GKN2在胃癌细胞增殖、转移中的作用及机制

目的 探讨胃动蛋白2(gastrokine 2,GKN2)对胃癌细胞的生长增殖、侵袭、转移的影响及分子机制.方法 利用qRT-pCR和Western blot法检测GKN2在胃癌组织中的表达;构建对照细胞株AGS-CON、SGC-7901-CON与GKN2过表达细胞株AGS-GKN2、SGC-7901-GKN2,应用q...     

三种标记法对脐血CD34+造血干细胞绝对计数的比较分析

CD34抗原的相对分子质量为105000～120000，选择性表达于早期造血干/祖细胞、小血管内皮细胞和胚胎纤维母细胞表面，该抗原在原始造血中表达最强，随着细胸分化、其表达水平逐渐减弱直至消失，因此一直作为干/祖细胞表面的一种特征性标志而广泛应用于造血干细胞基础研究和临床。脐带血中含有丰富的造血干/祖细胞，被认为是极具潜力的继骨髓和外周血后的第3种造血干细胞来源。     

吉非替尼敏感性预测指标的研究现状

吉非替尼是一种表皮生长因子受体酪氨酸激酶(EGFR-TK)抑制剂,其适应证为治疗既往接受过化学治疗(化疗)的局部晚期或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)病人。既往的化疗采用铂剂和多西他赛。吉非替尼的临床研究结果表明它对某些NSCLC效果明显,如何选择对该药敏感的病人的研究成为焦点,本文对该方面研究的结果予以综述。     

蛋白指纹图谱在原发性肝癌中医辨证分型应用的初步研究

目的应用表面加强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）检测肝细胞性肝癌患者血清蛋白质指纹图谱,筛选特异性候选标志物。方法应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术检测56例肝郁气滞证和55例肝胆湿热证肝癌患者血清,获得弱阳子交换型蛋白质芯片（CM10）蛋白表达图谱,用Marker Wizard软件分析差异蛋白并经数据库搜索初步鉴定。结果应用CM10在肝郁气滞证和肝胆湿热证肝癌血清中检测到在不同质荷比（M/Z）有2个差异蛋白质峰8 576 Da、8 780 Da,其蛋白质含量有显著性差异（P〈0.05）。经蛋白质数据库搜索,与这2种差异蛋白质分子量最接近的蛋白质分别为细胞色素C6和细胞色素C氧化酶合成因子5。结论应用SEIDI-T0F-MS可以筛选不同中医证型肝癌患者血清特异性生物标志物,检测到的2个差异蛋白质可能是鉴别肝郁气滞型与肝胆湿热型的血清生物学指标。     

单倍体相合细胞移植诱发小鼠移植物抗肿瘤效应的分析

目的:异基因造血干细胞移植是治疗恶性肿瘤的一种有效方法,但在异基因造血干细胞移植时,如何在减轻移植物抗宿主病的同时保留并加强移植物抗肿瘤效应是目前临床面临的一大课题.观察输注经与未经60Co照射的单倍体相合细胞治疗CB6F1小鼠肝癌模型中移植物抗宿主病临床表现,探讨输注经照射单倍体相合细胞在治疗实体增中减轻移植物抗宿主病的作用.方法:实验于2006-0312007-03在福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室和福建省疾病预防控制中心动物房完成.①实验材料:来源于BABL/C小鼠的肝癌H22细胞株由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供.SPF近交系小鼠由北京维通利华实验动物技术有限公司提供.实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:以皮下接种肝癌细胞(H22)的CB6Fl(BABL/C×C57BL/6杂交鼠,简称F1)雌性小鼠为受体鼠,经环磷酰胺腹腔化疗后,取C57BL/6小鼠的新鲜骨髓及脾脏细胞作为供体细胞,供体细胞分为经60Co照射和未经60Co照射.将F1小鼠随机分为3组:单纯化疗组、化疗 未经60Co照射细胞组、化疗 经60Co照射细胞组.观察3组小鼠移植物抗宿主病表现,并给予临床评分.⑨实验评估:于移植后第17天取小鼠皮肤、肠、肝、脾组织制备病理切片,观察移植物抗宿主病病理学改变所反应的情况,并检测小鼠瘤重和抑瘤率.结果:①化疗 经60Co照射细胞组小鼠移植物抗宿主病的临床表现明显轻于化疗 未经60Co照射细胞组(P＜0.05).②化疗 经60Co照射细胞组小鼠的皮肤、肠、肝、脾组织移植物抗宿主病的细胞病理学改变轻于化疗 未经60Co照射细胞组.③单纯化疗组与化疗 未经60Co照射细胞组、化疗 经60Co照射细胞组瘤重比较差异显著[(1.34±0.45)g,(0.6±0.38)g,(0.28±0.15)g,P＜0.05].化疗 未经60Co照射细胞组抑瘤率为55.22%,化疗 经60Co照射细胞组抑瘤率为79.22%.结论:供体细胞经7.5Gy 60Co照射的单倍体相合移植能诱发荷H22实体瘤小鼠产生移植物抗肿瘤效应,同时降低移植物抗宿主病的程度.     

