制备参考品;保存剂包括RNA提取试剂裂解液(Buffer AVL)及生理盐水,存储温度为4℃及室温(22℃~25℃);在保存1、2、3、7、14 d时间点提取各样品核酸,采用实时荧光定量PCR方法检测病毒样品量的变化。结果生理盐水作为保存剂核酸样品检出量低于RNA提取试剂裂解液组,且检出量下降明显;Buffer AVL组样品储于4℃条件的样品检出量优于室温25℃的条件;4℃-buffer AVL组的三种病毒参考品在3 d时间点的病毒检出量在50%以上,在7 d时间点仍有检出,但14 d时已检测不到。结论三种小鼠RNA病毒样品储运条件优选使用RNA提取试剂裂解液,并在低温条件下储运,最好在3 d内完成核酸检测。     

雪貂感染H7N9禽流感病毒动物模型的建立

目的建立雪貂感染H7N9禽流感病毒动物模型。方法 A/Anhui/1/2013(H7N9)禽流感病毒经鼻吸入感染雪貂,观察动物临床症状和体征,上呼吸道排毒情况及组织病理学变化。结果雪貂感染后出现体重下降、活动减少以及打喷嚏的临床表现,上呼吸道、心脏、肝脏及嗅球可检测到活病毒,上呼吸道排毒的峰值出现在感染后的第3~5天。血清抗体滴度最高达到1280,外周血淋巴细胞数量减少、粒细胞数量增加。组织病理学显示动物肺脏呈局灶性间质性肺炎及肺泡炎改变,CT显示肺内片状阴影。结论成功建立雪貂感染H7N9禽流感病毒的动物模型,模型的建立为H7N9禽流感发病机制研究、药物及疫苗的评价奠定了实验基础。     

实验动物微生物国家标准研讨会纪要

正我国的实验动物国家标准于1994年制定,其后进行了2次修订。现行实验动物微生物国家标准于2011年颁布实施。随着实验动物科学及相关学科的发展,我国的实验动物国家标准需要适时更新。为此中国实验动物学会2015年11月份在石家庄市召开了实验动物微生物国家标准研讨会,旨在对实     

大鼠仙台病毒ELISA、间接免疫荧光和免疫印迹三种检测方法的比较

目的比较ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)、IFA(immuno-fluorescence assay)和WB(Western blot)三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异。方法仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA、ELISA方法对20份无菌大鼠、227份SPF大鼠以及63份清洁级大鼠送检血清样品进行检测,阳性及可疑样品用WB方法进行了验证。结果 20份无菌大鼠血清样品被3种方法检测为仙台病毒抗体阴性;SPF级大鼠样品被IFA方法判定为阴性,1.32%(3/227)被ELISA方法判定为阳性,其中有2/3被WB确认为阳性;ELISA、IFA和WB在清洁级大鼠样品中检出仙台病毒的阳性率分别为为18.12%、11.34%和15.87%。结论三种检测方法灵敏度从高到低依次为ELISA、WB和IFA。WB方法可作为IFA和ELISA难以确定结果的替代方法。     

一个灵长类种属特异基因——XAGE-3转基因

目的比较研究F344fNSIc与WistarNWN两种大鼠对1．溴丙烷（1-BP）引发的毒性发应。方法雄性WistarNWN和F344／NSIc大鼠各6只,吸入染毒5030mg／m31-BP1周。取睾丸做病理切片,过碘酸希夫氏染色;切取胫后支神经,Kliiver．Barrera法染色,光镜下观察。结果睾丸组织病理学显示,1．BP染毒后第VIII发育阶段的生精上皮中出现长形精子细胞滞留。胫后支神经组织病理学显示,1-BP染毒后周围神经的髓鞘出现卵圆形的缺失变性。Wistar和F344fNSIc两种大鼠均出现了上述病理学改变。结论1-BP毒性的典型病理学改变在F344／NSIc与WistarNWN两种大鼠中均得以重现。F344／NSIc纯种大鼠是进行1-溴丙烷毒效应基因水平的研究的适宜品系。     

复杂性状遗传CC小鼠的特点及实际应用中的提示

实验动物为生命科学研究提供支持,特别是小鼠,因其遗传、免疫等信息积累丰富而应用广泛。后基因组时代,为了研究人类以及动物的基因组信息,人们建立了多种转基因、基因敲除小鼠模型以研究某一单基因功能;然而人类大部分疾病并非单基因疾病,除受外界环境影响,一般受多遗传因素控制。生命科学领域的多基因相关的复杂性状研究向实验动物提出了新的要求。因此科学家提出了建立协同杂交小鼠(CC小鼠)资源的计划。本文将对CC小鼠出现的背景、特点及应用中需要考虑的问题做一概述。     

实验动物金黄色葡萄球菌LAMP检测方法的建立

目的 建立一种能够应用于实验动物金黄色葡萄球菌检测及鉴定的环介导等温扩增(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP)方法.方法 本研究针对金黄色葡萄球菌特异的nuc基因设计4条引物,对反应条件进行优化.结果 通过优化,该方法60℃、40 min、Mg2+浓度8 mmol/L、dNTP浓度2.0 mmol/L、甜菜碱浓度0.8mmol/L时,对金黄色葡萄球菌检测限为2 cfu,且与其它常见实验动物致病菌无交叉反应.反应结果可通过添加荧光染料SYBRF green Ⅰ直接肉眼观察.结论 本研究建立的金黄色葡萄球菌LAMP方法具有快速、灵敏、操作简单、设备要求低的特点,适用于基层、大批量样本、快速检测的要求.     

动物鼻式气溶胶暴露装置的运行效果评价

目的本研究旨在探讨动物鼻式气溶胶暴露装置能否正常运行并产生特定粒径大小的气溶胶颗粒,探究运行过程中装置气溶胶气密性、分布均匀性及消毒剂对系统的消毒效果。方法使用动物鼻式气溶胶暴露装置产生大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)气溶胶、鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus)MHV-JHM气溶胶,分别用75%乙醇、3%过氧化氢对系统进行消毒,分别采集暴露舱内、易泄露处及消毒后的E.coli、MHV-JHM。对采集的E.coli进行微生物培养;对采集的MHV-JHM提取RNA,一步法RT-PCR检测样本中病毒RNA。结果装置产生的E.coli气溶胶颗粒中值直径为(1.27±0.61)μm,暴露舱内采样液涂板有菌落生成,置于暴露舱不同端口的NC膜上菌落数一致,易泄露处的沉降平皿上无菌落生长,消毒后采样平皿上无菌落生长;暴露舱内采样液中的MHVJHM病毒RNA为阳性,易发生泄露处采样液中病毒RNA为阴性,消毒后采样液中病毒RNA为阴性。结论动物鼻式气溶胶暴露装置能正常运行产生气溶胶;在运行过程中,暴露舱各端口有气溶胶通过并分布均匀,气密性好;使用相应的消毒剂可对系统进行有效消毒,消毒效果完全。     

简析猴B病毒在人类的致死性

非人灵长类动物与人类具有相似的遗传、解剖和生理结构,广泛应用于生物医学研究。猴B病毒(猴疱疹病毒1型)是一种非人灵长类所携带的人兽共患病原体,当感染其自然宿主恒河猴时没有明显的临床症状,但感染人类时,可引起人类致死性脑炎、脑脊髓炎和神经系统后遗症的发生。本文将简要分析猴B病毒感染人类造成严重后果的原因。