preS1-preS2-HBsAg真核表达载体的构建及在293细胞中的表达

目的研究含有前S1抗原、前S2抗原的乙肝病毒外膜蛋白(前S1蛋白+前S2蛋白+S蛋白)的跨膜特性。方法依据乙肝病毒大外膜蛋白的计算机模拟图将其分为分别命名为HBsAg1(1-174),HBsAg2(1-245),HBsAg3(1-294),HBsAg4(1-341),HBsAg5(1-373),HBsAg6(1-400),最终累加成一条连续的长链状态,贯穿在细胞内外形成四次跨膜区,并以此6个片段为模板设计6对引物。从含有乙肝病毒外膜蛋白基因的质粒pcDNA3.1-preS1-preS2-HBsAg中扩增出前S1,S2基因,采用重叠延伸PCR方法连接人尿激酶原信号肽+6×组氨酸(His)+前S1蛋白、前S2蛋白+HBsAg(1～6)+血细胞凝集素(HA);PCR产物经XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后插入经同样处理的真核表达载体pIRES2-EGFP,构建含有Pro-UK,6×His,preS1,preS2,HBsAg跨膜序列及HA的表达载体pIRES2-EGFP/Pro-UK-6×His-preS1-preS2-HBsAg(1～6)-HA,该表达载体应能够共表达乙肝病毒外膜蛋白和绿色荧光蛋白。采用阳离子脂质体法将构建好的表达载体转染293细胞,经G418加压筛选阳性克隆,并进一步通过荧光观察、蛋白质免疫印迹、免疫双标等方法检测目的蛋白在293细胞的表达。结果 PCR结果显示,电泳片段大小符合HBsAg1～HBsAg6片段的600,810,957,1098,1194和1275 bp理论值。酶切鉴定正确的重组质粒测序结果与预期序列完全一致。转染和单克隆筛选后得到转染成功的HBsAg1～HBsAg6的293细胞,呈亮绿色,细胞形态良好,荧光表达强度高;Western印迹结果显示,在相对分子质量31 000,34 000,44 000,47000,54 000和60 000处有明显的阶梯状蛋白信号,条带清晰并与理论值相一致。结论成功构建了含有前S1、前S2蛋白的乙肝外膜蛋白基因的真核表达载体,并获得了能共表达乙肝外膜蛋白跨膜序列和绿色荧光蛋白的293细胞系。     

妇科病人镜检异常直接转诊有利于治疗吗？

英国伯明翰妇科医院的调查显示，涂片检查异常时，病人需等一段时间才能接受转诊治疗。本文旨在调查研究直接转诊政策对病人整个疾病过程的影响。     

高频电灼治疗面部毛细血管扩张症

高频电灼治疗面部毛细血管扩张症强志鹏兰空机关门诊部（７３００００）时吉萍兰医第一附属医院（７３００００）面部毛细血管扩张症，西北地区发病率极高，我们于１９９３年１０月—１９９６年１０月，在兰州专科门诊治疗１１５２例，报告如下。１临床资料１．１一般资料...     

桃叶药用临床研究及其开发前景

桃叶药用临床研究及其开发前景强志鹏兰州空军门诊部（７３００００）时吉萍兰医一院中医科（７３００００）谢光教务处（７３００００）桃叶为蔷薇科植物桃（Ｐｒｕｎｕｓ．ｐｅｒｓｉｃａ（Ｌ）Ｂａｔｓｃｈ）的叶子，全国广有分布，尤其我省兰州市安宁区栽培机构历史悠...     

代谢组学在中药研究中的应用

运用代谢组学方法研究中药具有良好的发展前景。文章对代谢组学的基本知识进行简要介绍,对代谢组学方法在中药安全性、复方作用机制、活性成分代谢、质量控制等方面的应用进行综述,探讨该方法在中药研究中的可行性。代谢组学为中药研究提供了新的思路。     

高效液相色谱法测定维C银翘片中绿原酸的含量

目的：采用HPLC法建立维C银翘片中绿原酸含量的测定。方法：采用Sino Chrom ODS-AP（4．6mm×250mm,5μm）色谱柱,检测波长为327nm,流动相为甲醇-乙腈-水-冰醋酸（20：10：70：1）,pH=2.9,流速为1.0ml／min。结果：绿原酸在0．108～1.080μg范围内呈良好的线性关系（r=0.9995）;平均回收率为97．27％,RSD=1．09％。结论：该法操作简便、快速、准确,可作为维C银翘片质量控制的依据。     

高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱（HHT）对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,Ic50为43．89rig／ml。HHT10ng／ml作用48h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0／G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。     

《药物临床试验质量管理规范》（GCP）在临床研究中的价值及我国研究者的依从情况

随着我国临床试验逐步走向全球化,<药物临床试验质量管理规范>(good clinical practice,GCP)[1-2]也已越来越多地被重视和遵循.但是,研究者在实施临床试验中对GCP的遵循仍然存在诸多问题,需要各方共同努力建立质量保证体系,加速专业人才培养.本文即对我国临床试验中GCP存在的主要问题做一概述,期望能为研究者更好地遵循GCP起到些许帮助.     

深圳市医学科技计划项目立项结题情况及发展策略

目的 总结分析医学科技计划项目开展的现状、存在的亮点及问题,提出相应的发展策略建议。方法本研究采用横断面研究设计,分析2016—2021年深圳市立项的医学科技计划1880项基本情况以及2016—2017年已结题558个项目的绩效产出数据。结果 2016—2021年度医学科技计划项目共立项资助1880项,共依托97家单位,总资助金额累计10亿,增长百分比93.9%。基础研究专项占资助项目总数93.4%,资助总金额6.1亿,占总项目资助金额60.3%。医学科技计划中医疗卫生机构类项目总计1692项,其中基层机构及区级医疗机构（未定级、一级、二级）资助力度较小,立项比例为7.2%,资助金额仅占医疗卫生机构类总金额3.0%。2016—2017完成结题项目558项,绩效指标包括发表文章、培养人才、科技奖以及专利申请数量,总计培养人才762名,申请专利448项,专利授权184项,发表论文2061篇。结论 医学科技计划项目加强规划临床研究专项,建立多层级临床研究中心体系,完善科技项目管理各个环节机制、分层分类管理,强化科技成果转化应用四方面的支撑,逐步转向临床研究新方向。     

首例TCR-T细胞治疗晚期胰腺癌的伦理审查实践

回顾性报告北京大学深圳医院伦理委员会对院内开展的首例TCR-T技术治疗晚期胰腺癌个案研究进行伦理评估、讨论、审查和做出决定的情况,讨论的问题包括该案例的性质、风险获益评估、知情同意以及风险控制。最后提出加强创新性治疗研究项目的监管,运用医患共同决策模式实行充分有效的知情同意和提升伦理实质审查能力等三个方面的建议,以期为伦理委员会审查细胞治疗等前沿技术的临床研究项目提供参考。