肝癌切除肝缺血再灌注损伤前后的蛋白质组学变化

背景：肝癌切除肝缺血再灌注损伤可促进微小转移灶的侵袭转移并引起线粒体损伤。目的：比较肝癌切除手术过程中肝正常组织缺血再灌注损伤前后蛋白质表达谱的改变,筛查发生肝缺血再灌注损伤应激的相关蛋白质分子标志物并探讨可能机制。方法：应用双向等电聚焦/聚丙烯酰胺凝胶电泳建立20例肝癌切除患者肝缺血再灌注前与灌注后15min肝正常组织的全细胞蛋白质和线粒体蛋白质表达图谱,并进行差异分析,应用基质辅助激光解吸离子化串联时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定,并进行生物信息学分析。结果与结论：相同条件下对各组全细胞和线粒体蛋白样品分别进行3次双向电泳,筛选在3次电泳中均存在的差异点进行分析,在全细胞蛋白质图谱中共鉴定出5个差异蛋白,在线粒体蛋白质图谱中未鉴定出明显的差异蛋白。结果可见肝癌切除手术过程中肝缺血再灌注15min即可使细胞骨架蛋白、热休克蛋白等细胞保护蛋白表达发生改变,同时有促进肿瘤转移的风险,需要采取预防措施降低影响,但线粒体蛋白表达基本未发生改变。     

乙型肝炎病毒X蛋白通过DNMT3A诱导肝癌细胞RUNX3基因高甲基化

目的研究肝癌细胞中乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对抑癌基因Runt相关转录因子3(RUNX3)表达的影响及相关作用机制,探讨乙肝病毒促肝癌发生的表观遗传调控。方法HBx重组表达载体转染5-aza-CdR处理或未处理的Huh7、HepG2肝癌细胞,Western Blot及RT-qPCR检测RUNX3 的表达,分析RUNX3基因启动子CpG岛甲基化水平。合成DNA甲基转移酶3A的小干扰RNA(siRNA_3A)单独转染或与HBx共转染,检测RUNX3的表达。PCR检测21例手术切除的肝细胞癌新鲜组织标本HBx表达情况,比较HBx阴性与HBx阳性组织样本间RUNX3的表达差异以及启动子甲基化程度。结果过表达HBx可导致肝癌细胞内RUNX3表达下调,且甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR可完全阻断HBx对RUNX3的抑制作用。HBx诱导RUNX3基因启动子CpG岛发生高甲基化,但不影响DNA甲基转移酶的表达。siRNA_3A转染肝癌细胞后,RUNX3 mRNA与蛋白表达均显著上调;其与HBx共转染后,逆转了单独HBx对RUNX3的抑制作用。HBx阳性的肝癌组织中RUNX3 mRNA表达水平较HBx阴性组低,且RUNX3启动子甲基化程度也相对较高。结论HBx通过促进RUNX3启动子区域发生高甲基化而抑制其表达,且这一过程是由DNMT3A所介导的。     

血清Cyfra21-1和SELDI技术联合检测肺鳞癌的临床意义

目的探讨血清Cyfra21-1和SELDI技术联合应用在肺鳞癌患者中的诊断意义。方法应用电化学发光技术对59例病理确诊肺鳞癌患者和60例健康对照者血清进行Cyfra21-1检测, 同时应用SELDI-TOF-MS和CM10芯片检测该血清,分析两种手段的联合诊断价值。结果电化学发光法单项检测Cyfra21-1的敏感度为77.966%、特异性为96.667%。应用SELDI技术以及肺鳞癌诊断模型进行分析,敏感度为83.051%、特异性为65.385%。而联合检测的敏感度为 94.915%、特异性为95.000%。结论与单用电化学发光法检测Cyfra21-1相比,联合SELDI技术检测更能提高肺鳞癌诊断的敏感度。联合检测的特异性也比单独使用SELDI技术有明显提高。     

表观遗传修饰介导抑制SOSTDC1表达促进宫颈癌细胞的恶性生物学行为

目的：探究含硬化蛋白域蛋白1（SOSTDC1）对宫颈癌细胞恶性生物学行为的调控及其分子机制。方法：收集2020年8 月至2022 年5 月间在福建省肿瘤医院活检或手术切除的53 例宫颈癌组织和相应的癌旁组织标本,免疫组化法检测SOSTDC1 蛋白在宫颈癌组织及相应癌旁组织中的表达,qPCR 法检测正常宫颈细胞、宫颈癌细胞中SOSTDC1 mRNA 表达;将SOSTDC1 过表达慢病毒（OE-sostdc1）和对照空病毒（NC）感染宫颈癌细胞SiHa 及CaSki,将其分为SiHa-OE-sostdc1、SiHa-NC、CaSki-OE-sostdc1、CaSki-NC 组,采用WST-1法、细胞集落形成实验、Transwell 实验和WB法检测转染各组SiHa 及CaSki 细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力和BMP、Wnt/β-catenin 信号途径相关蛋白及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白的表达。用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂2''-脱氧胞苷（5''-Aza-CdR）处理宫颈癌细胞后采用qPCR和WB法检测SOSTDC1 mRNA及蛋白的表达变化,用甲基化特异性PCR（MSP）检测5 例配对宫颈癌组织与癌旁组织中SOSTDC1 基因启动子区甲基化水平,同时qPCR 检测其SOSTDC1 mRNA水平。结果：与癌旁组织比较,SOSTDC1蛋白在宫颈癌组织中呈低表达（P<0.01）,且与淋巴结转移与FIGO分期有关联（均P<0.05）;与正常宫颈HUCEC细胞比较,SOSTDC1 mRNA 在宫颈癌C33A、HeLa、SiHa、CaSki 细胞中均呈低表达（均P<0.01）。过表达SOSTDC1显著抑制SiHa 及CaSki 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.05）。WB法结果检测显示,过表达SOSTDC1 显著抑制 SiHa 及 CaSki 细胞中磷酸化 Smad、Dvl2/3、β -catenin、VIM、N-cadherin、Snail 蛋白的表达（均P<0.05）,5''-Aza-CdR 处理后的SiHa 及CaSki 细胞中SOSTDC1 mRNA和蛋白水平均显著增加（均P<0.05）,MSP检测结果显示,相较于癌旁组织,宫颈癌组织中SOSTDC1基因启动子区呈高度甲基化,且SOSTDC1 mRNA水平降低（P<0.01）。结论：SOSTDC1在宫颈癌组织中呈低表达且与肿瘤的恶性进展关联,其表达下调与其基因启动子区高度甲基化有关,过表达SOSTDC1 可能通过阻断BMP及Wnt/β-catenin信号通路从而抑制SiHa、CaSki细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

乳腺癌患者血清HER2的检测及其临床意义

目的：探讨乳腺癌患者血清HER2水平与组织HER2水平和临床病理特征的关系,分析其对患者治疗药物选择和预后预测的意义。方法：选择福建省肿瘤医院2008年1月至10月经病理证实的乳腺癌患者67例,乳腺良性肿瘤患者20例,另选择体检健康女性20例。应用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织HER2的表达,ELISA法检测血清HER2的表达水平。结果：乳腺癌患者血清HER2水平及阳性率均高于健康女性及乳腺良性肿瘤患者（P<0.05）;组织HER2阳性乳腺癌患者血清HER2水平及阳性率均高于组织HER2阴性乳腺癌患者（P<0.05）,且血清HER2阳性率与组织HER2表达状态正相关,血清学检测方法与组织学检测方法一致性较好;部分组织HER2阴性乳腺癌发生复发转移后血清HER2增高,复发转移性Ⅳ期患者血清HER2阳性率高于Ⅰ〖DK〗～Ⅲ期患者（P<0.05）。结论：乳腺癌患者中血清HER2水平增高,其阳性率与组织HER2表达状态及临床分期相关,该检测对乳腺癌的诊断、评价HER2状态及判断预后有一定意义。